文献类型： 中文期刊

作者： 王琦 ¹ ; 崔阳 ¹ ; 刘进宝 ¹ ; 孙慧慧 ¹ ; 郭娜 ¹ ; 孙建安 ¹ ; 毛相朝 ¹ ;

作者机构： 1.中国海洋大学食品科学与工程学院;中国水产科学研究院黄海水产研究所;青岛海洋科学与技术国家实验室海洋药物与生物制品功能实验室

关键词： 壳聚糖酶;壳聚糖;壳寡糖;克隆表达;酶学性质

期刊名称： 食品与生物技术学报

ISSN： 1673-1689

年卷期： 2019 年 01 期

页码： 147-155

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 作者从NCBI数据库中挖掘到来源于Butyrivibrio sp.MC2013的壳聚糖酶基因,命名为BUT,该壳聚糖酶基因大小为903 bp,编码301个氨基酸。通过NCBI数据库和进化树比对发现,该壳聚糖酶(BUT)属糖苷水解酶46家族(后简称GH-46),与其它壳聚糖酶相似度为59%,是一种新型的壳聚糖酶。序列经密码子优化后进行全基因序列合成,与表达载体pET21a(+)连接构建重组质粒p ET-21a-BUT,转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)表达宿主,进行诱导表达。所得重组壳聚糖酶通过Ni-NTA亲和层析进行纯化,SDS-PAGE确定其蛋白分子量为35 kDa,DNS法测定其酶活为146.0 U/mg。对BUT酶的酶学性质进行探究,结果表明BUT酶最适温度和pH分别为45℃、8.0,在中性偏碱性条件下稳定性较强。Mn~(2+)对其酶活力具有促进作用,SDS、Fe~(3+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)等的抑制作用极强。通过TLC对其水解产物分析发现,BUT水解壳聚糖的产物是壳二糖、壳三糖和壳四糖。