科研产出
不同体细胞类型和基因转染方式对绵羊克隆胚胎体外发育的影响
《畜牧与兽医 》 2012 北大核心
摘要：首先获得绵羊胎儿成纤维细胞、成年耳组织成纤维细胞及前脂肪细胞,用脂质体介导法、BTX电转法及Nucleofector核转法对上述细胞系转染绿色荧光蛋白(gfp)基因,并对转染效率进行比较,最后探讨3种转gfp基因细胞对绵羊转基克隆胚发育的影响。结果:核转法的转基因效率最高,3种细胞的转基因效率分别为86%,87%和90%,显著高于BTX电转法和脂质体法基因转染效率;脂质体转染效率显著低于BTX电转效率(P<0.05)。而对同一种转染方法而言,基因转染效率在3种细胞间差异均不显著(P>0.05)。在以上述3种转基因细胞为核供体的转基因克隆试验中,胚胎融合率、卵裂率均无显著性差异(P>0.05),胎儿成纤维细胞组的囊胚率显著高于前脂肪细胞组(P<0.05),但耳组织成纤维细胞组与胎儿成纤维细胞、前脂肪细胞间差异均不显著(P>0.05)。结果表明核转法基因转染效率最高,胎儿成纤维细胞最适合于胚胎克隆研究。
粮食中磺酰脲类除草剂的UPLC/MS/MS测定方法
《分析试验室 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：建立了多类粮食作物中15种磺酰脲类除草剂的超高效液相色谱-串联质谱联用仪(UPLC/MS/MS)多离子监测(MRM)的多残留检测方法。样品经乙腈提取,乙腈饱和的正己烷液-液分配,石墨化碳氨基小柱净化,采用UPLC-MS/MS(ESI+)测定。方法中各种磺酰脲类除草剂在5～200μg/L浓度范围内线性良好,相关系数在0.9995～0.9999。在5～100μg/kg范围内,平均加标回收率在71.6%～115.3%之间,相对标准偏差不大于15%。各种药物的定量限(S/N≥10)均可达到5μg/kg。该方法可同时满足大豆、大米、玉米等多种粮食中磺酰脲类除草剂的检测需求。
关键词： 磺酰脲类除草剂 粮食 多残留 超高效液相色谱-串联质谱
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冷藏温度、基质和时间对智利小植绥螨存活和生殖的影响
《植物保护 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：智利小植绥螨是叶螨属害螨的一种重要捕食性天敌,为发挥其控害效能,本研究在4℃和8℃两个温度下测试了叶片+叶螨、蛭石+叶螨和蛭石3种冷藏基质以及不同冷藏时间对智利小植绥螨存活和生殖的影响。结果表明:冷藏温度、基质和时间均对智利小植绥螨冷藏存活率有显著影响。冷藏5～15d时,在8℃下每种基质中的存活率均大于或等于4℃下的存活率,而冷藏20～40d时相反。用蛭石基质及蛭石+叶螨基质在4℃条件下冷藏35～40d和在8℃条件下冷藏25～40d的存活率均较叶片+叶螨基质有显著优势。在每个温度及每种基质内,智利小植绥螨冷藏存活率均随冷藏时间的延长而呈下降趋势。冷藏温度和冷藏时间对冷藏后智利小植绥螨一周内产卵量有显著影响。除了10d和15d处理,在4℃条件下智利小植绥螨冷藏后1周产卵量要高于8℃,特别是在冷藏20d后。在4℃条件下,冷藏5d和10d后的智利小植绥螨1周产卵量高于冷藏15d后产卵量;而在8℃条件下,冷藏10d和15d后智利小植绥螨1周产卵量高于其他冷藏时间段产卵量。总之,用蛭石作基质冷藏智利小植绥螨不但效果较好,而且较为经济适用,适宜在4℃条件下进行长期冷藏,有利于延长货架期。
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藿香正气水指纹图谱及模式识别对质量控制的研究
《药物分析杂志 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：目的:研究藿香正气水的质量控制方法。方法:采用高效液相色谱法建立了藿香正气水的指纹图谱,收集不同厂家的17批产品进行测定,并使用聚类分析法和主成分分析法对指纹图谱进行模式识别研究。结果:17个样品基本可分为7类,不同厂家的藿香正气水HPLC指纹图谱存在明显的差异,通过主成分分析可知,橙皮苷、欧前胡素、厚朴酚、和厚朴酚为其中比较重要的指标。结论:此方法可较系统地用于藿香正气水的质量控制。
关键词： 藿香正气水 指纹图谱 高效液相色谱法 模式识别 聚类分析法 主成分分析法 质量控制
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抗虫转CpTI基因植物定性PCR检测技术的建立
《河南农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为建立CpTI基因定性PCR检测方法,通过数据库查询和测序获得CpTI基因序列,设计特异性定性PCR引物,对引物、PCR反应条件和反应体系进行优化,并对检测方法的特异性、灵敏度等进行分析试验。结果表明,CpTI基因特异性定性PCR检测方法选择退火温度为58℃,引物浓度为0.4μmol/L较好,该方法能够特异性检测样品中CpTI基因,检测灵敏度达0.05%(质量比)。该方法符合农业转基因生物产品成分检测标准对特异性、灵敏度、重复性的要求,可为抗虫转CpTI基因植物生物安全管理提供技术支撑。
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基于SNP标记的黄瓜杂交种纯度鉴定方法
《中国蔬菜 》 2012 北大核心
摘要：根据国际葫芦科基因组数据库CuGenDB中序列信息,应用高分辨率熔解曲线技术筛选出用于黄瓜杂交种纯度鉴定的SNP位点CLA6(A/G),该位点在33个市售黄瓜品种中的多态信息量为0.401,处于中度多态;结合焦磷酸测序技术,建立基于CLA6位点的SNP-Pyrosequencing黄瓜杂交种纯度鉴定方法。利用该鉴定方法检测黄瓜杂交种优一90粒种子,结果其种子纯度为96.7%,该结果与CLA0位点及SSR鉴定结果相符,表明该鉴定技术适于黄瓜杂交种纯度鉴定,具有用于DUS测试分析的潜力。
关键词： 黄瓜 种子纯度 高分辨率溶解曲线 SNP标记 焦磷酸测序
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有机无机肥料配合施用对日光温室土壤氨挥发的影响
《中国农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】在大幅减施肥料和合理灌溉的基础上,研究有机无机肥料配合施用对设施菜田土壤氨挥发的影响。【方法】利用芹菜-番茄轮作田间试验,采用通气法监测土壤氨挥发速率特征动态变化。【结果】施基肥后2—3 d出现土壤氨挥发峰值,8—10 d接近对照水平;追肥第1天出现氨挥发峰值,10—11 d接近对照水平。土壤氨挥发损失的主要时期在基肥和前两次追肥阶段,氨挥发量占当季损失量的70%—80%。土壤氨挥发主要发生在温度较高的春茬(番茄茬),春茬(番茄茬)各处理土壤氨挥发总量是冬茬(芹菜茬)的3.0倍。芹菜茬和番茄茬大幅减施肥料的有机无机肥配合施用模式土壤氨挥发损失量较习惯施肥处理的分别降低50.0%和47.9%,且随着有机氮比例的增加土壤氨挥发率逐渐降低。等氮量投入时,冬茬和春茬(2/4)化肥氮+(2/4)秸秆氮处理土壤氨挥发损失量较(2/4)化肥氮+(2/4)猪粪氮处理的分别降低32.4%和30.0%。本试验条件下基于产量、经济和环境效益的适宜有机无机肥料配合施用模式是(3/4)化肥氮+(1/4)猪粪氮模式处理。【结论】有机无机肥料配合施用可显著降低土壤氨挥发损失量,是经济效益显著、可操作性强和环境友好的施肥模式,在设施蔬菜种植中值得推广应用。
利用DNA池技术提高基于InDel标记的种子纯度鉴定效率
《种子 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为提高基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测通量,降低检测成本,本研究模拟10种DNA Pooling进行PCR、Pyrosequencing及等位基因频率分析。通过TTest分析不同Pooling间等位基因频率的差异性,确定3 Pooling为种子纯度检测最适Pooling数;建立3 Pooling-InDel-Pyrosequencing标准曲线,其R2达0.999 1;根据该标准曲线,检测黄瓜杂交品种"园中王"30粒杂交种种子纯度,结果为96.67%。本研究丰富了基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测技术体系。
关键词： DNA池 InDel标记 焦磷酸测序技术 黄瓜 种子纯度鉴定
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核移植中的卵母细胞自动拨动研究
《控制工程 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：通过拨动细胞实现遗传物质的移动,并在对卵母细胞的拔动机理进行深入分析的基础上,根据极体是否可见将卵母细胞的自动拨动过程分为翻动和转动两部分.进一步的,对翻动过程中的卵母细胞进行建模,并通过实验首次提出并实现了四种卵母细胞的自动拨动轨迹.随后,对影响卵母细胞翻动幅度的因素进行了研究,并通过实验证实翻动的幅度可以通过拨动微针的离焦高度进行控制.最后,绵羊的大批量核移植操作应用结果表明,使用设计的自动拨动轨迹的移动遗传物质的成功率可达95%以上.同时,拨动过程中极体出现的位置也和本文提出的翻动模型计算的结果一致,从而验证了本文工作的有效性.
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