科研产出
江苏地区荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数估计
《畜牧兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：旨在估计荷斯坦成母牛长寿性状遗传参数及评估育种值，为提高生产性能及实施平衡育种提供参考。本研究共收集江苏地区9个规模化牧场2017—2023年间19 756头荷斯坦成母牛的离群记录，分析牛只的长寿性和淘汰情况。利用R软件的GLM程序对影响奶牛长寿性状的固定效应（包括牧场、出生年季、头胎产犊月龄）进行显著性检验；采用BLUPF90软件进行遗传参数估计以及育种值评估，并绘制遗传趋势图。结果表明：江苏地区规模化牧场成母牛平均在群寿命为1 640.87 d,生产寿命为917.15 d,平均利用胎次为2.60胎；长寿性状遗传力估计值变化范围为0.07～0.15,属低遗传力性状；7个长寿性状（在群天数、生产寿命、利用胎次和L1-L4）间均具有中等到较高的遗传和表型相关（0.27～0.99）,其中在群寿命与生产寿命的相关性趋近于1;通过计算长寿性状的育种值，绘制遗传趋势图，发现近年来长寿性状遗传进展缓慢且整体呈下降趋势。本研究对江苏地区规模化牧场成母牛长寿性状进行了系统的遗传分析，可为制定南方地区奶牛长寿性状育种规划提供参考。
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噬菌体裂解酶基因Lys BT1在普通小球藻中的表达
《江苏农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：噬菌体裂解酶因高效、安全的杀菌特性成为潜在的抗菌药物，并受到广泛关注。本试验在前期通过基因表达制备高效噬菌体裂解酶Lys BT1的基础上，深度解析Lys BT1与细菌上裂解酶受体相互作用的结构特点，成功构建出质粒pCAMBIA 1301-BT1。将该质粒通过电转化的方式导入普通小球藻中，电转条件为：电场强度1.5 kV、脉冲距离2 mm、脉冲时间0.2 ms,瞬时表达后成功进行了活性测定，从而验证了普通小球藻作为裂解酶表达载体的可行性，为噬菌体裂解酶的表达系统研发提供了一条可行路径。
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猪流行性腹泻病毒S蛋白外分泌信号肽筛选及稳定表达细胞系的构建
《中国兽医科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为了优化在真核细胞中猪流行性腹泻病毒（PEDV）S蛋白的分泌表达，且构建稳定表达的细胞系，本研究设计合成了9个信号肽引物，通过同源重组的方式得到表达PEDV变异株AH2012/12株S全长蛋白的9个重组表达质粒，瞬时转染HEK 293T细胞后，通过Western-blot验证蛋白外分泌表达水平，结果显示，筛选出的含跨膜蛋白酶丝氨酸信号肽的S蛋白具有较好的外分泌表达特性；利用G418筛选，获得稳定表达PEDV S蛋白的单克隆细胞，通过传代验证不同代次的蛋白表达水平，成功构建了可稳定外分泌表达PEDV S的CHO细胞系。结果显示，可在100 m L CHO-PEDV/S细胞培养上清中获得约5 mg的PEDV S蛋白，提高了PEDV S蛋白的表达和分泌，为进一步研制PEDV亚单位疫苗奠定了基础。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 S蛋白 信号肽 稳定表达 亚单位疫苗
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真空预冷对采后娃娃菜流通及货架品质的影响
《食品工业科技 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为优选娃娃菜真空预冷的处理条件,维持采后娃娃菜的新鲜品质,在分析不同真空预冷终温(0、2和4℃)和不同真空预冷终压(400、600、800和1000 Pa)对采后娃娃菜预冷效果的基础上,进行了二因素三水平的中心复合响应面试验.结果显示,与不经预冷处理的对照和终温0℃的预冷组相比,在终压600 Pa条件下,2~4℃的预冷终温处理可更好地维持采后娃娃菜的外观品质,抑制其呼吸速率和丙二醛(MDA)含量的升高.在终温2 ℃条件下,与不经预冷处理的对照和终压1000 Pa的预冷组相比,400~800 Pa的预冷终压处理可更好地维持采后娃娃菜的外观品质,抑制其呼吸速率及MDA含量的升高.进一步的中心复合响应面试验结果显示,采后娃娃菜的真空预冷最优条件为终温4.0 ℃、终压600 Pa,该真空预冷条件不仅可维持采后娃娃菜的较好品质,而且可使活性物质可溶性蛋白、总酚和抗坏血酸的含量分别提高18.78%、18.47%和33.23%.因此,适宜的真空预冷处理是一种极具潜力的商品化处理技术,能有效维持采后娃娃菜在流通及货架期间的良好品质.
关键词： 真空预冷 娃娃菜 终温 终压 总酚 可溶性蛋白 抗坏血酸 货架期
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基于全长转录组的蚕豆WRKY基因家族分析及耐盐胁迫相关候选基因挖掘
《江苏农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：WRKY基因是植物特有的转录因子基因,能够调控植物的生长发育和胁迫响应.为了鉴定蚕豆WRKY基因家族成员,揭示其进化关系并挖掘与盐胁迫相关的候选WRKY基因,本研究在完成蚕豆全长转录组测序(9 个样品)和二代转录组测序(27 个样品)的基础上,利用生物信息学方法对WRKY转录因子基因进行鉴定与分析,并通过拟南芥同源基因比对挖掘盐胁迫相关的候选VfWRKY基因.结果表明,蚕豆全长转录组测序共获得 53.84 Gb数据量,通过比对和校正最终获得58 885条转录本序列信息;基于蚕豆全长转录组共鉴定出 113 个WRKY家族成员,氨基酸数目为153~737 aa,等电点为4.84~9.87,113 个WRKY家族蛋白质全部定位于细胞核中;根据拟南芥WRKY家族系统发育特征,VfWRKY基因家族可分为 3 组,分别为group 1(38 个VfWRKY)、group 2(61 个VfWRKY)、group 3(14 个VfWRKY);Motif 1 和Motif 3 是VfWRKY基因家族的特征基序,并对应WRKY保守结构域,在进化过程中较为保守;VfWRKY基因家族主要富集在植物MAPK信号通路、植物与病原菌相互作用和剪接体 3 个通路中;通过同源比对,在蚕豆中发现 14 个盐胁迫相关候选WRKY基因,且主要在根中高表达.该研究结果为蚕豆的遗传学研究提供了丰富的参考数据,也为创制耐盐蚕豆新品种提供了基因信息.
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聚合Wx-mp、fgr和Pi-ta、Pi-b基因选育优质粳稻新品种
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：以同时含有低直链淀粉含量基因Wx-mp、香味fgr基因、稻瘟病抗性基因Pi-b的优良食味粳稻中间品系‘宁7020’为母本，携带稻瘟病抗性基因Pi-ta的江苏抗病、高产粳稻品种‘扬粳9538’为父本，配置杂交组合进行聚合育种。利用3套自主研发的PCR检测体系稻瘟病Pi-ta和Pi-b的多重PCR体系、Wx-mp基因的四引物扩增受阻突变体系PCR检测技术、香味fgr基因的InDel标记检测技术，分别在不同的世代进行目标基因跟踪，结合抗性、香味和籽粒胚乳外观表型鉴定，成功地将上述4个基因聚合于一体，选育出优质、高产、多抗、早熟的水稻新品系‘南粳58’。本研究为选育多抗、优质水稻新品种提供了一种简单、快捷的选择技术，同时也为水稻抗病、优质育种提供新的种质资源。
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超声预处理蓝莓真空冷冻干燥工艺优化及对品质的影响
《南京农业大学学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]本文旨在更好提高蓝莓真空冷冻干燥速率与产品品质。[方法]利用超声处理作为预处理方式，研究超声温度（45、55、65和75℃）、频率（45、80和100 kHz）、功率（600、700、800、900和1 000 W）和时间（25、30、35和40 min）对蓝莓真空冷冻干燥特性、质构、色泽、营养物质保留率及抗氧化活性的影响，并以干燥速率、花青素含量、色泽和脆性为指标进行四因素三水平响应面优化试验，筛选出最佳超声预处理工艺及参数。[结果]超声温度对蓝莓花青素含量的影响极显著（P＜0.001）;超声频率对蓝莓干燥速率、花青素含量和脆性的影响显著（P＜0.05）;超声功率对蓝莓脆性的影响显著（P＜0.05）;超声条件对蓝莓ΔE值的影响均不显著（P＞0.05）。最终获得蓝莓超声预处理的优化工艺条件：超声温度55℃,频率80 kHz,功率700 W,时间30 min,此条件下蓝莓的干燥速率为1.69 g·g-1·h-1,花青素含量0.55 mg·g-1,脆性2 770.00 g,ΔE值6.16。[结论]超声预处理可改善蓝莓真空冷冻干燥品质，该结果为蓝莓真空冷冻干燥研究及产品开发提供基础。
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爪哇虫草菌JS001浸种处理对水稻生长和防御褐飞虱的影响
《昆虫学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确新登记的真菌杀虫剂爪哇虫草菌Cordyceps javanica JS001在调控水稻生长和防御褐飞虱Nilaparvata lugens中的作用。【方法】室内分别用1×10~4, 1×10~6和1×10~8孢子/mL爪哇虫草菌JS001孢子悬浮液浸泡水稻种子48 h,以0.01%Triton X-100溶液浸种为对照，待培养8 d后，对水稻苗进行生长测定，并测定褐飞虱成虫对其的行为选择反应；通过气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）分析1×10~8孢子/mL爪哇虫草菌JS001孢子悬浮液浸种对水稻苗次生代谢化合物含量的影响。采用1×10~7孢子/mL爪哇虫草菌JS001孢子悬浮液和清水（对照）分别浸泡水稻种子48 h,于种子直播50 d后，调查稻田中稻飞虱和蜘蛛个体数量。【结果】室内测定结果表明，与对照相比，1×10~6和1×10~8孢子/mL爪哇虫草菌JS001孢子悬浮液浸种处理不仅显著促进水稻种子发芽、水稻苗根和茎叶的生长，而且降低褐飞虱成虫对水稻苗的选择性。化合物分析结果表明，与对照相比，1×10~8孢子/mL爪哇虫草菌JS001孢子悬浮液浸种处理的水稻苗中防御性化合物过氧化氢、油酸、辛烷等含量显著增加，能吸引褐飞虱的化合物2-壬酮含量显著降低。田间试验结果表明，与对照相比，1×10~7孢子/mL爪哇虫草菌JS001孢子悬浮液浸种显著降低稻田中稻飞虱数量，但对捕食性天敌蜘蛛个体数量无影响。【结论】爪哇虫草菌JS001浸种处理不但能促进水稻苗的生长，而且能提高水稻对褐飞虱的防御能力。田间试验进一步明确了爪哇虫草菌JS001在增强水稻防御稻飞虱危害中的作用。这些结果可为爪哇虫草菌的应用及稻飞虱生物防治策略的制定提供新途径。
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甘薯U6启动子克隆及其转录活性分析
《江苏农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：在CRISPR/Cas9基因编辑系统中，U6启动子可以通过驱动sgRNA的表达来编辑目的基因，因而其转录活性会影响基因编辑效率。尽管人们已经在拟南芥、玉米、大豆、棉花等植物中开展了U6启动子的克隆与应用研究，然而目前在甘薯中U6启动子的相关研究还未见报道。本研究利用拟南芥的AtU6 SnRNA的保守序列在三浅裂野牵牛(Ipomoea trifida)基因组数据库中搜索候选U6 RNA,然后在其上游搜索到2个不同的候选U6启动子，长度分别为526 bp(IbU6p-1)和532 bp(IbU6p-2);序列比对分析结果显示，甘薯的U6启动子具有上游序列元件(USE)以及TATA-box,其序列也与拟南芥高度相似。然后，利用获得的U6启动子核酸序列构建了能够驱动萤火虫荧光素酶基因(LUC)表达的重组框U6::LUC。最后，将含有上述重组载体的根癌农杆菌瞬时转化到本氏烟草叶片和甘薯愈伤组织中，并通过荧光成像技术分析荧光素酶活性。结果发现，在烟草及甘薯愈伤组织中2个甘薯U6启动子均能驱动LUC基因表达，具有转录活性。同时，IbU6p-2的转录活性无论是在烟草叶片中还是在甘薯愈伤组织中都显著高于拟南芥U6启动子。本研究结果为进一步发展甘薯基因编辑技术提供了参考。
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载脂蛋白在褐飞虱取食、存活和繁殖中的作用
《昆虫学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】载脂蛋白(apolipoprotein, apoLp)在动物实现其各项生理功能中发挥着重要作用，但如何影响稻飞虱生长发育等尚未见报道。本研究旨在明确载脂蛋白apoLp在褐飞虱Nilaparvata lugens取食、存活和繁殖中的作用。【方法】基于褐飞虱基因组获得载脂蛋白编码基因NlapoLp全长开放阅读框(ORF)序列，并分析其蛋白序列；使用邻接法将NlapoLp与其他昆虫物种的同源序列进行聚类分析；利用RT-qPCR检测NlapoLp在褐飞虱不同发育阶段(卵、1-5龄若虫以及刚羽化的短翅型雌雄成虫)、短翅型雌成虫不同组织(去除唾液腺的头部、唾液腺、中肠、脂肪体和卵巢)中的表达量；通过对褐飞虱3龄若虫显微注射dsNlapoLp进行RNAi,利用RT-qPCR检测RNAi后NlapoLp的表达量，之后调查不同发育阶段虫体RNAi后褐飞虱在寄主水稻上的单雌蜜露分泌量、若虫存活率和单雌产卵量。【结果】序列特征分析发现NlapoLp有1个信号肽及5个保守结构域，但无跨膜结构域。系统进化树显示褐飞虱NlapoLp与灰飞虱Laodelphax striatellus LsapoLp和白背飞虱Sogatella furcifera SfapoLp的进化关系最近，然后与其他半翅目昆虫紫苑叶蝉Macrosteles quadrilineatus、烟粉虱Bemisia tabaci和茶翅蝽Halyomorpha halys的apoLp聚为一支，表现出较近的亲缘关系。RT-qPCR结果显示，NlapoLp在褐飞虱各个发育阶段均表达，在短翅型雌成虫中的表达量较高；在短翅型雌成虫中肠、脂肪体和唾液腺中高表达，在其他组织中低表达。对褐飞虱显微注射dsNlapoLp可以显著降低NlapoLp的表达，经RNAi后褐飞虱在寄主水稻上的单雌蜜露分泌量、若虫存活率和单雌产卵量均比对照组(注射dsGFP)的显著降低。【结论】载脂蛋白基因NlapoLp在褐飞虱各发育阶段和短翅型雌成虫各组织均表达，经RNAi沉默NlapoLp可显著影响褐飞虱的正常的取食、生长发育和繁殖。研究结果为深入探究载脂蛋白在昆虫致害水稻中的作用机制奠定了基础，并提供了害虫高效防控的关键靶标。
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