科研产出
鲍疱疹病毒原位LAMP检测方法的建立与初步应用
《水产学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为精确定位鲍疱疹病毒(HaHV-1)在宿主不同组织器官中的分布,明确HaHV-1的组织亲嗜性和侵染进程,实验基于环介导等温扩增技术(LAMP)和原位杂交技术建立了HaHV-1的原位LAMP检测方法.利用该方法研究了HaHV-1人工感染实验不同时间节点,病毒在杂色鲍主要器官的分布规律和组织亲嗜性.并对已报道的HaHV-1 LAMP扩增引物进行优化,实现对载玻片上原位固定靶组织内病毒DNA的稳定、特异扩增,筛选最佳显色时间等原位杂交反应条件,最后通过免疫酶标技术分析HaHV-1在组织样本内的分布情况.结果显示,HaHV-1原位LAMP检测方法最适显色时间为60 min.利用该方法对攻毒后24、36、48、60和72 h,HaHV-1在杂色鲍外套膜、鳃、肝胰腺和腹足神经节4种样本的组织分布情况进行检测和分析.病毒阳性信号最早于36 h出现在腹足神经节,48 h在部分外套膜样本中观察到病毒阳性信号,分布局限于外周神经中.在感染实验后期,病毒阳性信号出现在肝胰腺结缔组织中.病毒阳性信号出现的部位常有大量细胞渗出和浸润,渗出的细胞中可见被病毒感染的血淋巴细胞.本研究建立的HaHV-1原位LAMP检测方法,同步实现了高灵敏度和精确定位的功能.该检测方法适用于病毒感染的确诊、不同组织器官的亲嗜性、病毒侵染途径和致病机理等相关研究.
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克氏原螯虾源普通变形杆菌分离、鉴定及联合药敏试验
《淡水渔业 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：本研究对患病克氏原螯虾(Procambarus clarkia)进行病原菌分离、鉴定及联合药敏试验.从患病克氏原螯虾的肝胰腺中分离出一株优势菌(QJ201905007),经形态学观察、生理生化特性分析、16S rRNA基因测序和构建进化树对该菌株进行了鉴定,并测定该菌株对抗菌药物的药敏性及化学抗菌药物和天然化合物的协同抑菌作用.结果显示:该分离菌生理生化特征符合普通变形杆菌(Proteus vulgaris)的特征,分子鉴定结果和进化树分析与普通变形杆菌的亲缘关系较近,由此可判定该病原菌为普通变形杆菌.回归试验发现,分离的菌株对克氏原螯虾具有致病力,半致死剂量为5.04×106 CFU/mL.药敏结果显示,该菌株对亚胺培南、头孢噻肟、恩诺沙星和头孢吡肟敏感,对氟苯尼考、青霉素和丁胺卡那等耐药;联合抑菌试验发现,氟苯尼考与白藜芦醇联用可在体外协同抑制该菌株的生长.以上研究表明,普通变形杆菌是克氏原螯虾的病原菌,在保证小龙虾食用安全的前提下,可使用恩诺沙星治疗,或通过氟苯尼考与白藜芦醇联用提高氟苯尼考的敏感性.
关键词： 克氏原螯虾(Procambarus clarkia) 普通变形杆菌(Proteus vulgaris) 鉴定 药敏试验
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江西柘林水库鱼类群落结构及功能多样性分析
《生态学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了解江西柘林水库鱼类群落结构和多样性的时空变化特征,研究鱼类物种多样性和功能多样性的关系,于2020年9月至2021年4月在该水库调查分析了鱼类物种组成、优势度及群落物种多样性和功能多样性。结果表明,共采集鱼类53种,分属于5目12科36属。其中,鲤形目（38种）种类最多,占调查物种数的71.69%,柘林水库上、中、下游库区分别采集到鱼类36、40和32种,各库区均以鲤形目鱼类为主,分别占采集物种数的72.97%、85.00%和75.00%。优势物种主要是?（Hemiculter leucisculus）、鳙（Aristichthys nobilis）和黄尾鲴（Xenocypris davidi）,重要种主要是草鱼（Ctenopharyngodon idella）、鲢（Hypophthalmichthys molitrix）、鳊（Parabramis pekinensis）、鲫（Carassius auratus）、蒙古红鲌（Erythroculter mongolicus）等。鱼类群落结构季节性差异大于空间格局差异,主要表现为秋季和冬季之间;生物多样性指数Margalef和功能丰富度指数在上游修河水域相对较高,鱼类物种多样性和功能多样性空间格局差异性大于时间尺度下的差异性。物种多样性与功能多样性的回归分析结果显示,功能丰富度与物种多样性指数之间存在显著的正相关关系;功能冗余度与各物种多样性之间呈现负相关关系,说明物种数的增加导致了库区鱼类功能丰富度的增加和功能冗余度的降低,而功能均匀度未发生明显的变化,主要原因为调查区域内拥有不同功能性状的鱼类群体之间在个体数比例上呈现不均匀分布的模式,这一结果预示着拥有较多物种的群落生态位重叠度相对较低,生态系统受干扰后的恢复能力较差。总体而言,保护鱼类生物多样性和维护生态系统的稳定性应该通过调控鱼类种群结构达到提高鱼类群落冗余度以及资源和生境可用性的目的。
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扇贝组织中不同形态氨基脲测定方法研究
《海洋科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为明确环境新型污染物--氨基脲(semicarbazide,SEM)在贝类体内的存在形态,本文建立了一种SEM在扇贝中形态测定的液相色谱-串联质谱(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析方法.扇贝中SEM总量测定方法为:样品用盐酸水解,以2-硝基苯甲醛为衍生剂衍生,乙酸乙酯提取,超滤离心净化,进LC-MS/MS分析.结合态SEM测定方法为:样品分别采用50%甲醇水溶液、75%甲醇水溶液、甲醇和水洗涤后,按照SEM总量测定方法处理,采用甲醇和2 mmol/L乙酸铵作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源正离子(electrosprary ionization,ESI+)选择反应监测模式对SEM进行定性和定量测定.本方法在1~20μg/L范围内线性关系良好,相关系数大于0.999.SEM在1.00、5.00、10.0μg/kg添加水平的回收率在84.2%~118%,相对标准偏差均<15%.本方法扇贝中SEM的定量限为1.0μg/kg,本方法灵敏、准确、操作简便,适用于扇贝中SEM存在形态的测定.
关键词： 氨基脲 液相色谱-串联质谱法 扇贝 存在形态
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不同盐度水平对金钱鱼幼鱼鳃线粒体丰富细胞结构的影响
《海洋渔业 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为研究盐度对金钱鱼（Scatophagus argus）幼鱼渗透调节的影响，将（6.31±0.25） g金钱鱼置于不同盐度（0、5、10、20、30、35）下养殖30 d,观察分析不同盐度下金钱鱼幼鱼鳃线粒体丰富细胞（mitochondria-rich cells, MRCs）形态结构的变化。结果显示：盐度5组次级鳃小片直径（11.750±1.388）μm,盐度10组初级鳃小片直径（92.050±9.408）μm,盐度35组初级鳃小片直径（80.250±4.682）μm,与对照组相比差异显著（P<0.05）。MRCs顶膜开口分为：突起型（Ⅰ型）、凹陷型（Ⅱ型）、深洞型（Ⅲ型）,以及一种Ⅰ型的过渡类型。研究表明，金钱鱼幼鱼在不同盐度条件下MRCs均发生适应性的结构改变，有利于金钱鱼在不同盐度水体中生存，这种适应性结构变化与金钱鱼具有较强的盐度适应性密切相关。
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基于线粒体全基因组结构的鲳属鱼类分子分类研究
《海洋渔业 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为明确鲳属鱼类的线粒体全基因组序列结构、寻找有效的种间鉴别分子标记,并剖析其系统发育信息,从而为鲳属鱼类的分类学、进化遗传学和种质鉴定提供参考依据,测定了鲳属5种鱼类(中国鲳Pampus chinensis、灰鲳P.cinereus、银鲳P.argenteus、珍鲳P.minor、翎鲳P.punctatissimus)的线粒体全基因组序列,并结合NCBI数据库中已有的鲳属鱼类线粒体全基因组序列进行分析.结果显示:1)鲳属线粒体基因组全序列长度在16551 bp到18062 bp之间,其基因组结构与大多数硬骨鱼类一致;比较特别的是,银鲳和镰鲳具有两个tRNAMet结构,珍鲳出现ND1基因重排以及两个重复的D-loop结构.2)银鲳与镰鲳的D-loop区出现重复CSB3结构,灰鲳与翎鲳D-loop区出现重复TAS结构.3)ND2基因条形码及其微型条形码均可将鲳属鱼类区分开,可作为有效的鲳属鉴别分子标记.4)东海区的银鲳与镰鲳应为同一物种,灰鲳可能为翎鲳的同物异名.
关键词： 鲳属鱼类;线粒体全基因组;分子鉴定;DNA条形码;系统发育
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盐碱胁迫对莫桑比克罗非鱼TauT2基因表达的影响
《南方农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究在莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）中新发现的编码牛磺酸转运蛋白的基因TauT2在盐碱胁迫下对鱼体渗透压调控的作用，为深入阐明鱼类中牛磺酸转运蛋白的功能提供更全面可靠的数据。【方法】通过PCR和直接测序的方法对TauT2基因的编码区序列（CDS）进行分析，用生物信息学分析方法预测其编码蛋白的氨基酸序列及其高级结构，并利用荧光定量PCR检测该基因在肝、肠、肌肉等13个组织中的表达特征，以及在盐碱胁迫（盐25 g/L，碱4 g/L）96 h内，不同时间点鳃、肾、肠和肝组织中TauT2基因mRNA的表达水平。【结果】获得的TauT2基因CDS序列全长1881 bp，共编码626个氨基酸，氨基酸序列与斑马拟丽鱼（Maylandia zebra）牛磺酸转运蛋白的一致性最高，为98.72%，与已报道的莫桑比克罗非鱼的tTAUT1蛋白一致性为88.52%，该蛋白具有典型的牛磺酸转运蛋白跨膜结构域。荧光定量PCR结果表明，TauT2基因在肝、肠、肌肉等13个组织均有表达，其中血液中表达量最高，肠中的表达量最低。盐碱胁迫条件下，TauT2基因m RNA表达水平在鳃、肾、肠和肝组织中的表达均呈先升高再下降的变化趋势，鳃和肝达峰值的时间为48 h，肾和肠达峰值的时间分别是24和72 h，达峰值的时间与莫桑比克罗非鱼的tTauT1基因存在明显差异。【结论】莫桑比克罗非鱼在受到盐碱胁迫后，通过提升TauT2基因的表达量来有效调控体内渗透压，为渗透压稳态的维持发挥作用。莫桑比克罗非鱼体内至少有2种不同的牛磺酸转运蛋白，已发现的这2个蛋白氨基酸序列、三级结构及在鱼体不同组织中精细调节体内渗透压的功能存在一定差异。
关键词： TauT2基因 莫桑比克罗非鱼 盐碱胁迫 基因表达
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一种刀鲚生态养殖模式的构建
《海洋科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：刀鲚(Coilia nasus)是长江珍稀名贵的生殖洄游性、肉食性鱼类,自2020年1月1日0时起,长江10年内全面禁止刀鲚生产性捕捞.与此同时,衍生出刀鲚池塘养殖、工厂化养殖和网箱养殖模式,在这些养殖模式中,由于刀鲚长期处于肥水和高密度的养殖环境内,自身处于不安全的状态下,造成自身的免疫机能受到抑制和抗病力下降,导致养殖成活率低或大量死亡现象,造成刀鲚养殖规模一直没有大的进展.本研究通过对刀鲚各个生长发育过程的特征解析,将刀鲚生活史划分为水花开口、乌仔、稚鱼(夏花)、幼鱼和成鱼5个生长阶段,同时将刀鲚养殖所涉及的生态系统划分为浮游植物、原生动物、轮虫(卵)、枝角类、桡足类、底栖动物幼体、鱼(虾)苗、软靡、微囊配合饲料和有机碎屑、微生物8个层次,通过结合非生态系统构建了刀鲚生态养殖系统模式.通过构建该生态养殖模式对刀鲚养殖模式进行更加深入的研究和探讨,从而助力刀鲚产业的快速发展.
关键词： 刀鲚;生态系统;生态养殖;模式
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化学发光酶免疫分析法检测水产品中残留的麻醉剂丁香酚
《分析测试学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：将丁香酚(Eul)与4-溴丁酸叔丁酯进行衍生化反应,合成了半抗原4-(4-烯丙基-2-甲氧基-苯氧基)-丁酸(Eul-4-Tbl).通过偶联载体蛋白并免疫动物后获取丁香酚多克隆抗体,建立了丁香酚的间接竞争化学发光酶免疫分析方法(ic-CLEIA).水产样品经乙腈提取,Oasis PRiME HLB固相萃取小柱净化后用于测定.结果表明,ic-CLEIA的最佳反应条件为:包被原质量浓度为0.125μg/mL,抗体稀释40000倍,抗体反应时间为30 min,药物稀释液为PBS.该方法的半抑制浓度(IC50)为1.28μg/L,检测线性范围为0.25~6.43μg/L,检出限(LOD,IC10)为0.11μg/L.样品中丁香酚的加标回收率为76.6%~108%,相对标准偏差(RSD)为5.9%~12%,测定结果与液相色谱-串联质谱法具有良好的相关性(r=0.9904),可用于水产品中麻醉剂丁香酚残留的快速测定.
关键词： 丁香酚;麻醉剂;化学发光酶免疫分析;多克隆抗体;水产品
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热带中西太平洋金枪鱼延绳钓渔获物组成及其多样性
《中国水产科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：利用金枪鱼漂流延绳钓作业方式,于2018年5月至2019年3月期间在热带中西太平洋海域（2°03′～11°17′S,163°14′～173°35′E）进行渔获取样,分析渔获组成及物种多样性,并使用广义线性混合模型（GLMM）和圆形统计方法分析渔获水深、月相等时空要素对物种多样性、目标种类和兼捕CPUE等影响。结果表明:（1） 3673尾渔获隶属于9目21科30属35种,其中目标种类大眼金枪鱼（Thunnus obesus）和黄鳍金枪鱼（Thunnus albacores）为优势种,蓝枪鱼（Makaira nigricans）、长鳍金枪鱼（Thunnus alalunga）、镰状真鲨（Carcharhinus falciformis）、帆蜥鱼（Alepisaurus ferox）和紫魟（Pteroplatytrygon violacea）为重要种;（2）大眼金枪鱼、黄鳍金枪鱼以及兼捕种类CPUE分别为（1.662±0.89） ind/千钩、（1.39±1.45）ind/千钩、（2.52±1.27）ind/千钩。渔获多样性指数Shannon-Wiener指数（H′）、Margalef指数（D）、Pielou指数（J）分别为（1.78±0.28）、（2.53±0.60）、（0.79±0.09）;（3） GLMM结果显示,月相（余弦）对大眼金枪鱼的CPUE的具有极其显著的影响（P=0.001, CPUE在满月较高,而在新月较低）,而月相（正弦）对黄鳍金枪鱼CPUE具有边际显著影响（P=0.067,CPUE在上弦月较高,而在下弦月较低）,月相兼捕CPUE则没有显著影响,水深对CPUE具有极显著的影响（P<0.001）;（4）月相对多样性指数均不存在显著影响,但水深对渔获Shannon-Weiner指数（H′）和Margalef指数（D）均有显著影响（P<0.001）。研究结果反映出热带中西太平洋海域物种丰富、群落的复杂程度较高、稳定性较好,群落对环境变化、渔业活动等具有较好的耐受性。
关键词： 延绳钓 渔获组成 多样性 CPUE 水深 月相 热带中西太平洋
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