草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10编码蛋白多克隆抗体制备及其特性分析

李永刚; 曾伟伟; 王庆; 殷亮; 王英英; 梁红茹; 刘春; 石存斌; 吴淑勤; 《水产学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：为研究草鱼呼肠孤病毒(GCRV)HZ08株S10基因节段编码蛋白的可能功能,采用PCR方法扩增草鱼呼肠孤病毒HZ08株S10基因节段,并把该基因节段克隆至表达载体pET-32a(+),获得的重组表达载体pET-32a-S10转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE分析鉴定后,再通过变性、过Ni柱纯化、透析复性纯化获得目的蛋白。然后用纯化的重组蛋白免疫昆明小白鼠,制得多克隆抗体,用间接ELISA方法测定抗体效价,用Western blot和IFA(间接免疫荧光试验)鉴定抗体特异性。结果表明,SDS-PAGE分析表达的重组蛋白约为53 ku,大小与预期相符,目的蛋白主要存在于包涵体中;过Ni柱纯化、透析复性纯化后的重组蛋白纯度可达97.4%;间接ELISA测得制备的多克隆抗体效价约为1∶106,Western blot和IFA结果显示,制备的多克隆抗体能识别HZ08毒株,表明S10编码蛋白为GCRV-HZ08株的结构蛋白。

关键词： 草鱼呼肠孤病毒 HZ08株 S10编码蛋白 多克隆抗体

 全文链接 请求原文

0~#柴油和原油水溶性成分对黑鲷肝脏7-乙氧基异吩噁唑酮-脱乙基酶活性及其mRNA表达的影响

李磊; 蒋玫; 沈新强; 王云龙; 吴庆元; 《应用与环境生物学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：燃料油和原油是海洋环境中石油污染的主要类型,其对海洋生物的毒性作用是评价海洋环境质量的基础,为了解两种石油污染在同一环境条件下对同一海洋生物的毒性差异,研究了0#柴油和原油水溶性成分(Water accommodated fraction,WAF)对黑鲷(Sparus macrocephlus)肝脏7-乙氧基异吩噁唑酮-脱乙基酶(EROD)活性及细胞色素P4501A1(CYP1A1)m RNA表达量的影响.结果显示,在富集阶段(15 d),第1天0#柴油和原油WAF 0.06 mg/L和0.03 mg/L实验组肝脏的EROD活性、CYP1A1 m RNA表达量均显著增加(P<0.05),随后0#柴油和原油WAF两个浓度实验组肝脏的EROD活性均继续上升,分别在第5天、第10天达到峰值,随后下降;0#柴油WAF两个浓度实验组肝脏的CYP1A1 m RNA表达量在第1天后即开始下降,原油WAF两个浓度实验组肝脏的CYP1A1 m RNA表达量在第5天达到峰值后开始下降.在释放阶段(10 d)结束后,除了原油WAF 0.03 mg/L实验组外,0#柴油WAF的两个浓度实验组和原油WAF 0.06 mg/L实验组肝脏的EROD活性、CYP1A1 m RNA表达量均仍然显著高于对照组水平(P<0.05).本研究表明,两种石油污染物WAF对黑鲷肝脏的EROD活性、CYP1A1 m RNA诱导存在差异,0#柴油WAF实验组EROD活性、CYP1A1 m RNA表达量均高于原油WAF实验组,且0#柴油WAF实验组EROD活性、CYP1A1 m RNA表达量下降时间早于原油实验组,原油实验条件下黑鲷肝脏的EROD活性、CYP1A1 m RNA表达量的恢复能力高于0#柴油.

关键词： 黑鲷 0#柴油 原油 水溶性成分 7-乙氧基异吩噁唑酮-脱乙基酶 细胞色素P4501A1 mRNA

 全文链接 请求原文

半滑舌鳎促黄体激素基因克隆和表达分析及其血清浓度测定

柳学周; 史宝; 王珊珊; 徐永江; 李晓晓; 《中国工程科学 》 2014 北大核心

摘要：利用RACE技术首次克隆了半滑舌鳎脑垂体中促黄体激素(LH)基因cDNA全长序列。该基因全长670 bp,开放阅读框为477 bp,编码158个氨基酸。与其他脊椎动物的LH成熟肽氨基酸序列同源性比较表明:半滑舌鳎LH与鲽形目和鲈形目同源性高58%～68%。另外,半滑舌鳎LH含有12个保守的半胱氨酸残基和1个N-糖基化位点(19～21 NQT)。实时荧光定量组织表达分析表明,LH mRNA在脑、垂体、卵巢等组织中表达,垂体中表达量最丰富,其他组织尤以脑、性腺表达量较高,推测半滑舌鳎LH可能具有广泛的垂体外生理功能;实时荧光定量PCR方法对繁殖周期雌性半滑舌鳎LH表达水平进行测定,结果表明,LH mRNA在Ⅱ～Ⅵ各繁殖周期的脑、垂体、卵巢3种组织都有表达,但表达水平有差异,在Ⅳ、V期表达量最丰富,说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。利用125I标记的放射免疫测定(RIA)技术检测繁殖周期半滑舌鳎血清LH浓度,结果表明LH在V期含量最丰富,也说明LH主要促进卵母细胞最终成熟及排卵。

关键词： 半滑舌鳎 促黄体激素(LH) cDNA克隆 实时荧光定量PCR 放射免疫测定

 全文链接 请求原文

盐度对卵形鲳鲹幼鱼渗透压调节和饥饿失重的影响

区又君; 范春燕; 李加儿; 于娜; 《生态学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：为探讨盐度对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)渗透压调节的影响,研究了深水网箱养殖的卵形鲳鲹幼鱼鳃Na+-K+-ATP酶(NKA)活性,血浆、鳃和肾渗透压以及饥饿失重在盐度渐变条件下的反应。实验设5个盐度梯度组,分别为5、15、25、30和35。结果显示,鳃NKA活性除盐度15外都呈先下降后升高随之回落并趋于稳定的趋势,在2 d后的各时间节点随盐度变化呈"U"型分布;血浆渗透压在相同盐度下随时间延长呈先升高后下降再升高随后回落并趋于稳定,2 d后在各时间节点与盐度呈正相关关系,盐度30和35组的血浆渗透压显著高于其它盐度组(P<0.05);肾脏对盐度变化的渗透调节比鳃敏感,在低盐度时(30以下),鰓和肾共同完成对渗透压的调节,在较高盐度(30以上),肾对渗透压的调节起主导作用。盐度变化对卵形鲳鲹的饥饿失重率有极显著的影响。研究表明,卵形鲳鲹幼鱼对盐度的渗透调节能力较强,在盐度5—35范围内的盐度变化均能适应,一般在1—2 d内可达到稳定,且更适于在低盐度水环境中生活。

关键词： 卵形鲳鲹 盐度渐变 Na+-K+-ATP酶 渗透压 饥饿失重

 全文链接 请求原文

河豚鱼产业调研报告(下)

马爱军; 房金岑; 陈蓝荪; 龙程; 朱永祥; 《海洋与渔业(水产前沿) 》 2014

摘要：通过调研,我国河豚鱼产业总体健康运行,特别是养殖河豚鱼产品基本无毒,受到市场喜爱,发展前景良好,但国内市场封锁政策限制了产业发展。

 全文链接 请求原文

西伯利亚鲟桑葚心病理组织学和病因的初步研究

常藕琴; 刘晓勇; 潘厚军; 石存斌; 孙慧武; 吴淑勤; 《水产学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：为了对心脏囊肿状病变的西伯利亚鲟进行病理组织学观察和病因初步探讨,使用病理组织学和电镜观察技术,对患病西伯利亚鲟各器官进行组织病理学观察。结果表明,患病西伯利亚鲟心脏表面可观察到米粒大、息肉状、紫褐色的囊状肿物,似桑葚状,心外膜上皮细胞和结缔组织明显增生,形成囊肿。组织病变为心外膜囊肿,呈动态发展过程,主要表现为囊肿上皮由扁平变为立方上皮;囊肿壁逐渐增厚与分化,使囊腔不断增多变大,腔内有大量未分化的圆球形、梭形等不同成熟度的血细胞,形成血管组织,并浸润着大量游离或团状分布细胞,整个病变类似一种肿瘤型的恶性增生,心肌细胞肿胀,断裂,溶解,坏死;肝细胞脂肪变性并浸润炎性细胞;肾间质和脾脏淋巴细胞增多。鳃小片之间观察到大量细菌侵袭上皮细胞;鳃小片上皮细胞严重肿胀增生。电子显微镜观察到心脏、肝脏、脾脏和肾脏中有大量细菌;该病可能与微量元素有关,所观察到的细菌不是直接病因。本实验对西伯利亚鲟桑葚心病的组织病理变化进行了较为系统的研究,为进一步查明病因、临床诊断防治和致病机理等相关研究提供基础资料。

关键词： 西伯利亚鲟 桑葚心 组织病理学

 全文链接 请求原文

中国罗非鱼产品出口贸易结构分析

张红燕; 袁永明; 贺艳辉; 代云云; 袁媛; 《中国渔业经济 》 2014

摘要：中国是全球罗非鱼最大养殖生产国和出口贸易国,罗非鱼在水产品出口贸易中占有重要的地位。为了全面掌握中国罗非鱼出口贸易结构的状况变化,论文以2002~2012年的贸易统计数据为基础,从罗非鱼出口产品结构、市场结构和地区结构等方面对出口贸易结构进行分析比较。通过实证分析对中国罗非鱼产品出口贸易结构进行比较,以期对我国罗非鱼出口贸易结构的调整和优化提供相关建议,促进中国罗非鱼产品出口贸易的良性发展发挥积极作用。

关键词： 罗非鱼 出口贸易 贸易结构 分析

 全文链接 请求原文

牙鲆抗迟缓爱德华菌病家系建立与抗病性能评价

张英平; 陈松林; 孙何军; 王磊; 范彩霞; 于洋; 张文婷; 杨英明; 张永珍; 《水产学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：为筛选出抗迟缓爱德华菌的牙鲆家系,实验以已经选育出的牙鲆抗病和快速生长家系以及从韩国引进的选育群体为亲本建立了牙鲆家系56个,并对其中32个家系进行了迟缓爱德华菌人工感染实验。确定了迟缓爱德华菌对牙鲆家系的半致死浓度LD50为3.69×105CFU/mL后,从每个家系中随机抽取75尾,按照0.2 mL/10 g体质量腹腔注射半致死浓度的菌液,并设置1次重复。人工感染时水温控制在(19±1)℃。从32个家系中共选取4 800尾5月龄牙鲆幼鱼进行感染,16 d实验结束后统计各家系存活率为8.2%~66.1%,平均存活率为31.2%。不同家系对迟缓爱德华菌的抗感染能力表现出显著差异(P<0.05)。筛选出6个存活率高于45%的抗病家系,发现2007年筛选出的抗鳗弧菌病家系F0768的后代家系在迟缓爱德华菌感染后的存活率普遍很高,表现出抗迟缓爱德华菌病的能力。研究为选育抗鳗弧菌病和抗迟缓爱德华菌病的牙鲆优良品系奠定了基础,对牙鲆抗细菌病的分子机理研究及抗病新品种选育具有重要意义和应用价值。

关键词： 牙鲆 迟缓爱德华菌 家系 抗病力 选育

 全文链接 请求原文

湛江近海虾拖网副渔获组成分析与评价

杨炳忠; 杨吝; 谭永光; 张鹏; 晏磊; 《海洋科学 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：为了探明南海北部虾拖网副渔获的种类组成、优势种类和幼鱼比例等情况,2012年8月1~5日作者于湛江近海进行了虾拖网副渔获调查。结果表明:湛江近海虾拖网副渔获种类极多,副渔获物与虾类的质量比为3.9:1;副渔获物的主要种类为蟹类和鱼类;蟹类副渔获物的优势种类分别为红星梭子蟹(Portunus sanguinolentus)、三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)和远海梭子蟹(Portunus pelagicus),其相对重要性(IRI)分别为7558.72、6540.72和2826.41;鱼类优势副渔获物的种类分别为褐斑三线舌鳎(Cynoglossus trigrammus)、少鳞鱚(Sillago japonica)、多齿蛇鲻(Saurida tumbil)和六带石斑鱼(Epinephelus sexfasciatus),其IRI分别为3158.94、1755.57、1294.44和1058.46;副渔获物的幼鱼比极高。最后,作者结合相关研究,对如何从技术层面解决南海区虾拖网严重的副渔获问题进行了探讨,以促进南海区虾拖网渔业的可持续发展。

关键词： 虾拖网 副渔获 渔获组成 幼鱼比例

 全文链接 请求原文

大菱鲆促黄体激素受体基因的克隆及其生物信息学分析

贾玉东; 孟振; 牛化欣; 刘新富; 高淳仁; 雷霁霖; 《水产学报 》 2014 北大核心 CSCD

摘要：通过兼并引物扩增及RACE技术,克隆大菱鲆促黄体激素受体(luteinizing hormone receptor,LHR)基因,分析其相应生物信息学特征和组织表达。结果显示:LHR基因序列全长3 184 bp,编码685个氨基酸,同大西洋庸鲽同源性最高。氨基酸序列分析发现,该基因编码蛋白为疏水性蛋白,相对分子量76.54 ku,理论等电点7.22,存在信号肽序列和跨膜区;亚细胞定位主要在内质网和细胞膜;预测该蛋白含有33个磷酸化位点、5个糖基化位点、6个富含亮氨酸重复序列、7个跨膜保守结构域,二级结构以无规则卷曲为主,三级结构其结构域呈α螺旋状构象;蛋白功能预测表明,LHR主要在辅助、运载、翻译和代谢调节过程中发挥关键作用。组织表达分析表明,LHR基因除在卵巢大量表达外,在其他非性腺组织也有表达,尤其是在肝脏表达较高。上述结果为深入探讨LHR基因在大菱鲆性腺发育过程中的生物学功能奠定了遗传信息基础,也为研究其他海水养殖鱼类生殖调控提供重要参考。

关键词： 大菱鲆 促黄体激素受体 克隆 生物信息 mRNA表达

 全文链接 请求原文