科研产出
基于LC-MS代谢组学解析凡纳滨对虾在微冻贮藏过程中的代谢变化与品质的相关性
《大连海洋大学学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为探究微冻贮藏对虾的品质变化机制，以体质量为（13±1）g的凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）为研究对象，通过液相色谱-质谱（LC-MS）联用非靶向代谢组学，探究了微冻贮藏（-3℃）过程中第0、10、20、30天时对虾的代谢变化，以及肌肉的持水力、质构、pH、肌原纤维蛋白含量、疏水性和浊度等品质指标的变化，并结合代谢物结果筛选出反映品质指标的关键代谢物。结果表明：不同微冻贮藏时间下，对虾肌肉的总体代谢组成存在较大差异；基于OPLS-DA模型对0 d vs 10 d、0 d vs 20 d、0 d vs 30 d 3组数据进行筛选，微冻贮藏期间对虾肌肉中共检测出79种共有的差异代谢物，其随着贮藏时间的延长发生了显著变化，且涉及的主要代谢通路有氨基酸生物合成、组氨酸与嘌呤衍生生物碱生物合成、赖氨酸生物合成、柠檬酸循环，以及鸟氨酸、赖氨酸和烟酸衍生生物碱生物合成；贮藏期间，对虾肌肉的持水力、硬度、弹性和肌原纤维蛋白含量下降，pH、疏水性和浊度上升；代谢通路与品质指标的相关性分析显示，L-赖氨酸、L-天冬氨酸、柠檬酸和异柠檬酸可作为指示微冻凡纳滨对虾品质变化的关键代谢物。本研究从分子层面揭示了微冻对虾肌肉的代谢变化，为快速、准确地反映对虾肌肉的实时品质提供了科学参考。
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中华绒螯蟹甲壳肽EsCrus3和EsCrus4表达模式与免疫功能
《水生生物学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：研究从中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)中克隆并鉴定了两个Ⅰ型甲壳肽(Crustin)基因,分别命名为EsCrus3和EsCrus4.随后通过生物信息学、基因表达分析、蛋白表达与纯化、免疫功能验证等研究手段,分析了这2个新型抗菌肽的表达、结构和功能.EsCrus3的cDNA序列全长567 bp,开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)为351 bp,编码116个氨基酸(Amino acid,aa);EsCrus4序列全长743 bp,ORF区288 bp,编码95个aa.两者都含有信号肽、富半胱氨酸的结构域(Cysteine-rich region,CRR)和WAP(Whey acidic protein)结构域.EsCrus3和Es Crus4氨基酸序列的一致性仅为30.77%,并且进化分析显示Es Crus3和Es Crus4分别位于两个具有分类意义的分支上,提示两者生物学功能可能存在差异.EsCrus3和EsCrus4均在卵巢中高度表达且具有相似的表达水平,在金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激时呈上调表达趋势,其中EsCrus3响应速度更快,在刺激2h时上调表达,EsCrus4则在刺激后12-24h时显著上调.重组蛋白Es Crus3和Es Crus4对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均具有不同程度的结合活性,并且对不同微生物多糖结合活性也存在明显差异.Es Crus3对革兰氏阳性菌的肽聚糖(PGN)和脂磷壁酸(LTA)具有很高结合活性,对革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)和真菌β-葡聚糖也有一定结合活性,而Es Crus4只对PGN具有显著结合活性.上述研究结果表明EsCrus3响应病原刺激更迅速、与病原多糖结合能力更强,提示其在卵巢的免疫防御体系中发挥更重要作用.此外,EsCrus3和EsCrus4序列和功能的差异为新型药物的挖掘提供了基础数据.
关键词： 抗菌肽 Ⅰ型Crustin 表达分析 结合活性 中华绒螯蟹
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响应面优化QuEChERS结合UHPLC-MS/MS法测定乌鳢肌肉中四环素类抗生素
《食品工业科技 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为了评估乌鳢中四环素类药物的残留风险，建立了乌鳢肌肉中4种四环素类药物残留的快速、简单、廉价、高效、耐用和安全的前处理方法（Quick、Easy、Cheap、Effective、Rugged、Safe,QuEChER）。采用Box–Behnken design（BBD）响应面优化法，优化了提取和净化条件。样品经10 mL 1%甲酸酸化乙腈和2 mL 0.1 mol/L Na2EDTA-McIlvaine缓冲溶液提取，以150 mg PSA和200 mg C18进行净化，采用超高效液相色谱-串联质谱法（Ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS）检测。结果表明，该方法在0.50～100 ng/mL浓度范围内线性良好（r≥0.999），检出限（Limit of Detection,LOD）和定量限（Limit of Quantitation,LOQ）分别为0.25～0.75μg/kg和0.84～2.00μg/kg。在乌鳢肌肉中四环素、土霉素、金霉素和多西环素的平均回收率在89.5%～1187%之间，相对标准偏差（RSD）在1.11%～8.88%之间。该方法简便、灵敏、准确，可用于乌鳢中四环素含量的快速测定。
关键词： QuEChERS 超高效液相色谱-串联质谱 乌鳢 四环素类 风险评估
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基于组合湿地构建的池塘循环水养殖系统运行效果
《淡水渔业 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为探索适用于高密度池塘养殖尾水处理和水循环利用的生态工程技术,本研究构建了一套基于组合湿地的池塘循环水养殖系统.在考察组合湿地对池塘尾水中氮、磷等物质去除效果和养殖过程中池塘水质动态变化的基础上,分析评估了系统氮、磷利用效率.结果显示:在5.54 m3/(m2·d)高水力负荷下,组合湿地对氨氮(TAN)、硝态氮(NO3--N)、总悬浮物(TSS)、总磷(TP)、总氮(TN)和化学耗氧量(COD)去除率分别为68.94%、-25.38%、60.86%、43.56%、16.67%和27.98%,湿地出水水质满足渔业养殖用水要求;养殖过程中,循环塘TAN、NO2--N浓度较低,均值分别为0.72 mg/L、0.10 mg/L,显著低于对照塘,DO均值为4.85 mg/L,显著高于对照塘且较为稳定;主养品种黄颡鱼产量达到391.38 kg,较对照塘提高9.11%;氮、磷相对利用率分别提高10.68%和11.20%,绝对利用率分别提高11.06%和11.49%,环境积累占氮、磷支出比例分别减少8.90%和28.21%.结果表明组合湿地-池塘循环水养殖系统在节约水资源、提升养殖效果、提高氮磷物质利用效率等方面具有明显优势,是一种值得深入研究并推广应用的生态养殖模式.
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禁食对8种幼鱼游泳运动能力的影响
《中国水产科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为了探究不同种类幼鱼在禁食胁迫下的游泳能力,本研究以青鱼(Mylopharyngodon piceus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobilis)、鲫(Carassius auratus)、长薄鳅(Leptobotia elongata)、泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)、台湾泥鳅(Paramisgumus dabryanus ssp.)8 种幼鱼为对象,采用流速递增法测定了不同禁食时间(0 d、2 d、5 d、10 d、15 d)条件下 8 种鱼类的感应流速(Uind)、临界游泳速度(Ucrit)、爆发游泳速度(Uburst).结果表明:8 种鱼类游泳能力均为感应流速<临界游泳速度<爆发游泳速度.感应流速平均值的变化范围在(6.12~12.78)cm/s,其中草鱼、鲢和鳙的感应流速较接近且对流速的感应较敏感,感应流速为 4.75~7.75 cm/s.8 种实验鱼的游泳速度存在显著差异(P<0.05),其中青鱼和长薄鳅的临界游泳速度和爆发游泳速度最高,分别为(121.65±3.19)cm/s、(143.48±5.77)cm/s、(85.08±3.23)cm/s、(132.68±8.52)cm/s,游泳能力较差的为台湾泥鳅[(19.28±1.90)cm/s、(31.53±2.14)cm/s].禁食对感应流速的影响不显著(P>0.05),但实验鱼的临界游泳速度和爆发游泳速度随禁食时间的延长呈线性下降,其中临界游泳速度的下降幅度较爆发游泳速度更为显著(P<0.05).在禁食 0 d和 2 d时,实验鱼的临界和爆发游速无显著差异(P>0.05);禁食 5 d时,两者开始呈现下降趋势;禁食 5 d 后,临界和爆发游速分别下降了 13%~51%和 9%~39%.禁食 10 d 后,临界和爆发游速分别下降了29%~70%和 20%~55%,其中 10 d禁食期间的游泳速度降低幅度最为显著.因此,禁食 10 d是影响鱼类游泳能力的关键时期.禁食对幼鱼的感应流速无显著影响,但临界游泳速度和爆发游泳速度受禁食时间影响明显,且禁食时间越长,游泳能力下降越显著.此外,临界游泳速度与爆发游泳速度之间的差异可能源于不同游泳方式在能量消耗方面的差异.
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不同抗流能力大黄鱼(Larimichthys crocea)肌肉转录组学差异分析
《海洋与湖沼 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为揭示不同抗流能力的大黄鱼(Larimichthys crocea)肌肉基因表达水平的变化,筛选抗流相关基因,解析大黄鱼抗流性状形成的分子基础,收集福建福鼎沙埕湾主养区1 000尾大黄鱼,在设计制作的抗流实验水槽中,以流速1.0 m/s为筛选条件,将抗流时间>30 min的大黄鱼归为抗流组(HM组),抗流时间<5 min的大黄鱼归为非抗流组(SM组),对其肌肉进行转录组分析,并统计抗流分组后48h内大黄鱼的累计死亡率.转录组结果显示,HM组与SM组文库共富集到1806个差异表达基因(DEGs),其中1 090个上调,716个下调.GO功能注释发现显著富集的条目主要集中在肌肉收缩相关功能,KEGG富集分析发现上调的DEGs主要富集在心肌收缩、氧化磷酸化、黏着斑、ECM-受体相互作用、AGE-RAGE、MAPK、心肌细胞中的肾上腺素能等相关通路;下调的DEGs主要富集在真核生物核糖体的发生、蛋白酶体、内质网中的蛋白加工、RNA转运、泛素介导的蛋白水解信号通路等.此外,RT-qPCR结果表明,随机选取的DEGs与RNA-seq结果的表达趋势一致.48 h的累计死亡率结果显示,SM组大黄鱼的死亡率显著高于HM组(P<0.05).得出结论认为,抗流能力强的大黄鱼可能通过改变细胞内能量代谢及肌肉收缩的方式来提高机体应对水流的能力,且在较强水流刺激后能够获得较高的成活率,这为后续培育适宜深远海养殖的大黄鱼抗流新品种提供了理论依据.
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新疆裸重唇鱼3种同工酶的电泳分析
《华北农学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为了解新疆裸重唇鱼的生化遗传特性,丰富新疆裸重唇鱼种质资源研究的内容,借助聚丙烯胺凝胶对新疆裸重唇鱼5 种组织(心脏、眼睛晶状体、肝脏、肾脏和脾脏)中的乳酸脱氢酶(LDH)、苹果酸脱氢酶(MDH)以及酯酶(EST)进行了电泳分析.结果表明:新疆裸重唇鱼的LDH、MDH和EST同工酶系统具有个体差异性和组织特异性.组织特异性主要表现在同工酶位点表达及其表达活性程度不同两方面,可能受遗传和代谢双重调控,与各组织执行生理功能密切相关.LDH-C基因只在肝脏中表达,酶谱图上靠近阴极附近,为典型"肝带".新疆裸重唇鱼同工酶个体差异性可能是其在漫长的进化过程中为了能适应特殊生境的需要.新疆裸重唇鱼心脏中上清液型苹果酸脱氢酶(s-MDH)最多表达出6 条酶带,可能是新疆裸重唇鱼在进化过程中四倍体化使基因重复的结果.研究结果可从生化遗传角度为新疆裸重唇鱼种质资源保护利用提供一定理论依据.
关键词： 新疆裸重唇鱼 乳酸脱氢酶 苹果酸脱氢酶 酯酶 组织特异性 个体差异性
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环境DNA技术在长江口鱼类多样性分析中的应用
《水生生物学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：研究采用高通量测序技术对长江口水域环境DNA(Environmental DNA,eDNA)样品进行分析,并与传统渔业资源调查结果对比,阐述长江口鱼类群落在其生境内的多样性特征,探讨eDNA技术在长江口水域鱼类多样性研究中的应用前景.结果显示,eDNA技术共检测到10目21科41属45种鱼类,各站点鱼类丰富度之间无显著差异,而多样性之间存在显著差异性.底拖网法共捕获11目16科29属33种鱼类.有18种鱼类在两种方法中均检测到,占鱼类总数的30%.两种方法检测到的鱼类中均以鲈形目(Perciformes)最多,其次是鲤形目(Cy-priniformes),两种方法的结果均表明刀鲚(Coilia nasus)和凤鲚(Coilia mystus)为优势物种.研究表明环境DNA技术在长江口水域渔业资源监测中具有可行性,在禁捕环境下可根据实际情况采用不同方法对渔业资源进行监测.
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紫菜腐霉拮抗菌的筛选和鉴定
《渔业科学进展 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：生物防治广泛用于农作物的病害防治，该方法在藻类病害防控方面尚未有相关的报道。腐霉（Pythiumsp.）是引起紫菜（Neopyropia）赤腐病（redrotdisease）的主要病原，本研究的目的是筛选和鉴定对紫菜腐霉有拮抗能力的细菌。从养殖藻类及其养殖环境中分离鉴定了385株细菌，通过平板对峙法筛选到9株对腐霉有拮抗作用的细菌，进一步通过含毒介质法筛选到3株胞外产物对腐霉具有抑制活性的细菌（P3、P6和P19）。3株拮抗菌对8株腐霉均有拮抗活性，对腐霉生长的抑制率分别为52.09%～97.95%（P3）、26.81%～78.04%（P6）、10.47%～41.91%（P19）。通过16S rRNA鉴定和多位点序列进化分析（16Sr RNA-dnaA-dnaN-recA），将P3和P6鉴定为杀鱼假交替单胞菌（Pseudoalteromonaspiscicida）,P19鉴定为解肽假交替单胞菌（Pseudoalteromonaspeptidolytica）。本研究筛选得到的拮抗菌为下一步建立紫菜赤腐病的生物防治方法奠定了基础。
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高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定稻虾综合种养环境中苯醚甲环唑和丙环唑残留量
《分析试验室 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：建立了稻虾环境中水体、底泥、水草、饲料和克氏原螯虾肌肉、鳃丝和肝胰腺等组织中苯醚甲环唑和丙环唑的高效液相色谱-三重四极杆质谱（HPLC-MS/MS）检测方法。水体采用HLB固相萃取小柱富集；其余样品用乙腈∶水（4∶1, V/V）提取，并用石墨化炭黑（GCB），乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和中性氧化铝小柱对萃取液进行净化。采用正离子模式扫描，多反应监测模式（MRM）检测。苯醚甲环唑和丙环唑在1～50μg/L范围内线性关系良好，相关系数分别为0.9998和0.9995，仪器检出限为0.5μg/L，仪器定量限为1.0μg/L；底泥、水草、饲料、肌肉、鳃丝和肝胰腺样品的方法检出限为0.5μg/kg，方法定量限为1.0μg/kg，水体样品方法检出限和定量限分别为5.0×10-3μg/L和1.0×10-2μg/L。不同基质中分别添加低、中、高浓度的苯醚甲环唑和丙环唑，回收率分别在82.4%～104.8%和80.5%～110.9%，相对标准偏差（RSD）均在15%以内。
关键词： 高效液相色谱-三重四极杆质谱联用法 苯醚甲环唑 丙环唑 克氏原鳌虾 残留
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