科研产出
基于CHO-K1细胞稳定表达的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立
《中国兽医科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为建立非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA检测方法,将构建的GFP基因与CD2v基因串联的重组真核表达质粒pIRES-GFP-CD2v转染CHO-K1细胞,通过嘌呤霉素筛选并结合有限稀释法,筛选稳定表达CD2v的单细胞克隆株.转染细胞经过PCR鉴定后进行扩大培养,收集并纯化细胞培养液,获得目的蛋白,通过Western-blot验证其反应原性.结果表明,ASFV CD2v蛋白在CHO-K1细胞中被成功表达,并能与ASFV抗体阳性血清反应.以纯化的GFP-CD2v重组蛋白为包被抗原建立检测ASFV CD2v蛋白抗体的间接ELISA方法,通过方阵试验对间接ELISA方法进行优化,最终确定抗原最佳包被质量浓度为1.25 μg/mL,待检血清最佳稀释度为1∶100,酶标抗体最佳稀释度为1∶50000,以此建立的ASFVCD2v蛋白的间接ELISA方法临界值为0.31;该方法仅与ASFV阳性血清发生特异性反应,而与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、口蹄疫病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒等病毒抗体阳性血清均无交叉反应,表明该方法的特异性较强;用该ELISA方法检测阳性血清敏感性可达1∶1 600;批内和批间变异系数均小于10%.结果表明,本试验中建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于ASFV抗体的检测.
关键词： 非洲猪瘟病毒;CD2v;CHO-K1细胞;稳定表达;间接ELISA
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不同类型调理剂对镉污染土壤修复效果和微生物群落的影响
《南方农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究土壤调理剂对镉(Cd)污染农田修复效果和微生物群落组成的影响,为应用不同土壤活性组分调理剂原位修复和治理Cd污染农田土壤提供科学依据.[方法]在粤东Cd污染农田开展田间试验,设空白对照,研究不同土壤活性组分调理剂(矿物型、有机型和微生物型)对土壤基本理化性质、Cd有效性和微生物群落结构的影响.[结果]施用土壤调理剂可显著提高土壤pH(0.11~0.24)(P?0.05,下同),增加有机碳含量(21%~47%),降低土壤有效态Cd含量(13%~48%)和糙米Cd含量(26%~42%),其中矿物型和微生物型调理剂对糙米Cd含量的降幅最大.总体上施用调理剂可改善土壤微域环境,高通量测序结果表明,添加调理剂可维持污染土壤中正常微生物群落的多样性和丰富度,显著改变土壤细菌群落的组成和结构,其中脱硫菌门(Desulfobacterota)和拟杆菌门(Bacteroidota)的相对丰度降低.矿物型和有机型调理剂提高土壤中放线菌门(Actinobacteriota)和芽单胞菌门(Gemmatimonadota)的相对丰度,而微生物型调理剂提高酸杆菌门(Acidobacteriota)的相对丰度.同时,矿物型调理剂显著增加真菌的担子菌门(Basidiomycota)的相对丰度,降低子囊菌门(Ascomycota)的相对丰度;而有机型调理剂显著提高被子菌门(Mortie-rellomycota)的相对丰度,降低罗兹菌门(Rozellomycota)的相对丰度;微生物型调理剂显著增加子囊菌门的相对丰度,降低罗兹菌门的相对丰度.可见,微生物型调理剂可显著提高细菌和真菌中优势种群的水平.糙米Cd含量与微生物群落的相关分析结果显示,糙米Cd含量与细菌群落的变形菌门(Proteobacteria)、脱硫菌门和拟杆菌门呈显著正相关.此外,冗余分析和蒙特卡洛检验分析表明,土壤全磷含量是影响细菌和真菌群落结构的重要环境因子.[结论]从降低土壤有效态Cd和糙米Cd含量及对土壤微生物结构的影响方面考虑,微生物型土壤调理剂修复效果最佳,降低水稻对Cd吸收的同时改善土壤菌群结构.
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箭叶淫羊藿种子的休眠类型与萌发研究
《广西植物 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：箭叶淫羊藿具有重要的药用价值和较大的市场需求，但其种子休眠和萌发特性目前仍不够清楚，严重影响了其产业化育苗与栽培。为探明其种子的休眠类型及释放休眠和促进休眠的最适方法，该文以箭叶淫羊藿的成熟种子为材料，研究种子对水分的吸收、种子的脱水耐性，以及温度、层积和植物激素对种子休眠与萌发的影响。结果表明：（1）箭叶淫羊藿种子不具有物理休眠，而具耐脱水性。（2）在4～25℃和黑暗条件下，种子萌发率为零，具有休眠特性。（3）胚与种子的比值非常小，4℃和10℃及变温层积能显著地促进胚的生长发育以及增加种子的萌发速率和萌发率。（4）赤霉素和氟啶酮显著增加种子的萌发速率和萌发率。综上认为，箭叶淫羊藿种子的休眠类型为形态生理休眠（MPD）,释放休眠和促进萌发的最适方法是先将种子在10℃中层积30 d,再置于4℃环境中让其萌发。该研究结果为箭叶淫羊藿的产业化育苗提供了参考。
关键词： 脱水耐性 箭叶淫羊藿种子 萌发 形态生理休眠 层积
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高温长时辉干工艺对广东炒青绿茶香气组分的影响
《食品科学 》 2022 EI 北大核心 CSCD
摘要：为探究高温长时辉干工艺对炒青绿茶香气品质的影响,采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术,借助香气感官审评及多元统计分析,研究不同辉干参数下所制绿茶样品的香气特征和挥发性有机化合物.结果表明,8组样品可根据香气特征分为4类,且此差异与辉干温度及时间参数相关.在所有样品组中,共鉴定出58种挥发性有机化合物,其中45种化合物为共有香气组分.基于挥发性有机化合物开展无监督分析,所获聚类结果与感官审评分类情况相似.利用单因素方差分析和偏最小二乘法判别分析,筛选获得对炒青绿茶香气特征变化具有重要影响的32种香气成分.为进一步了解辉干温度和时间对32种挥发性有机化合物含量的影响,基于该2种因素实施了双因素方差分析,发现17种关键香气成分的含量受到温度因素、时间因素和温度-时间交互因素的显著影响(P<0.05),12种关键香气成分的含量受到温度因素和时间因素的显著影响(P<0.05),α-荜澄茄油烯和δ-杜松烯含量受到时间因素和温度-时间交互因素的显著影响(P<0.05),α-甜旗烯含量仅受到温度因素的显著影响(P<0.05).
关键词： 辉干 炒青绿茶 香气 顶空固相微萃取 气相色谱-质谱联用技术
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壳寡糖复合物的制备及其功效研究进展
《食品工业科技 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：壳寡糖是自然界中唯一的碱性寡糖,具有-NH2、-OH等活性基团,易溶于水,具有极高的抑菌、抗炎、抗氧化、抗癌等生物活性,能够与金属离子、蛋白质、多糖、脂类、黄酮类化合物等通过配位络合、静电相互作用、转氨法、美拉德反应及壳寡糖酰胺化、酯化、羧基化等方法形成壳寡糖复合物.壳寡糖复合物稳定性较好,水溶性高,可同时兼备壳寡糖和复合因子的生物活性的特点,有效拓宽复合物质的应用范围并增强其使用效果.此外,壳寡糖复合物的新型复合方式及安全性,是目前的一个重要研究方向.本文对近年来壳寡糖复合物的制备方法、壳寡糖复合因子及壳寡糖复合物在功能生物医药、农业、食品等领域的功效应用进行了总结,以期为壳寡糖复合物的深入研究提供参考.
关键词： 壳寡糖;制备方法;相互作用;复合物;功效
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黑水虻幼虫蛋白及其酶解产物的抗氧化活性研究
《环境昆虫学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了探究黑水虻Hermetia illucens幼虫蛋白及酶解产物的抗氧化活性,以鲜活黑水虻幼虫冻虫为原料,采用碱提酸沉法提取黑水虻蛋白,通过碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶对其蛋白质溶液进行酶解,分别从2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基、羟自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基3个方面对黑水虻蛋白及其酶解液的抗氧化能力进行测定.结果表明:黑水虻幼虫蛋白及4种酶解后的蛋白肽具有较好的抗氧化活性,其中黑水虻幼虫蛋白对ABTS自由基、羟自由基、DPPH自由基的半抑制浓度(IC50)分别为2.91、0.232、0.764 mg/mL,而酶解过后的蛋白肽具有更强的抗氧化活性,对ABTS自由基、羟自由基、DPPH自由基的最低半抑制浓度(IC50)分别为0.295、0.082、0.354 mg/mL.本研究初步证明了酶解制备抗氧化肽的可行性,为昆虫蛋白资源的利用和无抗饲料的研制提供了新的研究思路.
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冬枣粉吸湿的色泽、热力学特性及糖物质基础分析
《食品科学 》 2022 EI 北大核心 CSCD
摘要：为充分了解枣粉吸湿过程中的水分吸附特性,本研究采用静态称量法,分别测量枣粉在温度20、30、40℃,水分活度0.112~0.946下的吸湿情况,探究超微粉碎前后枣粉吸湿色泽的变化、吸附等温线、热力学性质及糖物质基础.结果表明,枣粉吸湿后褐变现象严重,其吸附等温线是Ⅲ型,Peleg模型最适合描述枣粉的吸附等温线(平均相对预测误差E<5%).净等量吸附热和微分熵随着枣粉平衡水分含量(干基,下同)的增加呈指数降低,且超微粉低于普通粉.普通粉和超微粉的绝对安全水分含量分别为0.237 5、0.223 5 g/g.普通粉和超微粉的水分吸附过程均满足熵-焓补偿理论,其吉布斯自由能分别是1 152.80、1 184.22 J/mol,该过程是一个焓驱动的非自发反应.单糖吸湿对照实验结果表明枣粉中吸湿的主要糖种类为果糖.本研究旨在为枣粉的加工工艺优化及贮藏条件的选择提供理论依据.
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低蛋白氨基酸平衡饲粮对清远麻鸡生长性能、屠宰性能、肉品质及血液指标的影响
《中国畜牧杂志 》 2022 北大核心
摘要：试验通过研究低蛋白氨基酸平衡饲粮对清远麻鸡生长性能、屠宰性能、肉品质及血液指标的影响，旨在评估低蛋白氨基酸平衡饲粮在清远麻鸡中的应用效果。选用90日龄的清远麻鸡1号320羽，随机分为2个组，每组4个重复，每重复40羽，地面平养。对照组饲喂14%粗蛋白质（CP）饲粮，低蛋白组饲喂12.5%CP并且真可利用赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸平衡饲粮。试验期为90～150日龄。结果表明：低蛋白氨基酸平衡饲粮对90～150日龄清远麻鸡体增重和平均日增重及150日龄清远麻鸡免疫器官指数无显著影响；低蛋白组清远麻鸡胸肌剪切力高于对照组（P<0.05）；低蛋白组清远麻鸡胸肌肌内脂肪低于对照组（P<0.05）；低蛋白组清远麻鸡排出粪氮含量低于对照组（P<0.05）。综上，饲粮CP降低1.5%并平衡真可利用赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸4种必需氨基酸，不影响90～150日龄清远麻鸡增重性能和免疫机能，并可显著降低其胸肌嫩度和肌内脂肪含量以及粪氮含量排放。
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鸭疫里默氏杆菌RIA0940基因缺失株的构建及主要生物学特性测定
《中国畜牧兽医 》 2022 北大核心
摘要：【目的】通过构建鸭疫里默氏杆菌RIA＿0940基因缺失株并测定其生物学特性，探讨RIA＿0940基因的潜在功能。【方法】以鸭疫里默氏杆菌RA-GD株为亲本株，扩增其左右同源臂及红霉素抗性基因（ermR）盒片段，构建左同源臂-ermR抗性基因盒-右同源臂融合片段，通过自然转化的方法缺失RA-GD株RIA＿0940基因，并利用PCR筛选、鉴定RA-GDΔRIA＿0940基因缺失株。分别对亲本株RA-GD和缺失株RA-GDΔRIA＿0940的生长特性、对雏鸭的半数致死量、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能进行比较分析。【结果】试验成功构建了RA-GD株的RIA＿0940基因缺失株（RA-GDΔRIA＿0940）;生物学特性检测结果显示，RA-GDΔRIA＿0940株体外生长能力较亲本株低，基因缺失株在生长后期生长受到显著或极显著抑制（P＜0.05;P＜0.01）;RA-GDΔRIA＿0940株对雏鸭的半数致死量是亲本株的114倍；与亲本株相比，缺失株感染鸭血液和组织的载菌量显著或极显著下降（P＜0.05;P＜0.01）;缺失株对Vero细胞的黏附和入侵性能均极显著低于亲本株（P＜0.01）。【结论】本试验成功构建RA-GD株RIA＿0940基因缺失株，该缺失株在体外培养条件下生长能力较亲本株低，对雏鸭的致病力、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能均显著或极显著低于亲本株。本试验结果为深入研究鸭疫里默氏杆菌的分子致病机理和研制基因工程疫苗奠定了基础。
关键词： 鸭疫里默氏杆菌 RIA＿0940基因 基因缺失 生物学特性 毒力因子
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