科研产出
禽腺病毒DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：禽腺病毒属成员鸭腺病毒3型（duck adenovirus type 3,DAdV-3）和禽腺病毒4型（fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4）是养殖场主要流行的病原，对养禽业造成巨大的经济损失。目前尚未见可同时快速检测这2种病原的双重荧光定量PCR检测方法，本研究基于DAdV-3 GDMM10毒株和FAdV-4 GDMZ毒株Fiber2基因序列比对及遗传进化分析，分别在Fiber2基因保守区设计特异性引物，建立了能同时鉴别临床上常见的DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法。结果表明，DAdV-3 GDMM10和FAdV-4 GDMZ Fiber2基因处于两个不同进化分支上，同源性为46.10%。建立的检测DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高，最低可检出45拷贝/μL的DAdV-3样品和17拷贝/μL的FAdV-4样品；且检测结果可直接通过Tm值差异进行判定，简化操作时间。利用该双重荧光定量PCR方法对2022年度临床上采集的34份肝炎-心包积液疑似样品进行检测，DAdV-3和FAdV-4检出率分别为17.65%和2.94%。为进一步开展禽源DAdV-3和FAdV-4的分子流行病学及共感染致病机制奠定了基础。
关键词： 鸭腺病毒3型 禽腺病毒4型 Fiber2基因 实时定量PCR 临床检测
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基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体TaqMan检测方法的建立及其遗传演化分析
《畜牧兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：热休克蛋白70 （heat shock protein 70,Hsp70）是绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae, Movi）的重要膜蛋白，是机体内高度保守的生物分子，但在种间差异大，可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR（qPCR）检测方法，并进一步了解其遗传变异情况，本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征，设计特异性的引物及探针，建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎（Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG）病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定，并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示，建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强，与丝状支原体山羊亚种（Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc）、山羊支原体山羊肺炎亚种（Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp）、莱氏无胆甾原体（Acholeplasmalaidlawii, AL）、无乳支原体（Mycoplasma agalactiae, Maga）、伪结核棒状杆菌（Corynebacterium pseudotuberculosis, CP）、羊口疮病毒（orf virus, ORFV）、牛支原体（Mycoplasma bovis, Mb）等牛羊常见病原均无交叉反应；敏感性高，最低检测限为5.72 copies·μL-1;重复性优，组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%～99.4%和98.0%～100.0%;进一步分析发现，山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明，其均处于ClusterⅠA亚分支（均为山羊源）。综上，本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现，不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高；遗传演化分析证实，Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持，更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。
关键词： 绵羊肺炎支原体 Hsp70基因 TaqMan实时荧光定量PCR方法 序列分析
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兔促性腺激素抑制激素受体基因NPFFR1的克隆及其在HPT轴的表达分析
《农业生物技术学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：神经肽FF受体1 （neuropeptide FF receptor 1, NPFFR1）是促性腺激素抑制激素（gonadotropininhibitory hormone, GnIH）的主要受体，在调控动物生殖生理方面起着重要作用。为了解NPFFR1基因的功能，本研究以闽西南黑兔（Oryctolagus cuniculus）为研究对象，采用cDNA末端快速克隆（rapid amplification of cDNA ends, RACE）技术克隆了NPFFR1基因（GenBank No. OP791886），并对其进行了生物信息学和时空表达谱分析；此外，公兔腹腔注射0、0.5、5和50μg GnIH多肽，利用q PCR方法检测下丘脑-垂体-睾丸（hypothalamic-pituitary-testicular, HPT）轴中NPFFR1基因的表达水平。生物信息学分析表明，兔NPFFR1全长3 712 bp，编码432个氨基酸；其翻译的蛋白由α螺旋、无规卷曲和β折叠组成，是镶嵌于质膜的7次跨膜蛋白，与高原鼠兔（Ochotona curzoniae）和北美鼠兔（Ochotona princeps） NPFFR1高度同源。qPCR结果表明，NPFFR1基因在HPT轴中均有表达，在下丘脑的表达量显著高于垂体和睾丸（P＜0.05）。出生后，90日龄兔下丘脑NPFFR1基因表达量显著低于11、30、60和150日龄（P＜0.05）,30和120日龄兔垂体NPFFR1基因表达量显著低于11和90日龄（P＜0.05）,30日龄兔睾丸NPFFR1基因表达量显著低于11和90日龄。兔腹腔注射5～50μg GnIH多肽后，下丘脑NPFFR1基因表达量呈现剂量依赖性增加；50μg剂量组睾丸NPFFR1基因表达量显著大于5μg剂量组（P＜0.05）；注射4种剂量GnIH多肽都未引起垂体NPFFR1表达量发生改变。本研究为深入探讨兔NPFFR1在生殖生理方面的作用机制提供基础资料。
关键词： 兔 促性腺激素抑制激素（GnIH） 神经肽FF受体1基因（NPFFR1） 克隆 基因表达
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九龙江流域丰枯水期表层水体氮污染特征及其来源解析
《生态与农村环境学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为探明九龙江流域表层水体氮污染分布特征及其污染来源，于2020年7月（丰水期）和2021年1月（枯水期）开展九龙江全流域表层水体多点多断面原位观测，利用正定矩阵因子分析模型（positive matrix factorization, PMF）对不同水期全流域表层水体氮污染来源及贡献率进行解析，耦合相关性统计分析方法研究不同水期流域表层水体氮污染的关键驱动因子。结果表明，九龙江流域表层水体氮污染存在明显的水期分异特征，ρ（TN）为0.72～13.14 mg·L-1,丰水期ρ（TN）为1.39～10.95 mg·L-1,枯水期为0.72～13.14 mg·L-1。硝态氮（NO3--N）、氨氮（NH4+-N）、亚硝态氮（NO2--N）和溶解性有机氮（DON）浓度均表现为丰水期大于枯水期，但颗粒态氮（PN）浓度则表现为枯水期大于丰水期。丰水期氮污染以NO3--N、NH4+-N和DON形态为主，枯水期则以NO3--N、DON和PN形态为主。应用PMF模型对流域表层水体氮污染来源进行解析，结果表明，丰水期流域农业化肥施用引起的农业面源污染、生活污水及河流内动植物残体、微生物、矿物颗粒是流域水体氮污染的主要来源，而枯水期流域农业化肥污染、城市工业污水排放及河流中动植物残体等悬浮颗粒则是流域水体氮污染的主要来源。该结果强化了丰枯水期九龙江流域表层水体氮污染受流域农业生产活动和径流变化共同影响的认识，建议将流域农业、工业生产氮污染源头控制和氮污染的水期分异有效纳入流域水体氮污染综合管理。
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香型优质高产杂交稻新品种野香优669的选育与应用
《福建农业学报 》 2024 CSCD
摘要：【目的】选育产量、米质和抗性相协调的香型优质水稻新品种。【方法】利用亲本间的遗传多样性和农艺性状的互补性，以高产、高配合力的父本福恢669与香型、优质、抗病的不育系野香A杂交，结合多生态点抗性鉴定、高温逼熟后品质分析、多年多点品比试验等相结合。【结果】选育出优质、高产、抗病，株叶态协调的杂交稻品种野香优669。2019–2020年参加福建省中稻区域试验，全生育期两年平均139.8 d,比对照II优3301早熟1.1d，产量平均9 363 kg·hm-2，比对照增产2.24%，未达显著水平。两年稻瘟病抗性鉴定综合评价为抗稻瘟病，稻米品质达部颁一等优质食用稻品种品质标准，2021年通过福建省农作物审定委员会审定（闽审稻20 210 014）。野香优669聚合了来自双亲的22个有利基因，其中6个为单方携带，16个为双亲均携带。【结论】野香优669产量高、抗性强、品质好、口感佳，在生产上大面积推广应用，是福建省农业主推品种之一。
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基于ORF3蛋白抗体的鹅圆环病毒间接ELISA检测方法的建立
《农业生物技术学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)是一种潜在的免疫抑制病原,主要感染宿主淋巴细胞,导致免疫功能下降,易造成其他病原继发感染,给养鹅(Anser cygnoides orientalis)业带来极大危害.为建立鹅圆环病毒血清学抗体的间接ELISA方法,本研究将GoCV的ORF3基因插入到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-ORF3,经表达条件优化,以Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot分析表明,获得的重组ORF3蛋白具有良好的生物学活性.以纯化后的重组ORF3蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件建立了GoCV间接ELISA抗体检测方法.优化后的间接ELISA检测条件为:重组ORF3蛋白的最佳包被浓度为2.00 μg/mL、待检血清稀释度为1∶80、酶标二抗最佳稀释度分别为1∶4000(羊抗鸡HRP-IgG)和1∶8000(羊抗鸭HRP-IgG).采用建立的间接ELISA方法对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)、鹅源禽坦布苏病毒(Avian tembusu virus,ATmV)、鹅源H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenza virus,AIV)、鹅呼肠孤病毒(Goose reovirus,GRV)、新型鹅星状病毒(Goose astrovirus,GoAstV)、GoCV等鹅源阳性血清进行检测,结果显示,仅GoCV阳性血清为阳性结果,其他病原阳性血清检测结果均为阴性,特异性较强;重复性较好,批内和批间变异系数均小于5%.流行病学调查结果显示,福建和广东地区鸭(Anatinae)群中均存在GoCV跨种感染.本研究建立的检测GoCV血清抗体的间接ELISA方法特异性强、重复性好,可用于GoCV感染的诊断及流行病学调查研究.
关键词： 鹅圆环病毒(GoCV) ORF3蛋白 原核表达 间接ELISA 流行病调查
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氮磷钾配方施肥提高林下七叶一枝花产量和重楼皂苷含量
《植物营养与肥料学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究氮、磷、钾不同组合用量对林下栽培七叶一枝花产量及重楼皂苷含量的影响,为七叶一枝花人工栽培合理施肥提供参考.[方法]采用"3414"试验设计,利用福建南平杉竹混交林下 4 年生七叶一枝花(Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara)进行田间试验,将氮、磷、钾肥当地适宜水平定为"2",分别为N 270 kg/hm2、P2O5 375 kg/hm2、K2O 300 kg/hm2,不足"1"和过量"3"水平分别为适宜水平的 0.5、1.5 倍.在七叶一枝花收获时期,测定其植株形态、根茎产量、4 种重楼皂苷含量等指标,并计算生产效益.[结果]氮、磷、钾肥用量均显著影响七叶一枝花的植株形态、根茎产量和重楼皂苷含量,对七叶一枝花根茎产量的提升率分别为 59.75%、27.54%、63.15%,以钾肥的贡献率最高,其次为氮肥,磷肥较低.N1 水平下,增加磷、钾水平显著降低七叶一枝花的株高、茎粗和叶长,N3 水平七叶一枝花的株高、叶长均达到最高,但茎粗低于N1 和N2 水平,表明适宜氮肥用量对七叶一枝花的生长至关重要.七叶一枝花的根茎产量和总重楼皂苷含量还受肥料交互效应的影响.当N、P2O5、K2O用量分别为 270、375、450 kg/hm2(N2P2K3)和 270、375、300 kg/hm2(N2P2K2)时,根茎产量达到最高,分别为 2804、2648 kg/hm2.N2P2K3 的总重楼皂苷含量也最大,达到 1.62%,显著高于其他处理.施氮磷钾肥净增收效益在N2P2K3 处理下最高,N2P2K2 处理次之.[结论]适量的氮、磷肥配合较高的钾肥可显著提升七叶一枝花根茎产量和总重楼皂苷含量,提高七叶一枝花的经济效益.因此,在供试地区,推荐N、P2O5、K2O用量分别为270、375、450 kg/hm2.
关键词： 七叶一枝花 3414设计 植株形态 根茎产量 重楼皂苷 经济效益 氮磷钾组合
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普通丝瓜PYL基因家族鉴定及其在果实发育中的表达分析
《西北植物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探究普通丝瓜PYL基因在ABA处理下的表达模式,以期为深入研究其基因功能提供参考依据,也为分子抗性育种以及提高普通丝瓜品质和产量提供新思路.[方法]用生物信息学方法,对普通丝瓜PYL基因家族进行全基因组鉴定,染色体定位,以及基因结构、基因共线性、选择压力、进化亲缘关系和顺式作用元件分析,并通过qRT-PCR验证在不同浓度ABA下基因特征表达.[结果]在普通丝瓜全基因组中鉴定到11个LcPYL基因,CDS长度576~966 bp,编码蛋白均具有典型PYR_PYL_RCAR_like结构;共线性分析发现7对片段复制基因对,普通丝瓜PYL基因启动子含多个与植物激素相关的顺式作用元件,其成员的表达具有一定的组织特异性;普通丝瓜果实在不同浓度外源ABA处理下:2 mg/mL ABA处理LcPYLs表达无显著变化,4 mg/mL ABA处理LcPYL5、LcPYL7、LcPYL11显著上调表达,8 mg/mL ABA处理LcPYL1、LcPYL7开花当天显著表达.[结论]对普通丝瓜PYL家族成员进行了系统的鉴定与分析,明确其分子结构特征和表达模式,其中LcPYL1、LcPYL5、LcPYL7和LcPYL1 1可能是与内源ABA生物合成密切相关的关键基因.
关键词： 普通丝瓜 PYL基因家族 果实发育 外源ABA处理 表达分析
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花蓟马化学感受蛋白FintCSP2与聚集信息素苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯的结合特性
《昆虫学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】本研究旨在明确花蓟马Frankliniella intonsa化学感受蛋白(chemosensory protein, CSP) FintCSP2与聚集信息素苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯[neryl(S)-2-methylbutanoate]的结合能力。【方法】利用RT-PCR法扩增花蓟马FintCSP2的开放阅读框序列，并对其进行生物信息学分析；利用RT-qPCR检测FintCSP2在花蓟马雌成虫不同组织(触角、去除触角的头、胸、腹和足)中的表达量；利用RNAi通过向花蓟马雌成虫注射dsRNA沉默FintCSP2, 24 h时通过触角电位(electroantennogram, EAG)实验检测花蓟马对苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯的反应，利用Y型嗅觉仪测定花蓟马雌成虫对苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯的的选择性；原核表达FintCSP2重组蛋白，利用荧光竞争结合实验检测FintCSP2重组蛋白与苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯结合力；采用分子对接模拟技术和蛋白定点突变技术分析FintCSP2与苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯结合的关键氨基酸残基。【结果】花蓟马FintCSP2(GenBank登录号：MT211602.1)开放阅读框长390 bp,编码129个氨基酸，N端有一个包含20个氨基酸的信号肽，含有4个保守的半胱氨酸。氨基酸序列分析结果表明，FintCSP2氨基酸与花蓟马CSP1(GenBank登录号：WBW64307.1)、西花蓟马F.occidentalis CSPs (GenBank登录号：WBW64306.1, AJL33750.1)和牛角花齿蓟马Odontothrips loti CSP2 (GenBank登录号：WBU77202.1)的亲缘关系最近，氨基酸序列一致性分别为99.22%, 99.22%, 86.05%和65.85%。RT-qPCR结果表明，FintCSP2在雌成虫各组织中均有表达，其中在触角中的表达量最高。与对照组(注射dsEGFP)比，沉默FintCSP2显著降低花蓟马对苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯的EAG反应绝对值和选择率。分子对接预测Tyr24, Phe29, Leu38, Val71, Cys76, Cys79和Gln83这7个氨基酸残基最可能参与FintCSP2结合苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯；定点突变和荧光竞争结合实验结果表明，与野生型蛋白相比，FintCSP2-Tyr24Ala和FintCSP2-Gln83Ala突变蛋白与苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯结合能力显著下降，FintCSP2-Phe29Ala突变体蛋白失去与苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯的结合能力。【结论】花蓟马FintCSP2蛋白在识别苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯过程中起关键作用，Tyr24, Phe29和Gln83是FintCSP2结合苨肉基(S)-2-甲基丁酸酯的3个关键氨基酸残基。
关键词： 花蓟马 聚集信息素 化学感受蛋白 RNA干扰 定点突变 荧光竞争结合实验
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广叶绣球菌保鲜及干制后挥发性风味成分差异分析
《食品工业科技 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为探究广叶绣球菌采后聚丙烯膜包装在 4℃贮藏期间、热风干燥、冷冻干燥挥发性风味物质变化,采用顶空固相微萃取结合气相色谱-质谱联用技术(headspace solid phase microextraction combined with gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)进行检测和分析.结果表明,新鲜的广叶绣球菌中共检测出 30种挥发性物质,主要的成分为 1-辛烯-3-醇、3-辛醇和反式-2-辛烯-1-醇.与鲜菇相比,聚丙烯膜包装贮藏期间挥发性风味成分的种类有所增加.鲜菇到贮藏第 21d其整体风味成分较为接近,以醇类化合物为主;而第 28~49 d风味成分则以酮类和醇类化合物为主.热风干燥后检出 66种挥发性物质,其中 5-甲基-2-乙酰基呋喃的相对含量最高(58.693%);冷冻干燥后检出 40种挥发性物质,其中以 3-辛醇为主的醇类物质和以 3-辛酮为主的酮类物质相对含量较高,分别为 41.567%和 45.723%.鲜菇经热风干燥后整体风味成分差异较大,经冷冻干燥后其整体风味较为接近.由此可知,广叶绣球菌聚丙烯膜包装贮藏 28d内能较好保持原有风味;相对于热风干燥,冷冻干燥能较好保持广叶绣球菌原有风味.本研究有助于深入了解广叶绣球菌风味特征,并根据挥发性成分变化规律可有效区分不同贮藏时期,为后续保鲜方法的改进和综合开发利用提供一定的理论基础.
关键词： 广叶绣球菌 顶空固相微萃取气相色谱-质谱 贮藏保鲜 干燥方式 挥发性风味成分
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