科研产出
桃镁离子转运蛋白MGT基因家族鉴定与表达分析
《园艺学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为研究桃树镁离子转运蛋白(Magnesium Transporters,MGT)家族基因在镁离子运输中所起的作用,全基因组鉴定、分析了桃树MGT家族成员(PpMGT),并研究外源施镁对PpMGT基因表达的影响.通过同源比对、保守位点分析鉴定获得了 8个PpMGT,在Chr1、Chr3、Chr6、Chr8染色体上不均匀分布.系统发育研究表明植物MGT家族可分为5个分支,各分支成员数存在差异.基因和蛋白结构分析发现PpMGT含有4~13个外显子,蛋白中存在10个保守基序,启动子上游分布有不同数量的胁迫响应、转录调控、节律调控、激素响应和发育调控元件.PpMGT在桃树花、果、叶、根器官均有表达且具有组织表达特异性.桃树外源喷施MgCl224h后,检测到PpMGT转录表达变化.喷施镁使叶片、果皮出现不同的差异表达基因类群,均涉及光合途径.研究发现PpMGT4、PpMGT6、PpMGT8与喷镁后光系统Ⅱ捕光叶绿素a/b蛋白复合体基因表达变化正相关.异源表达 PpMGT4、PpMGT6、PpMGT8可补偿Mg2+转运缺陷突变株MM281(鼠伤寒沙门氏菌突变株)生长缺陷,表明PpMGT4、PpMGT6、PpMGT8具有镁离子转运功能.根据序列特征、表达模式及外源镁喷施结果,推测PpMGT可能具有功能分化,通过协同作用调节桃树镁转运,PpMGT4、PpMGT6、PpMGT8的表达变化可能与外源镁摄入和利用相关.
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喷施不同浓度海藻叶面肥对茶叶产量和品质的影响
《茶叶科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：研究不同浓度的海藻叶面肥(Organic-based biostimulant formulas,OBFs)喷施下茶青产量和品质的变化,为红壤区茶树高产优质栽培提供理论指导.在常规施肥的基础上,以不喷施OBFs为对照(T0),在茶园设置 5 个OBFs叶面肥喷施体积分数 0.33%、0.66%、0.99%、1.32%、1.65%,分别记为T1、T2、T3、T4、T5,研究喷施不同浓度OBFs对茶树嫩叶吸收养分、以及茶产量与品质的影响.结果表明,喷施OBFs可以改善茶树农艺性状、促进嫩叶吸收养分和增产提质.与 T0 相比,T1、T2、T3、T4、T5 处理茶青产量分别增加 1.4、1.4、1.3、2.1、2.4 倍(P<0.05).随着 OBFs 喷施浓度增加,茶青总生物碱、咖啡碱和氨基酸的含量先升后降.与T0 相比,T1 和T2 处理茶青总生物碱分别增加 9.6%和 9.3%,咖啡碱分别增加 9.3%和 11.4%,氨基酸含量分别增加 5.0%和 12.4%(P<0.05).此外,T1 和 T2 处理下茶青氮含量分别增加 5.5%和 6.1%,磷含量分别增加 19.9%和 13.3%,钾含量分别增加 20.9%和 10.0%;T1 处理下茶青硅含量增加 14.8%(P<0.05).茶青产量与芽头密度、百芽重、节间长、叶面积、叶绿素含量均显著正相关;茶青咖啡碱、总生物碱与茶青氮、磷、钾和硅含量呈显著正相关,茶青非必需氨基酸、必需氨基酸含量与茶青氮、磷、钾含量均有显著的正相关关系.综上所述,喷施 OBFs 可以提高茶青产量,其中以喷施 1.65%OBFs 茶青产量较高,喷施 0.33%、0.66%OBFs可以提高茶树嫩叶氮、磷、钾和硅元素的含量,改善茶树农艺性状,实现茶青产量和品质的双提升.
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外源褪黑素对新白8号枇杷果实日灼和果皮解剖结构的影响
《果树学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究外源褪黑素对高温胁迫下枇杷果皮细胞结构的影响，探讨外源褪黑素缓解高温胁迫对枇杷果实日灼发生的影响，为防控技术研发提供依据。【方法】以4个浓度外源褪黑素喷施新白8号果实，观察比较40℃高温胁迫处理60 min内果实日灼发生差异，筛选最佳外源褪黑素浓度；进一步观察比较喷施清水（对照）和最佳浓度外源褪黑素在40℃高温胁迫处理0、10、30 min时，果皮显微结构与超微结构的差异变化。【结果】高温胁迫30 min时，150μmol·L-1外源褪黑素处理的果实开始出现日灼病斑，比喷施清水（对照）果实日灼病斑出现时间延迟20 min，且日灼症状最轻、病果率及病害等级最低，是最佳浓度。显微和超微结构观察结果表明，高温胁迫处理10 min时，清水处理的枇杷果皮细胞角质层、表皮层、亚表皮层厚度均减小，角质层部分褶皱，表皮细胞部分断裂、变形，亚表皮层细胞变为长椭圆形或纺锤形、细胞壁厚度增加了63.46%;150μmol·L-1外源褪黑素处理的果皮角质层平整、薄厚均匀，细胞形状基本不变，亚表皮细胞壁厚度增加了42.60%；高温胁迫处理30 min时，清水处理的果皮细胞角质层变薄、褶皱明显且数量变多，表皮细胞严重变形，亚表皮细胞呈不规则形、出现较大空腔、细胞壁厚度增加了84.62%,150μmol·L-1外源褪黑素处理的果皮细胞角质层个别区域变薄、褶皱变形，少数表皮细胞破裂，亚表皮层少数空腔、细胞壁厚度增加了65.74%。【结论】喷施浓度为150μmol·L-1外源褪黑素可降低枇杷果实日灼病果率及病害等级，延缓枇杷果实日灼的发生，缓解高温胁迫对果皮组织结构的伤害。
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福红李三个成熟阶段果实营养品质与香气特征分析
《核农学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为明确福红李果实成熟期营养品质与香气特征，本研究采用高效液相色谱仪（HPLC）和气相色谱离子迁移谱联用仪（GC-IMS）分析了福红李三个成熟阶段果肉中糖类、有机酸、氨基酸和挥发性成分的组成和含量。结果表明，蔗糖是福红李中的主要糖类，占可溶性糖总量高达49.28%，其次是葡萄糖和果糖；苹果酸是主要的有机酸，占有机酸总量高达88.76%，其余有机酸含量均较低；福红李可溶性糖、蔗糖含量和糖酸比随着果实成熟不断积累。福红李中9种非必需氨基酸和7种必需氨基酸含量范围分别为11.58～357.47、55.59～176.63μg·g-1，其中，在必需氨基酸中，含量最高的是亮氨酸，其次是赖氨酸和苏氨酸，含量最低的是蛋氨酸，大部分氨基酸主要在成熟后期即花后140 d和花后150 d积累得更多。福红李的主要挥发性成分是醛类、酯类和醇类等，己醛和2-己烯-1-醇峰强度较高，挥发性成分在三个成熟阶段存在差异。本研究初步分析了福红李主要品质成分及成熟阶段变化规律，可为李优质育种提供理论依据。
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低蛋白质氨基酸平衡饲粮添加谷氨酸对断奶仔猪生长性能、血液抗氧化和免疫指标的影响
《家畜生态学报 》 2024 北大核心
摘要：试验旨在研究较大幅度降低饲粮粗蛋白质(CP)水平,平衡必需氨基酸并添加谷氨酸对断奶仔猪生长性能、血液抗氧化和免疫指标的影响.试验选用144头杜长大杂交仔猪,随机分成3组,每组6个重复,每个重复8头猪,试验期16 d.Ⅰ组(对照组)饲粮CP水平为21.16%,Ⅱ组饲粮CP水平为15.97%,补充必需氨基酸(EAA)赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Trp)、缬氨酸(Val)和异亮氨酸(Ile),Ⅲ组为Ⅱ组+谷氨酸(Glu).结果表明,仔猪平均日增重(ADG)Ⅱ组显著低于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.05).Ⅱ组仔猪腹泻率显著低于Ⅰ组(P<0.05),Ⅲ组显著低于Ⅱ组(P<0.05),Ⅲ组极显著低于Ⅰ组(P<0.01).Ⅲ组血浆总抗氧化能力(T-AOC)显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05).血浆免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和白细胞介素-10(IL-10)含量Ⅲ组显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05),Ⅱ组血浆IL-10含量显著低于Ⅰ组(P<0.05).综上,断奶后饲喂低蛋白质氨基酸平衡并添加谷氨酸的饲粮能够提高断奶仔猪生长性能、减少腹泻、增强机体抗氧化和免疫功能.
关键词： 谷氨酸 生长性能 血液抗氧化 免疫指标 低蛋白质饲粮 断奶仔猪
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禽腺病毒DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：禽腺病毒属成员鸭腺病毒3型（duck adenovirus type 3,DAdV-3）和禽腺病毒4型（fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4）是养殖场主要流行的病原，对养禽业造成巨大的经济损失。目前尚未见可同时快速检测这2种病原的双重荧光定量PCR检测方法，本研究基于DAdV-3 GDMM10毒株和FAdV-4 GDMZ毒株Fiber2基因序列比对及遗传进化分析，分别在Fiber2基因保守区设计特异性引物，建立了能同时鉴别临床上常见的DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法。结果表明，DAdV-3 GDMM10和FAdV-4 GDMZ Fiber2基因处于两个不同进化分支上，同源性为46.10%。建立的检测DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高，最低可检出45拷贝/μL的DAdV-3样品和17拷贝/μL的FAdV-4样品；且检测结果可直接通过Tm值差异进行判定，简化操作时间。利用该双重荧光定量PCR方法对2022年度临床上采集的34份肝炎-心包积液疑似样品进行检测，DAdV-3和FAdV-4检出率分别为17.65%和2.94%。为进一步开展禽源DAdV-3和FAdV-4的分子流行病学及共感染致病机制奠定了基础。
关键词： 鸭腺病毒3型 禽腺病毒4型 Fiber2基因 实时定量PCR 临床检测
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基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体TaqMan检测方法的建立及其遗传演化分析
《畜牧兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：热休克蛋白70 （heat shock protein 70,Hsp70）是绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae, Movi）的重要膜蛋白，是机体内高度保守的生物分子，但在种间差异大，可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法，并进一步了解其遗传变异情况，本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征，设计特异性的引物及探针，建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎（Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG）病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定，并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示，建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强，与丝状支原体山羊亚种（Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc）、山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp）、莱氏无胆甾原体（Acholeplasmalaidlawii, AL）、无乳支原体（Mycoplasma agalactiae, Maga）、伪结核棒状杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis, CP）、羊口疮病毒（orf virus, ORFV）、牛支原体（Mycoplasma bovis, Mb）等牛羊常见病原均无交叉反应；敏感性高，最低检测限为5.72 copies·μL-1;重复性优，组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%～99.4%和98.0%～100.0%;进一步分析发现，山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明，其均处于ClusterⅠA亚分支（均为山羊源）。综上，本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现，不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高；遗传演化分析证实，Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持，更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。
关键词： 绵羊肺炎支原体 Hsp70基因 TaqMan实时荧光定量PCR方法 序列分析
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兔促性腺激素抑制激素受体基因NPFFR1的克隆及其在HPT轴的表达分析
《农业生物技术学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：神经肽FF受体1 （neuropeptide FF receptor 1, NPFFR1）是促性腺激素抑制激素（gonadotropininhibitory hormone, GnIH）的主要受体，在调控动物生殖生理方面起着重要作用。为了解NPFFR1基因的功能，本研究以闽西南黑兔（Oryctolagus cuniculus）为研究对象，采用cDNA末端快速克隆（rapid amplification of cDNA ends, RACE）技术克隆了NPFFR1基因（GenBank No. OP791886），并对其进行了生物信息学和时空表达谱分析；此外，公兔腹腔注射0、0.5、5和50μg GnIH多肽，利用q PCR方法检测下丘脑-垂体-睾丸（hypothalamic-pituitary-testicular, HPT）轴中NPFFR1基因的表达水平。生物信息学分析表明，兔NPFFR1全长3 712 bp，编码432个氨基酸；其翻译的蛋白由α螺旋、无规卷曲和β折叠组成，是镶嵌于质膜的7次跨膜蛋白，与高原鼠兔（Ochotona curzoniae）和北美鼠兔（Ochotona princeps） NPFFR1高度同源。qPCR结果表明，NPFFR1基因在HPT轴中均有表达，在下丘脑的表达量显著高于垂体和睾丸（P＜0.05）。出生后，90日龄兔下丘脑NPFFR1基因表达量显著低于11、30、60和150日龄（P＜0.05）,30和120日龄兔垂体NPFFR1基因表达量显著低于11和90日龄（P＜0.05）,30日龄兔睾丸NPFFR1基因表达量显著低于11和90日龄。兔腹腔注射5～50μg GnIH多肽后，下丘脑NPFFR1基因表达量呈现剂量依赖性增加；50μg剂量组睾丸NPFFR1基因表达量显著大于5μg剂量组（P＜0.05）；注射4种剂量GnIH多肽都未引起垂体NPFFR1表达量发生改变。本研究为深入探讨兔NPFFR1在生殖生理方面的作用机制提供基础资料。
关键词： 兔 促性腺激素抑制激素（GnIH） 神经肽FF受体1基因（NPFFR1） 克隆 基因表达
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九龙江流域丰枯水期表层水体氮污染特征及其来源解析
《生态与农村环境学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为探明九龙江流域表层水体氮污染分布特征及其污染来源，于2020年7月（丰水期）和2021年1月（枯水期）开展九龙江全流域表层水体多点多断面原位观测，利用正定矩阵因子分析模型（positive matrix factorization, PMF）对不同水期全流域表层水体氮污染来源及贡献率进行解析，耦合相关性统计分析方法研究不同水期流域表层水体氮污染的关键驱动因子。结果表明，九龙江流域表层水体氮污染存在明显的水期分异特征，ρ（TN）为0.72～13.14 mg·L-1,丰水期ρ（TN）为1.39～10.95 mg·L-1,枯水期为0.72～13.14 mg·L-1。硝态氮（NO3--N）、氨氮（NH4+-N）、亚硝态氮（NO2--N）和溶解性有机氮（DON）浓度均表现为丰水期大于枯水期，但颗粒态氮（PN）浓度则表现为枯水期大于丰水期。丰水期氮污染以NO3--N、NH4+-N和DON形态为主，枯水期则以NO3--N、DON和PN形态为主。应用PMF模型对流域表层水体氮污染来源进行解析，结果表明，丰水期流域农业化肥施用引起的农业面源污染、生活污水及河流内动植物残体、微生物、矿物颗粒是流域水体氮污染的主要来源，而枯水期流域农业化肥污染、城市工业污水排放及河流中动植物残体等悬浮颗粒则是流域水体氮污染的主要来源。该结果强化了丰枯水期九龙江流域表层水体氮污染受流域农业生产活动和径流变化共同影响的认识，建议将流域农业、工业生产氮污染源头控制和氮污染的水期分异有效纳入流域水体氮污染综合管理。
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基于ORF3蛋白抗体的鹅圆环病毒间接ELISA检测方法的建立
《农业生物技术学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)是一种潜在的免疫抑制病原,主要感染宿主淋巴细胞,导致免疫功能下降,易造成其他病原继发感染,给养鹅(Anser cygnoides orientalis)业带来极大危害.为建立鹅圆环病毒血清学抗体的间接ELISA方法,本研究将GoCV的ORF3基因插入到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-ORF3,经表达条件优化,以Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,获得的重组ORF3蛋白具有良好的生物学活性.以纯化后的重组ORF3蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件建立了GoCV间接ELISA抗体检测方法.优化后的间接ELISA检测条件为:重组ORF3蛋白的最佳包被浓度为2.00 μg/mL、待检血清稀释度为1∶80、酶标二抗最佳稀释度分别为1∶4000(羊抗鸡HRP-IgG)和1∶8000(羊抗鸭HRP-IgG).采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)、鹅源禽坦布苏病毒(Avian tembusu virus,ATmV)、鹅源H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenza virus,AIV)、鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)、新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GoAstV)、GoCV等鹅源阳性血清进行检测,结果显示,仅GoCV阳性血清为阳性结果,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,特异性较强;重复性较好,批内和批间变异系数均小于5%.流行病学调查结果显示,福建和广东地区鸭(Anatinae)群中均存在GoCV跨种感染.本研究建立的检测GoCV血清抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性好,可用于GoCV感染的诊断及流行病学调查研究.
关键词： 鹅圆环病毒(GoCV) ORF3蛋白 原核表达 间接ELISA 流行病调查
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