转基因定量检测结果测量不确定度的自上而下评定方法研究及应用

李俊; 赵新; 陈红; 李飞武; 梁晋刚; 李允静; 王颢潜; 高鸿飞; 张华; 陈子言; 吴刚; 沈平; 徐利群; 武玉花; 《中国农业科学 》 2023 北大核心 CSCD

摘要：[目的]定量检测标准体系是实施转基因定量标识的基础,而不确定度评定是定量检测标准体系的重要组成部分.急需建立适合一般实验室采用的标准化转基因定量检测结果不确定度的自上而下评定方法,以便检测实验室自行评定定量检测结果的测量不确定度.[方法]测量方法精密度不确定度评定有 2 种方法,一种是根据"不确定度函数"的一般概念,利用15 个不同浓度的常规样品,建立测量方法精密度引入的不确定度评定公式;另一种是重复测量有证标准物质,根据检测数据的中间精密度,计算方法精密度引入的不确定度.用有证标准物质或实验室配制样品作阳性定量质控品进行偏倚不确定度评定,实验室配制样品标称值的不确定度由实验室根据制备过程采用简易程序自行评定.将测量方法精密度引入的不确定度和测量过程的偏倚不确定度合成,评定试样定量结果的标准不确定度,然后乘以包含因子 k,获得扩展不确定度.[结果]以转基因玉米DBN9936定量检测方法为例,分别用模拟的DBN9936常规样品和有证基体标准物质(GBW(E)100901)评定测量方法精密度引入的不确定度,分别为 0.76%和 0.33%,与常规样品相比,用有证标准物质评定的测量方法精密度不确定度显著偏小.用有证标准物质(GBW(E)100901)评定的偏倚不确定度为0.26%;用实验室配制粉末样品和基因组DNA样品(标称值均为3.0%)评定的偏倚不确定度分别为0.20%和0.19%.采用简易程序评定实验室配制样品标称值引入的不确定度时,部分不确定度分量被忽略,评定的偏倚不确定度偏小.将测量方法精密度不确定度和偏倚不确定度分别合成,用常规样品评定的扩展不确定度为 1.26%、1.20%和 1.20%;用有证标准物质评定的扩展不确定度为 0.84%、0.78%和 0.76%.[结论]建立了转基因定量检测结果自上而下的不确定度评定方法,检测实验室要优先选择用常规样品评定测量方法精密度引入的不确定度.在评定偏倚不确定度时,检测实验室原则上要优先选择有证标准物质作阳性定量质控品.

关键词： 转基因定量结果 测量不确定度 自上而下 有证标准物质 阳性定量质控品

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花椰菜组培苗温室直接移栽成苗技术

牛国保; 孙德岭; 单晓政; 刘莉莉; 文正华; 江汉民; 张小丽; 姚星伟; 《中国蔬菜 》 2023 北大核心

摘要：以往的花椰菜离体培养成苗技术需经过穴盘或营养钵培养后再移栽，组培苗生长时间长，移栽成活率常不足60%，而采用组培苗温室直接移栽成苗技术，可以大幅缩短花椰菜组培苗继代培养时间，将移栽成活率提高至90%以上，且操作简单，成本低。

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臭氧处理对冬枣贮藏品质的影响

彭旭阳; 董成虎; 赵晓梅; 纪海鹏; 苗云刚; 张婷; 胡云峰; 缴秋祥; 《食品研究与开发 》 2023 北大核心

摘要：为探究臭氧处理对冬枣贮藏品质变化的影响，以白熟期的山东沾化冬枣为材料，探讨（0.00±0.50）℃贮藏条件下，不同臭氧浓度（0、2.14、10.72、21.44 mg/m3）对冬枣贮藏品质的影响。结果显示：臭氧处理能减缓冬枣果实硬度的下降，维持较高的可溶性固形物含量，降低超氧阴离子产生速率和过氧化氢含量以及丙二醛的含量，促进抗坏血酸过氧化物酶（ascorbate peroxidase,APX）和过氧化物酶（peroxidase,POD）的活性，通过对比不同处理组的冬枣品质变化趋势，发现T1处理组保鲜效果较好，以上结果表明适宜浓度臭氧处理可延缓贮藏期冬枣的成熟衰老，维持果实具有较高的品质和营养价值。

关键词： 臭氧处理 沾化冬枣 贮藏 保鲜 品质

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纳米颗粒硒对湖羊精液冷冻保存的影响

李梦奇; 房晓欢; 于洋; 李晗星; 张效生; 张金龙; 陶晨雨; 夏威; 李俊杰; 《中国兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD

摘要：将新采集且活力达标的湖羊精液添加到含不同质量浓度(0.00,0.25,0.50,1.00,2.00 mg/L,Ⅰ~Ⅴ组)纳米颗粒硒(nanoparticulate selenium,SeNPs)的冷冻基础稀释液中进行稀释,然后将稀释的精液分装入0.25 mL冻精细管,并在液氮中储存.7 d后解冻,对每个处理的精液进行精子质量参数评估,包括精子活力、运动参数、畸形率、顶体完整率、质膜完整性,并测定各组精液的总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶活性(CAT)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量以及相关抗氧化基因(SOD1、GCLC、GCLM和PRDX1)的表达.结果显示,与Ⅰ组相比,Ⅲ,Ⅳ组对解冻后精子的运动能力、顶体完整率和膜完整性均有积极影响(P<0.05),尤其是Ⅳ组精子冻后活力达48.68%,顶体完整率为80.51%,头部质膜完整率为52.54%,尾部质膜完整率为50.99%,均处于最高水平;SeNPs处理后的冷冻精液T-AOC 和 CAT 活性显著增加(P<0.05),其中 Ⅳ 组 T-AOC 最高为(10.94±0.25)U/mL、CAT 活性为(11.01±0.92)U/mLoSeNPs显著降低了解冻后精子内MDA和ROS水平且以1.0 mg/L质量浓度处理最佳(P<0.05),MDA含量可降至(4.81 士 0.36)mmol/L,ROS水平为1 880.98±44.86.抗氧化基因检测显示,1.00 mg/L SeNPs处理组SOD1 极显著高于 0.00 mg/L SeNPs 处理组(P<0.01),GCLM、GCLC 和 PRDX1 显著高于 0.00 mg/L SeNPs 处理组(P<0.05).结果表明,在湖羊冷冻稀释液内SeNPs质量浓度为1.00 mg/L时,可以使精子结构和功能整体得到改善,而且对冻融精子抗氧化能力也有积极作用.

关键词： 纳米颗粒硒 湖羊 精液冷冻 抗氧化

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酵母处理对玫瑰香葡萄低温贮藏保鲜效果的影响

王步江; 张静; 李宁; 张娜; 《食品研究与开发 》 2023 北大核心

摘要：为探究新型生物保鲜技术,使玫瑰香葡萄在贮藏过程中保持良好品质并有效延长其货架期,以玫瑰香葡萄为试材,采用不同浓度(1×106 cfu/mL~1×109 cfu/mL)的酵母发酵液处理葡萄,在4℃条件下贮藏32 d,定期对葡萄的失重率、腐烂率和果粒病情指数、硬度、可溶性固形物含量、可滴定酸度、抗坏血酸含量和细胞膜相对透性进行测定.试验结果表明,在整个贮藏过程中,随贮藏时间的延长,酵母处理能抑制葡萄果实失重率上升,可有效减缓葡萄的腐烂率和果粒病情指数的升高,减缓果实硬度和果实可溶性固形物含量下降,维持可滴定酸度和抗坏血酸含量.在一定范围,酵母发酵液处理可有效保护葡萄细胞膜系统.综合分析,1×109 cfu/mL酵母发酵液处理玫瑰香葡萄效果最好,可使其在低温贮藏期间维持较好的品质.

关键词： 酵母 玫瑰香葡萄 低温贮藏 保鲜 品质

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‘北斗75’青萝卜杂交种纯度SSR分子标记鉴定

范伟强; 张胜雪; 郑思宇; 黄志银; 李梅; 张红; 刘晓晖; 张斌; 王超楠; 《分子植物育种 》 2023 北大核心

摘要：品种纯度是衡量种子质量的关键指标之一。为高效、准确鉴定‘北斗75’青萝卜杂交种纯度，本研究筛选确定了一个条带清晰、多态性高的引物P26，在‘北斗75’青萝卜亲本及F1代间有共显性差异，并进一步利用引物P26对‘北斗75’青萝卜杂交种纯度进行鉴定。结果表明，与形态学鉴定进行比较，两种鉴定方法结果偏差≤2.00%，其方差分析显示两种方法差异不显著；纯度鉴定结果显示，所有样品种子纯度结果均>98%，说明该引物对于‘北斗75’青萝卜杂交种的纯度鉴定方法稳定可靠；利用该引物对13个青萝卜商品种进行检测，结果在其他品种中扩增出不同的条带，说明引物P26具有很高的特异性，可以特异性区分‘北斗75’青萝卜商品种，具有一定的研究价值。

关键词： ‘北斗75’青萝卜 纯度鉴定 形态鉴定 SSR分子标记

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基于气调小包装的生菜采后保鲜技术研究进展

王泽彬; 张玲; 李春媛; 高元惠; 于晋泽; 张娜; 集贤; 朱志强; 《食品研究与开发 》 2023 北大核心

摘要：生菜营养价值极高,采后仍进行呼吸和生理代谢,有机物不断消耗,机械损伤、有害微生物侵染等因素影响生菜贮藏期(货架期)的品质和商品价值.该文综述生菜生物学特性,国内外生菜采后物流保鲜的气调保鲜小包装和保鲜膜结合保鲜剂的应用现状以及气调小包装技术在生菜物流保鲜方面的研究进展,以期为生菜冷链物流保鲜技术的推广应用和生产实践提供参考.

关键词： 生菜 采后保鲜 生物特性 保鲜膜 保鲜剂 冷链保鲜

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内生真菌印度梨形孢诱导小麦抗根腐病作用研究

郝瑞颖; 李亮; 杨秀荣; 马皓轩; 史硕; 冯宇; 《微生物学报 》 2023 北大核心 CSCD

摘要：【目的】明确印度梨形孢(Piriformospora indica)诱导小麦对根腐病产生抗性的作用机制。【方法】用印度梨形孢悬液浸种，以无菌培养液为对照，用病原菌禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)侵染小麦，对其相关生理生化指标及转录组变化进行分析。【结果】禾谷镰孢菌能诱导小麦产生过氧化氢，降低细胞内水含量，破坏细胞膜的稳定性；根部定殖印度梨形孢的小麦细胞内抗氧化酶活性增强，活性氧自由基含量降低，胞内水含量提高，细胞膜稳定性增强；印度梨形孢定殖能改变由于病原菌引起的mRNA转录组变化，抗性相关基因的表达增强。综合表明印度梨形孢定殖能有效地提高小麦对禾谷镰孢菌的抗性。【结论】研究结果为深入理解植物与微生物互作、开发新型高效环保抗根腐病生物制剂提供理论和实验依据。

关键词： 小麦 根腐病 印度梨形孢 诱导抗性

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共表达MEL和Ec-cLYZ重组表达质粒的构建及其重组蛋白的抑菌效果评价

陈婷; 何敬文; 赵微; 扈立伟; 任君; 刘青; 顾天越; 包利霞; 金天明; 《黑龙江畜牧兽医 》 2023 北大核心

摘要：为了表达一种高效低毒的广谱抑菌蛋白，试验通过T2A连接肽连接蜂毒肽（MEL）与斜带石斑鱼c型溶菌酶（Ec-cLYZ）基因，并克隆至pPICZαA质粒上构建重组表达质粒；将鉴定正确的重组表达质粒用限制性内切酶SacⅠ线性化后电转化至毕赤酵母表达菌株GS115感受态细胞中，构建毕赤酵母表达菌株；利用0.5%甲醇诱导表达，收集上清液进行冻干浓缩并纯化，采用Western-blot法检测重组蛋白的表达情况，BCA蛋白浓度测定试剂盒测定重组蛋白浓度，试管二倍稀释法分别检测不同浓度重组蛋白对兔红细胞的溶血活性，牛津杯法评价重组蛋白的抑菌效果。结果表明：成功构建出重组表达质粒pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、pPICZαA-Ec-cLYZ和pPICZαA-MEL及毕赤酵母表达菌株GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL、GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ和GS115/pPICZαA-MEL;经甲醇诱导，GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ-MEL表达出分子质量为16.5,3.4 ku的重组蛋白，GS115/pPICZαA-Ec-cLYZ表达出分子质量为16.5 ku的重组蛋白，GS115/pPICZαA-MEL表达出分子质量为3.4 ku的重组蛋白；上清液中重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL的浓度分别为35.49,28.73,27.31 mg/L;重组蛋白Ec-cLYZ-MEL、Ec-cLYZ、MEL在浓度为150 mg/L时对兔红细胞的溶血率分别为2.3%、2.9%、79.0%;停乳链球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL高度敏感，表皮葡萄球菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL中度敏感，金黄色葡萄球菌和大肠杆菌对重组蛋白Ec-cLYZ-MEL低度敏感，且重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对测试菌株的抑菌效果优于重组蛋白Ec-cLYZ和MEL。说明重组蛋白Ec-cLYZ-MEL对红细胞无溶血活性且具有良好的抑菌活性。

关键词： 蜂毒肽 c型溶菌酶 抑菌 毕赤酵母 共表达

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早春大棚西瓜简约化一种多收栽培技术

高素燕; 商纪鹏; 焦荻; 王钦; 何伟; 田立鹏; 郝建全; 焦定量; 《中国蔬菜 》 2023 北大核心

摘要：天津市引进“浙江台州大棚西瓜高效种植模式”，并结合当地气候和土壤条件进行了优化完善，形成了适宜天津地区推广的早春大棚西瓜简约化一种多收栽培技术，投入少、管理简单，较常规大棚栽培早上市5～7 d（天），可采收2～3茬，每667 m2年产值1万～2万元。近年来，“浙江台州大棚西瓜高效种植模式”因种植周期短、效益高、见效快在全国快速发展。

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