科研产出
中波紫外线处理对香菇采后维生素D2含量及生化品质的影响研究
《核农学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为强化香菇中维生素D2含量,并研究中波紫外线（UV-B）对香菇营养品质、活性氧代谢相关酶活性以及超微结构的影响,本研究将鲜香菇置于0.203 mW·cm-2的UV-B紫外灯下,正反面分别照射0.5、1、2、3和4 h,考察香菇营养品质、表观形态、抗氧化相关酶活及其超微结构结。结果表明,与对照组相比,UV-B处理2 h后维生素D2含量从0升至104.87μg·g-1,持续延长处理时间,维生素D2含量未出现显著增加,维生素C含量整体呈先上升后下降趋势,在UV-B处理2 h时最高为46.1μg·g-1。有机酸、可溶性糖含量、酶等对UV-B处理不敏感,均保持稳定状态;但长时间照射使香菇色泽显著加深,细胞受损,膜透性增加;UV-B处理2 h时相对电导率较对照组提高了20.61%,处理3 h时相对电导率提高了63.25%。香菇经UV-B处理2 h后,在后期贮藏过程中表现出较好的品质稳定性。本研究结果表明,2 h的UV-B照射处理有助于提高香菇维生素D2、维生素C的含量和抗氧化系统的强化,并且对于其他营养品质无显著负面影响,对提高香菇的商品价值有较好的参考价值。
关键词： 中波紫外线 香菇 维生素D2 膜脂过氧化 活性氧代谢
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春兰miR396过表达对拟南芥叶片生长、光合及叶绿素荧光特性的影响
《生物技术通报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为研究春兰miR396（cgo-miR396）基因在植物叶片生长发育中的作用,针对春兰的栽培和生产提供新的研究思路。将该基因前体cgo-MIR396在拟南芥中过量表达,观察其形态指标的变化并对相应的光合和叶绿素荧光参数进行测定。春兰miR396基因在花期叶片中的表达量最高,过表达该基因可以显著增加拟南芥的叶长、叶宽、叶面积和株高,并明显降低叶片的叶绿素含量、气孔导度（gs）和蒸腾速率（Tr）,提高了水分利用效率（WUE）;另外,cgo-miR396的过表达还导致反应中心吸收的光能用于电子传递的量子产额（φEo）、性能指数(PIABS)、推动力(DFABS)等叶绿素荧光参数的下降。春兰miR396主要于生殖生长时期发挥作用,在保证净光合效率和叶片生长发育的同时,适当降低了叶片的气孔导度及PSII受体侧的部分性能。
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耐性和敏感两种类型鲜食玉米苗期施用硝磺草酮后的转录组分析
《农药学学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：苗期施用硝磺草酮易对鲜食玉米品种和自交系造成药害.鲜食玉米对硝磺草酮的不同响应差异可能归因于除草剂代谢效率的不同.本研究从氧化损伤和光合抑制角度阐述了不同耐药性鲜食玉米对硝磺草酮的响应差异.利用RNA-Seq技术对耐性和敏感玉米在硝磺草酮处理和未处理下的基因表达情况进行了分析,以期从生理和分子水平揭示鲜食玉米对硝磺草酮的耐性机制.结果表明:硝磺草酮处理导致敏感玉米自交系叶片中积累更多的活性氧,光合作用受到严重抑制,最终植株干枯死亡;而耐性玉米自交系在硝磺草酮处理后植株生长正常.本研究中,共鉴定到7985个差异表达基因,敏感玉米中上调表达基因4020个、下调表达基因3450个,而耐性玉米中上调表达基因526个、下调表达基因495个;差异表达基因的基因功能注释(GO)富集分析表明:差异表达基因数量较多的主要集中在分子功能、细胞组分、生物学过程中;京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示:差异表达基因显著富集在光合作用、碳水化合物、氨基酸和脂类代谢等相关通路;筛选到Zm00001d042099、Zm00001d044157、Zm00001d007462、Zm00001d002436、Zm00001d021804、Zm00001d042541、Zm00001d040764、Zm00001d032828和Zm00001d020544共9个可能参与除草剂代谢的潜在候选基因.
关键词： 鲜食玉米;硝磺草酮;除草剂耐性;转录组
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电穿孔法可用于家蚕基因功能分析(英文)
《昆虫学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确基于电穿孔的基因功能分析方法在家蚕Bombyx mori活体内的应用实效。【方法】针对调控家蚕幼虫体表斑纹黑色素合成的靶基因Wnt1 （Wingless）,人工合成特异性siRNA,向4龄第3天家蚕幼虫注射Wnt1 siRNA并进行电穿孔作为处理组（ERFA-RNAi）,以注射Wnt1 siRNA但未进行电穿孔的幼虫作为阴性对照组（negative control, NC）,解剖5龄幼虫斑纹区的表皮,用实时定量RT-PCR测定表皮中Wnt1的相对表达量,验证电穿孔介导的RNAi效果。带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP和红色荧光蛋白报告基因DsRed2表达元件的转座子载体pPIG-A3GR,通过电穿孔导入家蚕2龄幼虫;正常饲养72 h后,用荧光体视显微镜观察幼虫中EGFP和DsRed2的表达,验证当世代家蚕的嵌合体转基因。【结果】家蚕4龄第3天幼虫中导入Wnt1的特异性siRNA后,5龄幼虫体表特定部位斑纹的形成明显受到抑制,实时定量RT-PCR分析表明5龄幼虫表皮中Wnt1的表达水平显著降低。嵌合体转基因家蚕的阳性率达56.60%,并且两个荧光报告基因EGFP和DsRed2在幼虫、蛹及成虫期持续表达。【结论】电穿孔技术可快捷、高效地向家蚕活体内导入外源RNA或DNA,是家蚕乃至其他昆虫基因功能解析的有效方法。
关键词： 家蚕 电穿孔 转基因 Wnt1 RNAi 基因功能
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春兰根状茎缓慢生长保存和包埋保存
《热带作物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：以春兰根状茎为材料,研究培养基中不同MS盐含量、蔗糖浓度、甘露醇浓度及矮壮素（chlormequat chloride,CCC）浓度对根状茎缓慢生长保存的影响;研究不同浓度海藻酸钠（sodium alginate, SA）和氯化钙（calcium chloride, CC）对于根状茎包埋珠合格率和萌发率的影响,并以此为基础研究春兰根状茎的包埋保存。结果表明:根状茎在MS+10.0 g/L蔗糖+10.0 g/L甘露醇+7.5 g/L琼脂+1.0 g/L活性炭和MS+20.0 g/L蔗糖+7.5 g/L琼脂+1.0 g/L活性炭的培养基上保存,12个月后存活率达84.00%。利用3.5%（W/V）的SA,75.0 mmol/L CC制成的根状茎包埋珠合格率和萌发率达97.60%和92.00%。合格的包埋珠在4℃下保存180 d,萌发率和再生率最高,分别为68.00%和64.00%。本研究的结果可为春兰等国兰的种质资源保存和种苗生产提供理论和技术指导。
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酪蛋白糖巨肽酶解产物抗氧化活性及其对RAW 264.7细胞氧化损伤的保护作用
《食品与发酵工业 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：采用中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶制备酪蛋白糖巨肽（glycomacropeptide, GMP）酶解产物,基于自由基清除能力确定适宜的蛋白酶种类与酶解时间,进而评价其对H2O2诱导RAW 264.7细胞存活率和活性氧（reactive oxygen species, ROS）生成量的影响。结果表明,不同蛋白酶制备的GMP酶解产物均可显著清除ABTS阳离子自由基、DPPH自由基和·O-2;其中中性蛋白酶酶解4 h的酶解产物（neutral protease-glycomacropeptide hydrolysates, N-GMPH）具有较强的自由基清除能力;同时N-GMPH可显著提高H2O2诱导的RAW 264.7细胞存活率并降低ROS生成量。研究显示,N-GMPH具有缓解细胞氧化损伤的作用,该研究可为GMP酶解产物进一步开发功能食品配料提供研究依据。
关键词： 酪蛋白糖巨肽 酶解产物 自由基清除能力 抗氧化损伤 RAW 264.7细胞
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甜瓜幼果果皮颜色基因GR的精细定位
《中国农业科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探究甜瓜幼果果皮颜色性状的遗传规律,精细定位目标性状基因GR,加深对甜瓜发育过程中果皮颜色转变的认知,为开展甜瓜果皮颜色的分子设计育种奠定基础。【方法】以幼果深绿皮的薄皮甜瓜纯系‘MR-1’和幼果浅绿皮的厚皮甜瓜纯系‘LGR’为亲本,构建F1正反交群体;以及利用F1与浅绿皮亲本‘LGR’杂交构建BC1F1回交群体,对甜瓜幼果果皮颜色基因GR（Green Rind）进行遗传分析。选取BC1F1群体中深绿皮和浅绿皮单株各20株,混池其DNA进行BSA-seq以获取GR初定位区间。基于‘MR-1’和‘LGR’两亲本的重测序数据,开发初定位区段内特异性较好的分子标记,鉴定筛选扩大群体（BC1F1和F2）中的重组交换单株,验证和缩小定位区间,实现GR精细定位。将两亲本定位区段内注释基因的编码区进行测序以确定候选基因和关键变异位点。通过调查BC1F1回交群体中幼果果皮颜色和成熟果果皮颜色,利用相关性分析探究果皮颜色转变在甜瓜发育过程中的内在联系。【结果】通过分析F1群体果皮颜色发现所有F1单株幼果都表现为深绿皮。另外,BC1F1群体单株幼果果皮颜色会发生分离,其中深绿皮单株数﹕浅绿皮单株数约等于1﹕1,以及F2群体中深绿皮植株与浅绿皮植株的分离比为3﹕1。这些分离比都符合孟德尔遗传定律,表明幼果果皮颜色是受单个核基因GR控制的质量性状,并且深绿对浅绿为显性。通过BSA-seq分析将基因初步定位于4号染色体长臂,物理距离为1.8 Mb的范围内。利用开发的分子标记在扩大的定位群体中共筛选到24个重组交换单株。经过后代基因型和表型验证,最终将GR精细定位在标记4-102和4-81之间约17.7 kb的范围内,区段内共包含4个注释基因。经测序分析发现一个编码GLKs类转录因子CmAPRR2的基因MELO3C003375在亲本‘MR-1’和‘LGR’中存在多处变异,其中有3处发生了同义突变,1处错义突变和1处无义突变。无义突变出现在MELO3C003375的编码区第856位碱基处（由G变成T）,导致亲本‘LGR’中蛋白翻译提前终止,其Myb-DNA结合结构域大部分缺失,推测基因MELO3C003375（CmAPRR2）即为影响甜瓜幼果果皮颜色的基因,而第856位的单碱基替换造成的无义突变即为关键变异位点。此外,BC1F1回交群体单株的表型调查结果显示幼果与成熟果的果皮颜色之间存在显著相关性。【结论】甜瓜幼果果皮颜色（深绿/浅绿）性状为质量性状,受单个核基因GR控制。通过遗传定位手段推断MELO3C003375（CmAPRR2）为最有可能影响甜瓜幼果果皮颜色的候选基因。
关键词： 甜瓜 幼果果皮颜色 基因定位 GR MELO3C003375（CmAPRR2）
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景宁畲族自治县农作物种质资源调查收集与鉴定分析
《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：农作物种质资源普查与收集是对濒危、珍惜种质资源进行抢救性保护的重要措施。为了查清景宁畲族自治县农作物种质资源的分布,并对濒危资源进行抢救性收集,浙江省农业科学院与景宁畲族自治县农业局种子站于2017-2020年在景宁畲族自治县开展了农作物种质资源的普查与收集工作。通过对6个乡（镇）的12个村进行系统调查与鉴定,共收集到水稻、杨梅、白菜等56类作物120份种质资源。调查发现,多数种质资源在当地只有零星种植,多分布在偏远、交通不便、少数民族聚居的村庄,城乡地带也有少量优异种质资源。种质资源存在明显的消长,遗传多样性正逐步丧失,亟须保护。对收集到的种质资源进行鉴定评价、亲缘关系和多样性分析,可为新品种选育、保障粮食安全提供物质和技术支撑。
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基因编辑技术在水稻抗病基因与育种研究中的应用进展
《浙江农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：水稻是我国重要的粮食作物之一,更是世界上30多亿人的主要食物来源。近几十年,各种病原菌、虫害、气候变化以及其他不利环境因素层出不穷,对全球粮食安全生产构成了严重威胁。对于高产抗病水稻植株的研究需求越发迫切,但传统育种手段过程繁琐复杂、效率不高,因此利用基因编辑技术推进水稻抗病育种进程成为研究重点。其中以CRISPR系统、锌指核酸酶（ZFN）、转录激活样效应因子核酸酶（TALEN）、单碱基编辑系统（BE）和引导编辑系统（PE）等为代表的技术,在对水稻进行高效定点基因编辑,在缩短育种周期,培育综合抗性强的水稻品系方面起到了较大作用,并在基因研究、作物遗传改良等方面展示出了巨大的潜力。本文对基因编辑技术的原理,基因编辑技术的发展,以及基因编辑技术在水稻抗病基因及育种研究中的应用进展进行了综述,并展望了基因编辑技术在抗病育种中的应用前景。
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虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)SWP2基因的克隆、表达及其在虾类病害检测中的应用
《浙江农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei,EHP)是虾类养殖过程中一种非常重要的病原微生物.目前常用的EHP检测方法是以核糖体18S基因为靶基因的PCR检测,但由于18S基因的高度保守性,该方法存在一定的非特异性扩增问题.本研究利用电子克隆方法,得到了特异性较高的EHP孢壁蛋白2(spore wall protein 2,SWP2)基因.该基因的cDNA全长为1019 bp,开放阅读框全长687 bp,编码229个氨基酸,预测相对分子质量为26.32 ku,5′非编码区为120 bp,3′非编码区为179 bp,系统进化分析表明与毕氏肠孢虫和绒螯蟹肠孢虫具有较近的亲缘关系.构建了重组表达载体pET15 b-SWP2,利用原核表达得到SWP2蛋白,相对分子质量约为28 ku,并制备了该蛋白的单克隆抗体.采用常规PCR及Western blot方法对市售的商品虾进行了EHP感染情况检测,结果显示,两种方法均能准确地进行检测分析.本研究结果为虾农肝肠微孢子虫病的诊断提供了技术支撑,同时为SWP2蛋白功能的研究打下了基础.
关键词： 虾肝肠胞虫;SWP2基因;蛋白表达;单克隆抗体;病害检测
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