科研产出
不同水平单宁复合蛋白对黄羽肉鸡免疫功能、抗氧化能力以及脂代谢的影响
《中国农业大学学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为研究小麦-豆粕-花生粕型基础饲粮中添加不同水平单宁复合蛋白对1~48日龄黄羽肉鸡生长性能、血浆生化指标、免疫功能、抗氧化能力以及脂代谢的影响,540只初始体重为(40.33±0.05)g且健康状况良好的1 日龄快大型麻黄肉公雏按照体重一致原则随机分为对照组(基础饲粮),单宁复合蛋白1组(基础饲粮添加300 mg/kg单宁复合蛋白),单宁复合蛋白2组(基础饲粮添加500 mg/kg单宁复合蛋白)共3个处理组,每组6个重复,每个重复30只鸡.试验期48 d.结果表明:1)不同处理组之间肉鸡生长性能差异不显著(P>0.05).2)与对照组相比,单宁复合蛋白1、2组血浆中谷丙转氨酶(ALT)活性和尿酸(UA)含量均显著升高(P<0.05),且单宁复合蛋白2组血浆中葡萄糖(GLU)含量显著降低(P<0.05),单宁复合蛋白1组血浆中总胆红素(TBIL)含量显著降低(P<0.05).3)与对照组相比,空肠黏膜中白细胞介素6(IL-6)含量在单宁复合蛋白1组中显著降低(P<0.05).4)与对照组相比,单宁复合蛋白2组血浆中微量丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05),同时,肝脏中总抗氧化能力(T-AOC)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量均显著升高(P<0.05).5)与对照组相比,肝脏中雌二醇(E2)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量以及脂肪合成酶(FAS)活性在单宁复合蛋白1、2组中均显著降低(P<0.05).综上,小麦-豆粕-花生粕型饲粮中添加300和500 mg/kg的单宁复合蛋白均可调节肉鸡脂代谢,同时300 mg/kg单宁复合蛋白可提高肉鸡免疫功能,500 mg/kg单宁复合蛋白可提高肉鸡抗氧化能力;综合考虑以上指标和生长性能,推荐单宁复合蛋白的添加量为300 mg/kg.
关键词： 单宁复合蛋白 黄羽肉鸡 生长性能 免疫功能 抗氧化能力 脂代谢
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鸭坦布苏病毒贵州株分离鉴定及其E基因生物信息学分析
《扬州大学学报(农业与生命科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：从贵州三穗县某鸭场的病鸭病料中分离出1株坦布苏病毒（tembusu virus, TMUV）,经鉴定将其命名为TMUV-GZ。为了解该分离株的生物学特性及其E基因的分子特点，测定TMUV-GZ株的半数胚致死量(ELD50),将病毒接种至不同宿主细胞，观察其适应性与增殖能力；对E基因克隆测序并进行序列分析，对其编码的蛋白质进行生物信息学分析。结果表明：TMUV-GZ株能导致鸡胚和鸭胚死亡，该分离株无血凝性，在鸭胚上的ELD50为10-2.63·（0.2 mL）-1;该分离株能在Vero细胞、BHK-21细胞和DF-1细胞上增殖，对BHK-21细胞适应性最好。该分离株的E基因与泰国分离株DK/TH/CU-99核苷酸同源性最高，为98.3%;一级结构预测E蛋白的理论等电点为5.01,不稳定系数为39.5,为稳定蛋白质；二级结构预测该蛋白质以α-螺旋、β-折叠、β-转角较多，为亲水性蛋白质，可能存在10个优势抗原表位、2个跨膜区、3个结构域，无信号肽；三级结构预测该蛋白质模型结构与其他黄病毒E蛋白实验结构之间具有良好的一致性。综上，这一研究为TMUV亚单位疫苗和基因工程疫苗的研制提供了理论依据。
关键词： 坦布苏病毒 培养特性 E基因 克隆 生物信息学分析
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管式磁微粒非洲猪瘟病毒pp62蛋白化学发光抗体检测方法的建立
《微生物学通报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【背景】非洲猪瘟（African swine fever, ASF）作为高致病性传染病，给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失，因此建立快捷、灵敏的诊断方法至关重要。【目的】建立一种管式非洲猪瘟病毒pp62蛋白化学发光抗体检测方法。【方法】以重组pp62蛋白作为包被抗原，羧基磁珠（carboxylic magnetic beads）作为固相载体，碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, AP）标记的兔抗猪IgG作为酶标二抗，通过对反应条件进行优化，采用非洲猪瘟国家参考品作为溯源血清绘制出标准曲线，建立基于ASFVpp62蛋白的化学发光抗体检测方法。【结果】用建立的化学发光方法检测277份临床样品血清，通过受试者工作特征（receiver operating characteristic, ROC）曲线分析确定阴性、阳性临界值，并确定判定标准：浓度值＞140.02 U时为抗体阳性，浓度值＜140.02 U时为抗体阴性。此方法对6种不同的病原血清抗体进行检测均无交叉反应，且批内和批间变异系数均在10%以内，与商品化非洲猪瘟抗体检测试剂盒的符合率达96.7%。【结论】本研究建立的管式非洲猪瘟病毒化学发光抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可为非洲猪瘟早期监测及试剂盒研发提供参考。
关键词： 非洲猪瘟病毒 重组pp62蛋白 羧基磁珠 化学发光检测方法
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香蕉果实酵母双杂交文库的构建及后熟转录因子MaMADS2互作蛋白筛选
《南京农业大学学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]本文旨在鉴定香蕉果实后熟关键调控因子MaMADS2的互作蛋白，深入解析MaMADS2影响香蕉果实后熟过程的分子机制。[方法]以MaMADS2为诱饵利用酵母双杂交文库获得候选互作蛋白，通过克隆候选互作基因编码区进行点对点酵母双杂交试验来验证互作情况；利用转录组学分析互作蛋白相关基因在后熟过程中的表达情况；利用双分子荧光互补试验鉴定重要互作蛋白与MaMADS2的互作；最后用蛋白免疫印迹分析MaMADS2蛋白在香蕉后熟过程中的表达。[结果]成功构建了果实在乙烯利催熟下的cDNA文库，初级和次级文库的库容分别为2.9×10~6和3.2×10~6 CFU·mL-1,平均插入片段大小在1 200 bp以上，可满足后续酵母双杂交筛选的要求。最终共鉴定出7个互作蛋白，其中有2个MADS-box转录因子，3个E3泛素连接酶，2个具有转录抑制作用的蛋白。转录组数据表明，乙烯利可抑制2个MADS-box基因的表达，而1-甲基环丙烯（1-MCP）对其表达起诱导作用。双分子荧光互补试验表明，MaMADS2与MADS-box转录因子Ma04＿p30020.1存在互作关系。蛋白免疫印迹分析显示，MaMADS2在后熟过程中蛋白水平逐渐降低，这与其可以和E3泛素连接酶互作是一致的。[结论]通过构建高质量的果实cDNA文库与酵母双杂交筛库技术，鉴定出多个与MaMADS2互作的蛋白，并明确了MaMADS2与另一MADS-box转录因子Ma04＿p30020.1之间存在明显的互作关系。
关键词： 香蕉 酵母双杂交文库 MaMADS2 互作蛋白 果实成熟
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CaASR3基因沉默对辣椒抗旱性的影响
《北方园艺 》 2023 北大核心
摘要：以'遵辣1号'辣椒为试材,利用VIGS技术获得CaASR3基因沉默后植株,研究了CaASR3基因在干旱胁迫响应中的作用,以期为辣椒抗旱机理的研究提供分子基础.结果表明:基因沉默后,沉默植株CaASR3基因表达量在0、3、6、12 h显著低于对照植株;干旱处理后,CaASR3基因沉默植株叶片比对照植株失水萎蔫严重,过氧化物酶活性、脯氨酸含量、可溶性糖含量以及相对电导率显著上升,相对含水量显著降低,说明沉默CaASR3基因导致辣椒耐旱能力减弱.因此,CaASR3基因参与了辣椒抗旱调节途径.
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香蕉种苗中枯萎病菌和细菌性软腐病菌实时荧光PCR检测
《农业研究与应用 》 2023
摘要：香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌复合侵染且潜伏期较长,建立香蕉种苗病害早期监测的分子检测方法非常重要.本文基于尖孢镰刀菌古巴专化型1号生理小种(Fusarium oxy-sporum f.sp.cubense race 1,FOC1)基因组Contig 438区间(35631~37693 bp)(GenBank:AMGP01000438.1)设计特异扩增引物qFOC1-F/-R、4号生理小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4,FOC4)基 因 组 Contig 195 区 间(4028~6126 bp)(GenBank:AMGQ01000195.1)设计特异扩增引物qFOC4-F/-R,同时以香蕉细菌性软腐病菌Dickeya zeae的促旋酶B 亚单位基因(Subunit B of gyrase gene)(GenBank:JQ284039)序列设计特异扩增引物qgyrB-F/-R.qPCR检测结果显示:实时荧光检测引物扩增特异性强.通过拟合曲线方程分析得到:检测香蕉枯萎病菌的DNA浓度最低限为3 pg·μL-1,细菌性软腐病菌的菌液浓度最低限灵敏度为70 cfu·mL-1,检测灵敏度较高,结果稳定可靠.因此,本研究建立的实时荧光PCR检测方法可有效应用于检测香蕉种苗中的香蕉枯萎病菌和细菌性软腐病菌,确保种苗的安全生产.
关键词： 尖孢镰刀菌古巴专化型1号菌 尖孢镰刀菌古巴专化型4号菌 玉米迪基氏菌 实时荧光PCR 检测
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自发气调包装对芥蓝采后叶绿素降解及品质保持的影响
《食品科学技术学报 》 2023 EI 北大核心 CSCD
摘要：为了探究不同自发气调包装对芥蓝贮藏期间品质与叶绿素降解的影响,分别用市售低密度聚乙烯(LDPE)微孔保鲜袋和2种改性LDPE气调袋包装贮藏采后芥蓝,定期测定包装袋内气体及品质变化相关指标.结果表明:在15℃贮藏期间,对照袋内O_(2)与CO_(2)体积分数无明显变化,而气调袋内O_(2)在贮藏初期迅速下降,CO_(2)快速积累.2种改性气调袋包装均减缓了叶片黄化、失重速率,维持了叶片较高的叶绿素、维生素C、可溶性蛋白质量比.贮藏3 d时,2种改性LDPE气调袋包装组商品率为100%,叶绿素质量比分别下降了14.67%、4.74%;而对照组商品率仅为51.25%,叶绿素质量比下降了26.47%.通过测定叶绿素降解酶活性及检测相关基因表达分析发现,芥蓝叶片黄化衰老过程中叶绿素含量的变化受到CLH1、PPH、PAO、RCCR、NYC基因表达量的调节,且CLH1主要在芥蓝叶片初始衰老过程叶绿素的降解中起作用.自发气调袋包装可减缓芥蓝的生理代谢变化,抑制叶绿素降解酶基因表达变化,延缓叶片黄化,研究结果旨在为控制芥蓝采后品质劣变及贮藏保鲜提供理论依据.
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鸭腺病毒3型Fiber-2基因的克隆与原核表达
《养禽与禽病防治 》 2023
摘要：鸭腺病毒3 型(Duck adenovirus serotype 3,DAdV-3)是近年来我国新发的鸭源腺病毒.本研究利用PCR技术扩增DAdV-3 Fiber-2基因,并将其克隆至pET32a原核表达载体上,构建pET32a-Fiber-2 重组表达质粒.通过菌液PCR鉴定、酶切鉴定并测序分析后,将其转化BL21(DE3)感受态细胞.IPTG诱导pET32a-Fiber-2表达,然后进行SDS-PAGE、重组蛋白可溶性分析以及Western blot试验.本研究利用原核表达系统成功表达出具有生物活性的DAdV-3 Fiber-2蛋白,为后续开展DAdV-3 Fiber蛋白的功能研究等奠定了基础.
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5-氮杂胞苷对苦瓜果实成熟及转录表达谱的影响
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究5-氮杂胞苷（5-azaC）对苦瓜果实成熟和基因表达模式的影响，为解析苦瓜果实成熟的分子调控机制提供理论依据。【方法】以苦瓜（Momordica charantia L.）高世代自交系E12201-e1为材料，利用50 mmol/L 5-azaC处理绿熟期（授粉后18 d）苦瓜果实，以ddH2O处理为对照，观察处理组（TR）和对照组（CK）果实的表型变化，并利用RNA-seq技术比较TR和CK苦瓜果肉组织中的转录水平差异。【结果】50 mmol/L 5-azaC处理能明显延迟苦瓜果实成熟。RNA-seq获得的数据质量较高，可满足后续分析需求。通过筛选共获得1 773个差异表达基因（DEGs）,其中1 007个上调基因，766个下调基因。GO和KEGG分析结果表明，DEGs主要富集在细胞组分和分子功能模块，217个DEGs共富集到93条代谢通路中，其中30个DEGs显著富集到光合作用和苯丙烷类生物合成通路。8个DEGs参与细胞壁代谢过程，其中6个基因在5-azaC处理中下调表达。共获得681个差异表达转录因子（TFs）,分属于220个TF家族。12个DEGs的qRT-PCR结果与RNA-seq结果变化趋势一致。【结论】5-azaC处理抑制苦瓜果实成熟，并影响果实成熟相关基因的表达模式。
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