科研产出
半番鸭性腺发育关键基因17β-HSD3的克隆、序列特征及表达分析
《农业生物技术学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：17β-羟基类固醇脱氢酶（17β-hydroxysteroid dehydrogenase, 17β-HSD）可将经胆固醇转化而成的雄烯二酮最终氧化为睾酮，对睾丸激素合成和雄性性状发育至关重要。本课题组前期研究发现17β-HSD3可能通过类固醇激素合成途径参与半番鸭（Cairina moschata）胚胎期性腺发育。本研究以半番鸭为研究对象，通过cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends, RACE）获得17β-HSD3基因全长cDNA序列，利用生物信息学对其序列特征和蛋白理化性质进行分析预测，并构建系统进化树；采用qPCR技术分析17β-HSD3基因在半番鸭胚胎期不同组织（脑,心,肝,肺,肌肉,性腺和肾）中的特异性表达以及在半番鸭、父本番鸭和母本北京鸭性腺中的差异表达。结果表明，半番鸭17β-HSD3基因全长cDNA序列全长为1 332 bp，含有1个963 bp的开放阅读框、1个26 bp的5’非编码区和1个343 bp的3’非编码区。编码的蛋白质含有320个氨基酸，该编码蛋白为不稳定性蛋白。同源性和进化树系统分析表明，半番鸭17β-HSD3基因与天鹅（Cygnus olor）亲缘关系最近，同源性高达96.5%。组织特异性表达分析显示，17β-HSD3基因在半番鸭性腺中的表达量极显著高于其他组织（P＜0.01），同时，随着胚胎发育17β-HSD3基因表达量在半番鸭性腺组织中逐渐升高，表明该基因可能参与半番鸭性腺发育；17β-HSD3基因在繁殖性状正常的番鸭和北京鸭性腺中表达量显著高于不育的半番鸭（P＜0.05），表明其表达可能与半番鸭的不育相关。本研究为进一步研究17β-HSD3基因对半番鸭性腺发育和生殖细胞分化的调控机理提供理论依据。
关键词： 半番鸭 RACE克隆 性腺 17β-羟基类固醇脱氢酶3（17β-HSD3）
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气候变化条件下木瓜秀粉蚧在中国的潜在适生区预测
《植物保护学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为明确木瓜秀粉蚧 Paracoccus marginatus Williams et Granara de Willink 1922 在中国的潜在适生区,基于中国820个气象站点的气象数据和未来气候变化数据,结合木瓜秀粉蚧的生物学特性,利用CLIMEX模型对该虫在中国当前气候以及未来气候条件下的潜在适生区进行预测.结果显示,木瓜秀粉蚧在中国的潜在适生区主要在南方,适生区面积占全国陆地总面积的9.07%.高适生区主要包括海南省、广东省南部、广西壮族自治区南部以及福建省和云南省小部分地区.在未来气候条件下,2050年木瓜秀粉蚧的潜在适生区将进一步扩大,适生区面积所占比例将增加至15.46%,且有向北移动的趋势.表明木瓜秀粉蚧对中国南方地区的农业潜在威胁巨大,建议将该虫增补为检疫对象,并加强检疫监管和种群动态监测.
关键词： 木瓜秀粉蚧 潜在适生区 有害生物风险分析 CLIMEX模型 气候变化 检疫
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基于变异PEDV的S-N融合双基因蛋白IgA-ELISA抗体检测方法的建立及应用
《中国兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：猪流行性腹泻病毒（PEDV）是引发猪群腹泻的主要病原之一，给我国生猪养殖业造成了重大的经济损失。为建立IgA-ELISA抗体检测方法，本研究采用变异PEDV真核表达的S-N融合蛋白作为包被抗原，通过系列反应条件优化，建立了PEDV的IgA-ELISA抗体检测方法。该方法的最佳反应条件为包被抗原质量浓度2 mg/L,用5%BSA于37℃封闭2 h;将待检血清1∶50稀释于37℃作用1 h,加1∶20 000稀释酶标二抗于37℃作用30 min, TMB显色10 min;以D450 nm ≥0.326判定为阳性，当D450 nm ≤0.277判定为阴性，介于两者判定为可疑。检测猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、轮状病毒（PoRV）标准阳性血清抗体均为阴性，且重复性变异系数均低于10%。通过对我国福建地区304份样品（血清179份和乳汁125份）进行检测，并与商品试剂盒进行参照对比，总符合率达到93.2%以上，表明该试剂盒检测方法具有较高的特异性、敏感性和重复性，可用于对PEDV的IgA抗体检测。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 S-N蛋白 IgA-ELISA抗体检测方法
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大黄鱼肿大细胞病毒不同毒株的细胞培养及主要衣壳蛋白基因比较
《水产学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为建立大黄鱼肿大细胞病毒的培养方法,明确其分类地位,用肿大细胞病毒检测呈阳性的大黄鱼幼鱼病料(FD201807 和SA201808)肾组织匀浆液感染鳜仔鱼细胞系(man-darin fish fry cell line-1,MFF-1)并连续传代,从病料组织匀浆液和细胞冻融液中提取病毒DNA,克隆病毒主要衣壳蛋白基因(mcp),测序后与NCBI GenBank中的虹彩病毒科肿大细胞病毒属病毒mcp以及 2018-2020 年所检出的 15 株大黄鱼肿大细胞病毒mcp进行比对分析.结果显示,病毒传至第 4 代才可引起MFF-1 细胞病变,细胞病变的主要特征为细胞脱壁、变圆、折光度增强;感染时间越长脱壁细胞越多,同时培养液中的颗粒增加;透射电镜下可见感染细胞的细胞质散在大小为 130~150 nm的六边形病毒粒子和空壳.感染细胞的病变周期随传代代次的增加而缩短,第 15 代次的FD201807 株感染细胞 80%细胞病变的时间为 3d,第 15 代次的SA201808 株感染细胞 80%细胞病变的时间为 7~8 d.mcp序列比对和聚类分析发现,SA201808 株与FD201807 株的mcp序列存在 21 个碱基差异,二者的 mcp序列分别与大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)LYCIV-Zhoushan(GenBank:MW139932.1)和花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)(GenBank:MH577517.1)相近.15 株从大黄鱼病料检出的肿大细胞病毒中,12 株的mcp序列与SA201808 株聚类;3 株与FD201807 聚类.本研究利用MFF-1 细胞系分离培养了大黄鱼肿大细胞病毒,揭示了大黄鱼肿大细胞病毒存在差异,为更好地了解大黄鱼肿大细胞病毒提供了数据参考.
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开窗对设施大棚葡萄植株光合特性和果实品质的影响
《西北农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：以设施栽培条件下的'巨峰'葡萄为试材,研究设施大棚开窗对葡萄植株光合特性、果实品质的影响,以期为葡萄设施栽培模式改进提供理论依据.结果表明:通过自制拉杆在温度高于35 ℃的天气开窗,9:00-15:00开窗效果最佳,显著降低棚内温度6.1 ℃;同时设施大棚通风情况改善明显,棚内风速显著提高.开窗处理的植株叶片叶绿素总含量与CK无显著影响(P>0.05),但开窗处理的PSⅡ实际光合效率Y(Ⅱ)在9:00和13:00均显著高于CK;13:00与CK相比提高12.4%,可能是开窗后棚内温度降低,减轻了 PSⅡ系统胁迫.CK的叶片光化学淬灭系数qP持续增至13:00后下降,开窗处理在9:00显著高于CK,光合活性较好.在果实品质指标上,开窗处理的单粒质量比对照显著提高9.9%、可滴定酸含量显著降低、糖酸比显著提高,开窗后果实风味更佳.开窗处理病害等级为5级的最多,其次是4级,叶片受轻微日灼的数量较少,其中1级病害数量显著低于CK,开窗处理植株抗病性较强.开窗能有效改善设施环境小气候,对果实发育的关键时期具有积极意义,有利于植株叶片光合作用,进而改善果实品质,日灼病害减轻.在生产中可参照此方法开窗降温,可有效解决连栋设施大棚夏季热害问题,对简易连栋大棚栽培具有指导意义.
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不同虫态稻虱缨小蜂低温贮藏后的适合度
《中国生物防治学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为探究稻虱缨小蜂适宜冷藏的虫态以及冷藏温度和冷藏时间，在5℃～12℃范围内对稻虱缨小蜂各虫态进行冷藏。结果表明，稻虱缨小蜂卵冷藏后部分不能正常孵化，不适合在卵期进行冷藏。稻虱缨小蜂在幼虫期和蛹期冷藏，成虫寿命随温度的升高而缩短，随冷藏时间的延长而缩短；对性比和子代数不造成影响；羽化率随着冷藏温度的下降而下降，随着冷藏时间的延长而下降，幼虫期不同虫龄之间以及不同虫龄与蛹龄之间的羽化率无显著差异；11℃冷藏的羽化率受冷藏时间的影响最小，冷藏20d的平均羽化率高于80.00%，与对照相比差异不显著。隐羽化期和成虫期受低温和冷藏时间的影响较大，不适合冷藏。因此，本研究结果表明稻虱缨小蜂冷藏效果最好的虫态为幼虫期和蛹期，11℃为适宜冷藏温度。
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烟-稻轮作不同施肥土壤N2O排放对水分的响应
《农业环境科学学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为研究水-旱轮作条件中土壤氧化亚氮(N2O)排放对不同施肥处理的响应,本文以亚热带地区长期不同施肥定位试验(烟-稻轮作)土壤为研究对象,设置60%持水量(WHC)+不施肥(UCK)、60%WHC+推荐施肥(UNPK)、60%WHC+高氮施肥(UNhPK)、60%WHC+推荐施肥配施秸秆(UNPKS)、淹水+不施肥(FCK)、淹水+推荐施肥(FNPK)、淹水+高氮施肥(FNhPK)、淹水+推荐施肥配施秸秆(FNPKS)共8个处理,开展室内培养试验,测定土壤N2O排放及微生物相关功能基因丰度变化,探讨不同施肥土壤N2O排放与相关功能基因丰度对水分的响应规律.结果表明:与CK处理相比,其他施肥处理均显著降低土壤pH,NPKS显著增加土壤有机质(SOM)和全氮(TN)含量;与NPK处理相比,NhPK和NPKS均显著降低土壤碳氮比(C/N).60%WHC和淹水条件各施肥处理N2O累积排放量分别为0.56~1.44 mg·kg-1和14.89~20.70 mg·kg-1.与60%WHC条件相比,淹水显著促进各施肥处理N2O排放.60%WHC条件下,与UNPK处理相比,UNPKS处理显著降低N2O排放.两种不同水分条件下,N2O累积排放量与铵态氮(NH4+-N)含量均呈负相关,与硝态氮(NO-3-N)含量均呈正相关.相比于UCK处理,UNPK和UNhPK显著提高AOA基因拷贝数,UNPK显著提高AOB基因拷贝数;UNhPK显著降低nirK、nirS和nosZ基因拷贝数,UNPKS显著降低nirS基因拷贝数.相比于FCK处理,FNPK、FNhPK、FNPKS均显著提高AOA和AOB基因拷贝数,均显著降低nirS的基因拷贝数.淹水各施肥处理AOA、AOB基因拷贝数和(nirK+nirS)/nosZ比值分别为60%WHC各施肥处理的1.80~2.49倍、1.19~2.19倍和1.25~1.42倍,与60%WHC相比,淹水促进硝化菌硝化作用和反硝化作用的强度,导致大量N2O排放;UNPKS处理的(nirK+nirS)/nosZ比值比UNPK低21%,相比于UNPK处理,UNPKS处理降低土壤反硝化作用,减少N2O排放.研究表明,淹水条件增加了土壤N2O排放,但减弱了施肥对N2O排放的影响;低水分条件下化学肥料配施秸秆可以显著减少N2O排放.
关键词： N2O排放 培养试验 长期施肥 微生物功能基因 水旱轮作
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鸭圆环病毒和鹅圆环病毒三引物鉴别检测方法的建立
《福建农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立一种可同时检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的PCR方法。【方法】根据已发布的鸭圆环病毒和鹅圆环病毒基因组分子特征设计3条引物，应用3条引物建立了一种在一个反应管中可检测并鉴别鸭圆环病毒和鹅圆环病毒的三引物PCR方法。【结果】该方法可特异性扩增鸭圆环病毒和鹅圆环病毒，并根据扩增片段大小鉴别病毒种类，检测最低限分别为110、80 pg·μL-1。应用该方法对临床疑似病例样品进行检测，其结果与用2种病毒对应的单病毒PCR检测方法一致。【结论】建立的三引物PCR方法特异性强，敏感性高，丰富了水禽圆环病毒病的临床病例的诊断及流行病学监测的技术手段。
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茶树新品系'606'乌龙茶在不同季节的品质分析
《食品工业科技 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为探究不同季节对茶树新品系'606'乌龙茶品质的影响,本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ MS)靶向代谢组学、顶空固相微萃取法结合气相色谱-飞行时间质谱联用(HS-SPME-GC-TOF-MS)技术及电子鼻技术(Electronic nose)对新品系'606'乌龙茶的品质成分进行定性定量测定,通过偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)获取不同季节茶样组间差异.结果表明,氨基酸总量呈现春季>秋季>夏季,春季鲜味类氨基酸显著高于秋季与夏季(P<0.05),苦味类氨基酸在夏茶中相对含量较春、秋茶高.儿茶素总量呈现秋茶>夏茶>春茶的规律.氨基酸与儿茶素的差异是造成春、夏、秋茶不同风味品质特征的重要原因.3个季节新品系'606'乌龙茶共鉴定 86种主要特征挥发性成分,醇类和碳氢化合物挥发性组分含量较高,酮类物质是春茶的特征挥发性成分,α-法呢烯是夏茶的特征挥发性成分,反式-橙花叔醇、吲哚、己酸叶醇酯是秋茶的特征挥发性成分.通过建立PLS-DA模型可将 3个季节的茶样明显区分,鉴定出 23种区分不同季节新品系'606'乌龙茶的差异挥发性化合物.电子鼻传感器S1,S2,S6,S7,S10在不同季节新品系'606'乌龙茶的区分中起重要作用,含氮化合物与碳氢化合物是区分不同季节茶样的重要物质.
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