灵芝酸A对前列腺癌LNCaP细胞的生长抑制作用及机制

徐宾; 贾薇; 王忠; 张赫男; 吴迪; 唐传红; 杨焱; 刘振东; 张劲松; 汪雯翰; 《菌物学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：本研究利用alamarBlue~?测定细胞活力法、流式细胞术(annxin V-FITC)/PI双染色测定细胞凋亡法和高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)测定5α-还原酶活性法评价灵芝酸A对前列腺癌的体外抗肿瘤活性,并进一步利用流式细胞术2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯(2’,7’-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA)染色测定ROS释放量法、实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质免疫印迹(western blot,WB)检测雄激素受体(androgen receptor,AR)基因和凋亡相关基因表达的方法,探讨其作用机理。研究结果表明灵芝酸A可通过抑制5α-还原酶活性,抑制睾酮诱导的前列腺癌LNCaP细胞增殖,诱发细胞早期凋亡来发挥抗肿瘤活性;进一步研究表明,灵芝酸A降低前列腺癌细胞中AR的表达,并通过引发细胞线粒体功能障碍释放过量活性氧(reactive oxygen species,ROS)诱发细胞凋亡,而qPCR和WB的数据进一步表明细胞线粒体功能障碍与抑癌基因caspase-3、bad和aifm1的高表达密切相关。

关键词： 灵芝酸A LNCaP细胞 细胞凋亡 活性氧 雄激素受体 作用机理

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国外城市化进程中农业和农村发展的经验借鉴

杨娟; 郑秀国; 吴子平; 钱婷婷; 赵京音; 《上海农业学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：世界上发达国家在工业化和快速城市化过程中几乎都曾经历过乡村衰退,有些国家很好地调整了工农、城乡关系,走向城乡融合发展,农业发展稳定,农业就业收入与其他行业收入差距不大,而有些国家没能很好协调好工农与城乡关系,仍在不断探索中.通过回顾日本、韩国、英国、美国和阿根廷的农业农村发展历史,重点分析上述国家在城市化发展背景下,农业农村发展中遇到的问题及其解决方法和最后的效果,进而提出对我国农业和农村建设有借鉴作用的建议:应从村镇建设、政府扶持、农业发展、合作社发展和科技创新五方面借鉴国内外不同国家在城市化过程中的农业农村发展经验.

关键词： 乡村振兴 国际经验 农业发展 农村建设

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携带TYLCV的B型和Q型烟粉虱对非传毒寄主的选择差异

汪怡蓉; 焦晓国; 常晓丽; 王超; 《植物保护学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：烟粉虱Bemisia tabaci寄主范围广、适应性强,可通过直接取食、分泌蜜露和传播植物病毒危害蔬菜和园艺作物。目前,B型和Q型烟粉虱是国内发生的主要生物型,也是传播番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的主要媒介。TYLCV不仅影响B型和Q型烟粉虱取食行为、生殖和寿命,而且影响其对传毒寄主的选择(卫静等,2015)。烟粉虱对适宜寄主的准确选择有利于其种

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基于HOG+SVM的田间水稻病害图像识别方法研究

马超; 袁涛; 姚鑫锋; 籍延宝; 李琳一; 《上海农业学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：目前,基于机器视觉的病虫害识别方法普遍存在病虫害图片拍摄条件要求严苛、图片预处理步骤繁琐、图像处理技术难度高的问题,导致该技术在生产中实用性不强.本文以田间开放环境下采集的水稻主要病害图片为研究对象,提出一种基于方向梯度直方图(HOG)特征和支持向量机(SVM)的水稻病害检测方法,先对训练集中病斑样本块和非病斑样本块提取HOG特征,运用HOG特征作为输入向量代入SVM分类器进行训练,训练好的分类器用于整幅图的病斑自动检测.研究结果表明,HOG+SVM对多种病斑检测的综合识别率可达94%以上,HOG+SVM病斑定位正确率可达91. 7%.该方法具有拍摄环境兼容性较高,处理过程简便,对样本数量要求不高等优点,可对农田开放环境下采集的图片进行病害识别和评估.

关键词： 方向梯度直方图特征 支持向量机 水稻 病害识别

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玛咖秋葵咀嚼片直接压片工艺的优化

赖谱富; 李怡彬; 陈君琛; 汤葆莎; 吴俐; 翁敏劼; 《热带作物学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：以黄秋葵超微粉作为压片辅料,优选玛咖秋葵咀嚼片的最佳工艺参数。采用粉末直接压片法加工玛咖秋葵咀嚼片产品,选取片重差异、崩解时限、硬度及脆碎度的综合评定值为评价指标,利用单因素试验研究充填压力、充填深度、转台速度和原料粒度对产品质量的影响,并通过响应面优化法确定最佳工艺。结果表明,玛咖秋葵咀嚼片产品的最佳工艺为充填压力31 kN、充填深度10 mm、转台速度25 r/min和原料粒度300目。本研究为进一步综合利用玛咖资源提供了科学依据,促进了玛咖产品的研发。

关键词： 玛咖 直接压片 黄秋葵 工艺优化 咀嚼片

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蛹虫草液体发酵菌丝体和固体栽培子实体中活性成分的比较

朱丽娜; 高新华; 刘艳芳; 张红霞; 周帅; 张忠; 李传华; 唐庆九; 《上海农业学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：以蛹虫草菌株CM-H0810在麦粒固体培养基上培养获得的子实体和液体发酵培养获得的菌丝体为材料,对其中的多糖、核苷、游离糖醇和小分子糖类及氨基酸成分进行比较.单糖组成分析和HPSEC-MALLS-RI联用分析结果表明:固体培养子实体和液体发酵菌丝体中多糖的单糖组成和HPSEC图谱有显著差别,固体培养的子实体中多糖的重均分子质量集中在1.702×106-4.092×107 g/mol,液体发酵菌丝体多糖的重均分子质量集中在1.105×105 g/mol.HPLC测定核苷类成分的结果表明:固体培养的子实体中主要核苷类成分为尿苷、鸟苷、腺苷、虫草素和N6-(2-羟乙基)腺苷,液体发酵菌丝体的主要核苷类成分为尿苷、鸟苷、腺苷和虫草素.HPAEC测定游离糖醇小分子糖类的结果表明:蛹虫草子实体存在游离的海藻糖、甘露醇和葡萄糖且海藻糖含量高达20.07%、而液体发酵菌丝体存在游离的甘露醇、阿糖醇和葡萄糖且甘露醇含量高于子实体中的.氨基酸组成分析表明:液体发酵培养菌丝体中必需氨基酸总量比固体培养子实体中高17.1%,且必需氨基酸与非必需氨基酸的比值、必需氨基酸与氨基酸总量的比值较为理想,分别为0.62和0.38.

关键词： 子实体 菌丝体 多糖 核苷 糖醇 氨基酸

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猪流行性腹泻病毒S2截短肽的原核表达及其线性B细胞表位区鉴定

李凤平; 刘英杰; 董世娟; 王瑞阳; 王剑; 于瑞嵩; 李震; 《微生物学通报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：【背景】由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻给养猪业造成了巨大的经济损失。PEDV S蛋白可以诱导宿主产生中和抗体。【目的】原核表达PEDV CV777疫苗株S2截短肽(aa:961-1 382)并制备其多克隆抗体;鉴定表达的S2截短肽上的线性B细胞表位区。【方法】将经密码子优化的PEDV S2截短肽编码DNA (s2t)克隆至载体p ET-28a中并转化Escherichia coli BL21(DE3),利用IPTG诱导S2截短肽表达。以经SDS-PAGE切胶纯化的重组S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。在E. coli BL21中GST融合表达覆盖S2截短肽序列全长、彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽。以制备的抗S2截短肽兔血清为一抗,通过Westernblot(WB)筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S2截短肽上的线性B细胞表位区。【结果】重组PEDV S2截短肽的相对分子质量约为50 kD;诱导4 h表达量最高,且主要形成包涵体。WB结果显示,纯化的S2截短肽能被猪抗PEDV血清识别;以纯化的S2截短肽免疫新西兰大白兔制备多抗血清,ELISA法检测抗体效价位于1:25 600-1:102 400之间。免疫组化和间接免疫荧光分析均表明,制备的多抗血清可以识别Vero细胞培养的PEDV DR13弱毒株。以制备的多抗血清通过WB从52个GST融合表达的16肽中鉴定到11个阳性反应性16肽。WB分析显示,得到的阳性反应性16肽都可以被猪抗PEDV血清识别。鉴定到的阳性16肽在S2截短肽上形成4个线性B细胞表位区(aa:969-984;1 065-1 096;1 225-1 280;1 361-1 382)。【结论】高效价抗PEDV S2截短肽多克隆抗体的制备和S2截短肽上线性B细胞抗原表位区的确定有助于了解S蛋白的结构与功能,为建立有效的PEDV检测方法奠定了基础。

关键词： 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 多克隆抗体 线性B细胞表位

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与猪流行性腹泻病毒M蛋白互作的宿主蛋白的鉴定

王瑞阳; 于瑞嵩; 陈冰清; 李凤平; 谢春芳; 司伏生; 董世娟; 李震; 《微生物学通报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：【背景】猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚。【目的】利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDVM蛋白相互作用的蛋白,为揭示M蛋白在病毒增殖过程中发挥的功能提供研究基础。【方法】将MOI=0.1的PEDV DR13疫苗株接种于长成单层的Vero细胞,感染36 h后,收集细胞并进行裂解。利用抗M的单克隆抗体沉淀与M相互作用蛋白复合物,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行鉴定并利用细胞功能富集分析(Gene ontology,GO)对感染组鉴定到的细胞蛋白进行分析,确定两个细胞内源性蛋白为候选蛋白,进行免疫共沉淀(Co-IP)验证和共定位分析。【结果】基于鉴定蛋白的肽段数的方法分析显示,感染组与对照组相比,鉴定了218个与M蛋白相互作用的细胞内源性蛋白,分别与蛋白质合成、代谢、细胞信号通路转导等密切相关,选择细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)、真核翻译起始因子3亚基L蛋白(eIF3L)为候选蛋白进行Co-IP(Co-immunoprecipitation)验证和共定位分析,结果证实CDC42、eIF3L蛋白分别与M蛋白在细胞内存在相互作用。【结论】鉴定出PEDV M蛋白能够与宿主细胞CDC42和eIF3L蛋白相互作用,并鉴定出其他可能与M蛋白发生相互作用的宿主蛋白60个,为开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用研究提供了重要理论依据。

关键词： 免疫共沉淀 猪流行性腹泻病毒 CDC42 eIF3L 膜蛋白 蛋白互作

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羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化

刘成倩; 李红; 高骏; 姚惠娟; 易建中; 孙凤萍; 《上海农业学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：根据Gen Bank上公布的Latexin基因核酸序列设计并合成引物,用RT-PCR方法扩增出Latexin基因,并将其克隆到T载体,转化构建到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-Latexin.将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,并进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析.结果表明:所得重组蛋白大小约32 ku,以可溶形式存在,且该蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应.

关键词： Latexin基因 羧肽酶抑制剂 原核表达

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硝普钠对红掌愈伤形成及植株再生的影响

李水根; 李秀芬; 李记开; 朱建军; 《上海农业学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：以红掌‘阿拉巴马’的间接不定芽再生体系为基础,研究了不同浓度的硝普钠(SNP)对红掌叶片诱导愈伤组织发生、不定芽再生及植株生根的影响.结果 表明:在愈伤诱导培养基中添加SNP可一定程度上影响红掌愈伤组织的发生,其中20 μmol/L SNP处理可显著提高愈伤的发生频率和鲜重,当SNP的浓度为80 μmol/L时,愈伤的发生频率和鲜重均受到抑制.在不定芽分化培养基中添加SNP对不定芽的分化率没有显著影响,但40 μmol/L SNP处理可显著提高不定芽的数量.将植株转接到添加20 μmol/L SNP的生根培养基上,不定根的数量显著增加,但SNP处理对不定根的长度没有显著影响.综上,适宜浓度的SNP处理可促进红掌愈伤组织的诱导、不定芽再生和植株生根.

关键词： 红掌 愈伤发生 离体再生 硝普钠

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