羊源A1和A2血清型溶血性曼氏杆菌白细胞毒素A真核表达载体构建

王娜; 苏胜杰; 白帆; 戴伶俐; 张帆; 宋越; 包凤英; 周璇; 赵世华; 张月梅; 《畜牧与饲料科学 》 2025

摘要：[目的]扩增羊源A1和A2血清型溶血性曼氏杆菌白细胞毒素A(leukotoxin A,LktA)基因，构建2个血清型菌株的LktA蛋白真核表达载体。[方法]以A1和A2血清型溶血性曼氏杆菌的基因组DNA为模板，利用设计的特异性引物，采用PCR法扩增LktA基因；利用真核表达载体Morange2-C1分别与扩增获得的A1和A2血清型菌株LktA基因构建A1和A2血清型菌株LktA蛋白的重组真核表达载体；对重组真核表达载体进行双酶切（Eco RⅠ和KpnⅠ）和测序鉴定，将鉴定正确的重组真核表达载体采用脂质体转染法转染至293T细胞。转染48 h后，提取细胞总蛋白，利用Western blotting技术，以Anti-mOrange Monoclonal Antibody为一抗、Goat Anti-Mouse IgG为二抗进行鉴定。同时，利用激光共聚焦显微镜对目的蛋白进行亚细胞定位。[结果]以A1和A2血清型溶血性曼氏杆菌基因组DNA为模板，通过PCR技术成功扩增出2株菌的LktA基因，琼脂糖凝胶电泳结果显示均获得1条约2 862 bp的目的条带，与预期片段大小相符。重组真核表达载体经Eco RⅠ和KpnⅠ双酶切后，经琼脂糖凝胶电泳呈现2条清晰条带，其片段大小与预期目的片段及线性化载体大小相符。对双酶切后的重组质粒进行测序分析，结果表明双酶切产物测序序列与原始设计序列的一致性达100%，证实重组表达载体构建成功。细胞转染及Western blotting鉴定结果显示，A1血清型菌株LktA蛋白真核表达载体Morange2-C1-LktA1及A2血清型菌株LktA蛋白真核表达载体Morange2-C1-LktA2在293T细胞中成功表达，在约130 kDa处观察到特异性目的条带。激光共聚焦显微镜观察结果表明，2株菌株的LktA蛋白均定位在细胞膜上。[结论]成功构建了羊源A1和A2血清型溶血性曼氏杆菌的LktA蛋白真核表达载体，确定了其亚细胞定位，为后续研究LktA与宿主受体相互作用的分子机理提供了参考。

关键词： 溶血性曼氏杆菌 真核表达载体 白细胞毒素 致病机理

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雨淋对苜蓿干燥过程中营养品质及真菌菌群结构的影响

刘丽英; 王玉芝; 刘志刚; 刘红梅; 杨溢文; 丁霞; 孙林; 《草地学报 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：雨淋极易造成北方地区2、3茬苜蓿干草调制过程中发霉变质，为探究紫花苜蓿（Medicago sativa L.）干燥过程中雨淋对其营养品质变化及真菌群落演替的影响，本试验测定分析雨淋和未雨淋处理下干燥过程中苜蓿的含水量、营养成分及真菌群落结构。结果表明：收获时淋雨可导致苜蓿干燥时间延长3～4 d。与未雨淋苜蓿相比，雨淋组苜蓿干燥第9 d时，其粗蛋白质（Crude protein,CP）、可溶性蛋白（Soluble protein,SP）、可溶性碳水化合物（Water soluble carbohydrates,WSC）含量分别显著降低了6.49%,0.92%,0.83%，中性洗涤纤维（Neutral detergent fiber,NDF）和酸性洗涤纤维（Acid detergent fiber,ADF）含量分别显著升高了3.60%和3.81%(P<0.05)。随干燥时间延长，雨淋组和未雨淋组苜蓿的干物质（Dry matter,DM）、NDF及ADF含量均显著上升，CP,SP,WSC含量均显著下降。苜蓿干燥过程中主要有7类霉菌（Alternaria, Mycocentrospora,Ascohyta, Fusarium, Moesziomyces,Stemphylium,Cladosporium）附着于干草表面，雨淋可使苜蓿干草7类霉菌丰度值之和增加13.89%。随着干燥时间的延长，菌刺孢属与CP呈极显著负相关，与SP、WSC呈显著负相关。综上所述，雨淋显著延长苜蓿干燥时间，加剧苜蓿营养流失与霉变风险。

关键词： 雨淋 干燥 苜蓿干草 营养品质 真菌

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PEG模拟干旱胁迫下11份野生冰草种质资源萌发期抗旱性评价

伊风艳; 孙世贤; 郭呈宇; 闫晓红; 房永雨; 杨鼎; 丁海君; 《新疆农业科学 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：【目的】通过PEG模拟水分胁迫筛选出耐旱冰草种质资源。【方法】收集11份野生冰草为试验材料，分析不同浓度的聚乙二醇（PEG-6000）模拟干旱胁迫对其种子相对发芽势（PGR）、相对发芽率（RGP）、相对发芽指数（RGI）、相对活力指数（RVI）、相对苗高（RSH）和相对根长（RRL）的影响，并采用隶属函数法对抗旱性进行综合评价。【结果】PEG模拟干旱胁迫对11份野生冰草种质资源萌发期各指标均有影响，且材料间差异明显，但各项指标均随着PEG浓度的增加呈下降趋势。低浓度（5%）的干旱胁迫对A₁、A₈和A₉各项萌发指标具有一定的促进作用，尤其是对RGR,RGI和RVI。随着PEG处理浓度的增加，11份野生冰草种质资源的各项萌发指标均受到了不同程度的抑制，尤其是对RSH和RRL抑制作用较强，当浓度达到25%时，A₃和A₄各项指标均被完全抑制。6个萌发指标间存在极显著正相关关系，相关系数在0.831～0.981,RGP与RGI的相关性最高。11份野生冰草种质资源的D值范围在0.387 7～0.504 5,其中，A₁和A₉的抗旱性优于其他材料。【结论】随着PEG-6000浓度的增加，11份野生冰草种质资源萌发期各个指标均表现出明显的差异，其抗旱性强弱依次为A₁>A₉>A₆>A₂>A₇>A₅>A₈>A₁₀>A₁₁>A₄>A₃。

关键词： 野生冰草 种质资源 种子萌发 抗旱性

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乳酸和过氧乙酸对蜡样芽孢杆菌生物膜的抑制作用及其机制

刘志林; 菅瑞珍; 贾伟娟; 陈云娇; 张鑫; 贾泽林; 崔佳宇; 张宇航; 熊慧生; 王学理; 《微生物学通报 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：【背景】近年来，蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)侵袭力不断增强，感染宿主范围不断扩大，而其生物膜的形成与侵袭力和毒力息息相关。【目的】对蜡样芽孢杆菌的生物膜形成能力进行了鉴定，并探究了乳酸(lactic acid, LA)和过氧乙酸(peroxyacetic acid, PAA)对B. cereus生物膜的抑制机理。【方法】通过分析生物膜抑制生长曲线、生物膜代谢活性、胞外基质成分(多糖和蛋白质)含量、形态及相关基因表达，来评估LA和PAA对蜡样芽孢杆菌生物膜形成作用的影响。【结果】蜡样芽孢杆菌可生成生物膜。LA和PAA对B. cereus的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)分别为0.252%、0.030%。生长曲线表明，1/2 MIC、MIC浓度的LA、PAA可显著抑制B. cereus生物膜的形成。由CCK-8法检测生物膜代谢活性可知，MIC浓度的LA和PAA使B. cereus生物膜的代谢活性分别降低了61.02%和69.27%。同时，由硫酸-苯酚法及考马斯亮蓝法对蜡样芽孢杆菌胞外多糖及胞外蛋白检测结果可知，MIC浓度的LA、PAA处理组的胞外多糖分别降低了64.34%和79.14%，胞外蛋白质分别降低了78.96%和80.52%。通过结晶紫染色对生物膜进行显微镜下观察，结果显示1/4 MIC下的LA、PAA即可抑制蜡样芽孢杆菌生物膜的生成。另外，通过实时定量PCR确定，MIC下的LA、PAA显著抑制了蜡样芽孢杆菌生物膜相关基因(gapB, pgm, flgE, SigB, abrB,calY, sipW, tasA)的表达。【结论】LA、PAA可以作为安全的抗生物膜剂来抑制蜡样芽孢杆菌的生物膜形成。

关键词： 蜡样芽孢杆菌 生物膜 乳酸 过氧乙酸 抑菌机制

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能量和蛋白质水平在围产期母羊生产中的研究概况

卢艳芳; 别雪; 王泳; 李长青; 周玉香; 《中国饲料 》 2025 北大核心

摘要：日粮营养水平的高低会对围产期母羊产生多方面的影响。其中，作为动物必需营养物质的能量、蛋白质对母羊生产性能的发挥尤为重要，在实际饲养过程中必须制定合理的方案，确保能氮水平的充足和均衡，避免母羊生产性能的下降和不必要的健康风险。本文综述了不同能氮水平的日粮对围产期母羊生产性能、血液生化指标及繁殖性能的影响，以期为科学饲养管理提供参考。

关键词： 围产期母羊 营养水平 生产性能 繁殖性能

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养分专家系统在内蒙古玉米、向日葵和马铃薯推荐施肥中的应用与验证

赵青松; 段玉; 张君; 何萍; 李凤敏; 徐新朋; 《植物营养与肥料学报 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：[目的]针对内蒙古地区农民盲目施肥导致的作物产量潜力无法充分发挥、肥料利用率低下及土壤养分失衡等现状,采用基于产量反应和农学效率的养分专家系统,在内蒙古地区开展玉米、向日葵和马铃薯的推荐施肥田间试验,与农民习惯施肥相比较,验证该系统在提升内蒙古地区的产量、经济效益和养分利用率方面的可行性.[方法]于 2017-2023 年在内蒙古玉米、向日葵、马铃薯主产区开展 146 个田间验证试验,每个试验包括 5 个处理:基于养分专家系统的推荐施肥处理(NE),农民习惯施肥处理(FP),以及基于NE的不施氮肥(N)、不施磷肥(P)和不施钾肥(K)处理,从产量、净效益、养分吸收和肥料利用率等方面比较NE处理与FP处理间的差异.[结果]NE处理显著提高了玉米、向日葵和马铃薯的产量及经济效益(P<0.001),与FP处理相比,产量分别增加了1166、235、2433 kg/hm2,经济效益分别增加了1546、1572、2582元/hm2.NE系统平衡了氮、磷、钾肥用量,尤其提高了钾肥施用量,增加了玉米和向日葵的肥料投入成本,因此其经济效益的增加全部源自产量的提高.NE处理的平衡施肥提高了成熟期作物养分累积量,与FP处理相比,玉米、向日葵和马铃薯的N累积量分别增加了 8.4%、9.1%和 9.9%,P累积量分别增加了 8.1%、6.6%和 10.9%,K累积量分别增加了 11.5%、9.9%和 11.5%.产量和养分累积量的增加显著提高了NE处理的养分利用效率,与FP处理相比,玉米、向日葵和马铃薯的氮肥回收率(REN)分别提高了 4.6、13.6 和 14.3 个百分点,磷肥回收率(REP)分别提高了 7.6、8.7 和 7.1 个百分点;氮肥农学效率(AEN)分别提高了 3.2、2.1 和 17.4 kg/kg,磷肥农学效率(AEP)分别增加了 12.6、4.0 和 27.9 kg/kg.马铃薯的钾肥回收率(REK)提高了 13.8 个百分点,钾肥农学效率(AEK)提高了 8.7 kg/kg.[结论]基于产量反应和农学效率的养分专家系统,在内蒙古地区玉米、向日葵和马铃薯上开展的推荐施肥,可平衡氮、磷、钾肥用量,增加作物产量和净效益,同时提高养分吸收和肥料利用率,在保障粮食安全、提高农业生产效率方面将发挥重要作用.因此,这种推荐施肥方法适用于内蒙古小农户种植体系.

关键词： 养分专家系统 产量反应 农学效率 养分利用率 经济效益

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前列腺素D₂和TLR2/TLR4/NLRP3在大肠杆菌感染奶牛骨髓源巨噬细胞中的作用

杨效林; 龚鹏飞; 郭莉莉; 吴敬泽; 于嘉辉; 钱英红; 张双翼; 刘博; 曹金山; 毛伟; 《中国兽医学报 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：运用RNA测序（RNA-seq）技术解析大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）感染奶牛骨髓源巨噬细胞的mRNA表达谱，并通过基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析，鉴定差异表达基因的生物学功能及其参与的信号通路。结果显示，E.coli感染诱导了4 522个差异表达基因，其中2 141个基因表达上调，2 381个基因表达下调。这些基因主要涉及炎症反应，且TLR2、TLR4、NLRP3及PTGS2在其中发挥重要作用；使用PGD₂抑制剂处理E.coli染奶牛骨髓源巨噬细胞进行转录组测序显示TLR2和TLR4的基因表达显著下调。q-PCR验证结果与RNA-seq数据一致。结果表明，TLR2、TLR4和NLRP3与PGD₂的相互调控共同影响奶牛子宫内膜炎，这为深入理解奶牛子宫内膜炎的病理机制及其防治提供了重要的分子依据。

关键词： E.coli 奶牛骨髓源巨噬细胞 转录组 模式识别受体 前列腺素D₂

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内蒙古白绒山羊传染性胸膜肺炎的防治

杜红霞; 杜勤; 田婧; 《中国畜牧业 》 2025

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白藜芦醇对家畜冻精品质影响的研究进展

刘志远; 王志英; 付绍印; 《畜牧与饲料科学 》 2025

摘要：家畜精液冷冻技术自20世纪发展至今已相当成熟，并与人工智能等现代技术深度融合，成为推动家畜繁育现代化、高效化及满足家畜产品需求的关键支撑，尤其在保存珍贵遗传资源、促进优良品种利用与跨区域交流方面价值显著。然而，冷冻-解冻过程引发的氧化应激损伤（如活性氧过量产生、抗氧化防御削弱）导致精子质膜变薄破损、顶体损伤及DNA完整性被破坏，严重制约解冻精液品质、受精潜能及家畜精液冷冻技术的广泛应用，进而阻碍优秀种畜传播和畜牧业可持续发展。文章系统评述了白藜芦醇改善冷冻-解冻后精子活力、质膜完整性、顶体状态及DNA稳定性等关键品质指标的效果，深入探讨其核心作用机制，包括显著降低活性氧水平、有效抑制脂质过氧化反应、提升精子内源性抗氧化酶活性，并分析其应用特性，特别是效果呈现的浓度依赖性及潜在协同效应。旨在阐明白藜芦醇在冷冻精液抗氧化方面的作用机理与应用价值，优化其保护液浓度并探索协同策略，以提升家畜精液冷冻保存效果，增强遗传资源保存与利用能力，推动畜牧业可持续发展。

关键词： 白藜芦醇 抗氧化 活性氧 冻精品质

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秸秆还田与地膜覆盖对绿豆水分利用效率及产量的影响

范雅芳; 刘剑; 陈文晋; 贺小勇; 程玉臣; 孔庆全; 高学峰; 郭建兵; 《北方农业学报 》 2025

摘要：[目的]明确秸秆还田与地膜覆盖对绿豆水分利用效率及产量的影响.[方法]以绿豆品种蒙科绿 4 号为试验材料,设置秸秆还田配合地膜覆盖(SP)、单独秸秆还田(S)、单独地膜覆盖(P)、秸秆不还田地膜不覆盖(NSP,CK)4 个处理,分析秸秆还田与地膜覆盖对土壤容重、土壤孔隙度、土壤含水量、土壤蓄水量以及绿豆水分利用效率、根系构型和产量及其构成因素的影响.[结果]SP处理下,土壤容重显著低于其他处理(P<0.05),收获后与NSP处理相比降低 11.89%;土壤孔隙度、土壤含水量和土壤蓄水量显著高于其他处理(P<0.05),收获后与NSP处理相比分别增加 6.48 个百分点、5.20 个百分点和13.29%.SP处理下,绿豆根系构型指标、植株干物质量和产量相关指标均显著高于其他处理(P<0.05),其中,绿豆总根长、总根表面积和总根体积分别较NSP处理提高 42.02%、28.04%、22.63%,绿豆水分利用效率、植株干物质量、单株荚数、单荚粒数、百粒质量和产量分别较NSP处理提高 27.72%、40.68%、14.82%、11.72%、19.19%、24.08%.[结论]与单独秸秆还田或者地膜覆盖相比,秸秆还田配合地膜覆盖能够显著改善土壤物理性质、增加土壤蓄水保墒能力,促进绿豆根系生长发育、增加植株干物质量、提高绿豆产量和水分利用效率.

关键词： 秸秆还田 地膜覆盖 土壤物理性质 绿豆 水分利用效率 产量

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