科研产出
苏云金芽孢杆菌Cry毒素共性结构短肽串联表达及功能分析
《河南农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）Cry毒素是一类具有抗虫功能的微生物蛋白。将前期基于Bt Cry毒素家族氨基酸序列及结构信息设计获得的呈现Cry毒素共性结构的3个短肽，拼接成为具有免疫原性的长链多肽（Bt Cry-GXJG-11），以期研发Bt Cry毒素杀虫功能的模拟物及制备Bt Cry毒素检测用广谱抗体的免疫原。分子建模预测结果显示，Bt Cry-GXJG-11与Bt Cry毒素靶标害虫棉铃虫（Helicoverpa armigera）钙黏蛋白受体（HaCad-TBR）存在互作效应，并初步明确了两者互作的关键氨基酸位点为244TYR。经原核表达，获得了质量浓度为0.5 mg/mL的Bt Cry-GXJG-11纯蛋白，测得其与HaCad-TBR的亲和力常数（KD）为2.151×10-7mol/L。室内生测试验表明，Bt Cry-GXJG-11对棉铃虫具有一定杀虫活性，校正死亡率为27.5%；且以其免疫的小鼠血清能同时识别6种Bt Cry毒素（Cry1Ab、Cry1Ac、Cry1Ah、Cry1B、Cry1C、Cry1F）。
关键词： Bt Cry毒素 共性结构 分子互作 杀虫活性 广谱抗体 棉铃虫
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木耳双翅目虫害调查及杀虫剂筛选
《食用菌学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为调查我国木耳(Auricularia spp.)主产区栽培中双翅目虫害种类,筛选适宜的高效低毒杀虫剂,对8个不同地区黑木耳(A.auricula)、毛木耳(A.cornea)和玉木耳(A.cornea,white variety)的虫样进行采集,采用形态特征与线粒体CO I基因片段序列比对相结合的方法进行分类鉴定.从采集的14种双翅目虫样中,鉴定出5科9种危害木耳的昆虫,其中眼蕈蚊科种类最多,为害范围最广;异迟眼蕈蚊是木耳栽培中需要重点关注和防治的种群.采用药液浸渍法测定8种杀虫剂对异迟眼蕈蚊的室内毒力,25%噻虫嗪可湿性粉剂对异迟眼蕈蚊的杀虫效果最好,LC50为15.122 mg·L-1;其次为10%吡虫啉可湿性粉剂和10%烯啶虫胺水剂,其LC50分别为28.488、29.131 mg·L-1.采用喷雾法测定8种杀虫剂对毛木耳产量的影响,从前三潮总产量比较发现,2.5%高效氯氟氰菊酯微乳剂[1/500:(2096.00±29.26)g,1/1000:(1878.00±4.36)g]产量最高且显著高于所有处理,其次为25%噻虫嗪可湿性粉剂和0.5%苦参碱水剂.建议在毛木耳栽培中高效氯氟氰菊酯、噻虫嗪和苦参碱三类杀虫剂轮换使用.
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MSTN基因编辑湖羊胫腓肌的转录组分析
《南京农业大学学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]本文旨在探索肌肉抑制素基因(myostatin,MSTN)调控肌肉生长发育的分子机制.[方法]以3月龄MSTN基因编辑湖羊(试验组)和野生型湖羊(对照组)胫腓肌为对象,采用PCR和Western blot方法验证MSTN编辑湖羊编辑形式,在此基础上开展转录组测序和分析,并用real-time PCR方法对差异表达基因进行结果验证.[结果]对照组和试验组共有149个差异表达基因,其中65个基因上调,84个基因下调,GO注释和KEGG富集分析表明,差异表达基因显著富集在氧化磷酸化、果糖和甘露糖代谢、生热作用、FOXO和AMPK信号通路,表明MSTN基因可能通过以上信号通路参与湖羊生长发育调控.[结论]MSTN基因编辑湖羊可能通过FOXO和AMPK、氧化磷酸化、果糖和甘露糖代谢、生热作用等与动物代谢相关的信号通路调控其生长发育.
关键词： 湖羊 MSTN基因 CRISPR/Cas9 转录组测序
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包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的制备及佐剂活性
《江苏农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：重组CTA1-DD蛋白具有与完整CT分子相当的全身性和黏膜佐剂功能,但在复杂的生理环境中易被酶或酸降解.本研究以同样具有佐剂活性的O-羧甲基壳聚糖(OCS)和硫酸葡聚糖(DS)为载体,通过离子交联形成纳米颗粒,将CTA1-DD蛋白嵌入其中,使其得到稳定保护.包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒的粒径为50~150 nm,Zeta电位约-50 mV,质量浓度1.0 mg/ml的CTA1-DD蛋白投入制备的包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒载药率 25.33%,包封率 86.56%.体外模拟释放试验结果显示CTA1-DD蛋白可在 7d内缓慢释放.将CTA1-DD蛋白与PRV灭活抗原混合后,接种至小鼠鼻腔,结果表明,包裹有CTA1-DD蛋白的OCS-DS纳米颗粒能够同时诱导更高的血清IgG抗体和黏膜IgA抗体表达,证明了其作为黏膜佐剂的高效性.
关键词： CTA1-DD蛋白 O-羧甲基壳聚糖 硫酸葡聚糖 纳米颗粒 佐剂活性
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钢渣混合基质对大花绣球扦插生根的影响
《应用生态学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为研究钢渣混合基质对大花绣球扦插生根的影响，创制可部分替代常规扦插基质、实现固体废弃物高效利用的新型基质，本试验以常规扦插基质（泥炭+珍珠岩）为对照（CK）,研究在其中添加体积分数为10%（T1）、20%（T2）、30%（T3）和40%（T4）钢渣的条件下，混合基质的理化性质及其对大花绣球‘红粉佳人’生根的影响。结果表明：钢渣混合基质的pH值、电导率和容重均显著高于CK,T2处理通气孔隙度高于其他处理，但总孔隙度和持水孔隙度无显著差异；扦插苗地上部分生长表现为：各处理鲜重和干重均大于CK,茎粗除T4处理外均大于CK,株高除T4处理外与CK相比无显著差异，叶片叶绿素含量均显著低于CK;扦插苗根系生长表现为：根长为T2>CK>T1>T3>T4,根表面积和根体积均为T2>T1>CK>T4>T3,根尖数为T2>CK>T1>T4>T3,各处理平均根直径和根系活力均显著高于CK,且以T2处理最高；扦插苗叶片可溶性糖含量为T2>T4>T3>CK>T1。根系生长发育指标权重排序为：根系活力>平均根直径>根体积>根表面积>根尖数>根长；冗余分析发现，基质pH值、电导率、通气孔隙度和持水孔隙度是影响插穗根系生长发育的关键因子。综上，添加体积分数为10%～40%钢渣的混合基质均能够用于大花绣球扦插育苗，其中以20%（T2）的效果最好，可显著改善插穗成活率、生长状况和根系发育。本研究证实了钢渣作为花卉新型育苗基质部分替代泥炭、珍珠岩等常规不可再生基质的可行性，既可降低农业生产成本，又能实现工业固废的高值化利用。
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辣椒CaSYT1的鉴定及其在疫霉侵染过程中的功能初探
《园艺学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为明确辣椒(Capsicum annuum)编码突触囊泡结合蛋白(Synaptotagmin,SYT)基因CaSYT1在辣椒应答疫霉侵染中可能发挥的作用,通过蛋白保守结构预测、亚细胞定位、疫霉及植物生长调节剂处理、瞬时表达、基因沉默等方法对CaSYT1的表达和功能进行了初步研究.结果表明:CaSYT1含有1个跨膜螺旋结构域和2个C2结构域,定位在细胞膜;CaSYT1的转录水平受疫霉侵染以及外源SA的诱导,且在疫霉侵染以及外源SA处理下CaSYT1启动子活性被激活并驱动了下游基因的转录表达;CaSYT1的瞬时表达能够诱发辣椒叶片内H2O2的大量积累,触发了明显的过敏性细胞坏死;CaSYT1沉默增强了辣椒应答疫霉侵染的抗病性,且伴随着CaPR1、NPR1、CoDEF1抗病相关基因的上调表达,暗示CaSY1在辣椒应答疫霉侵染中起负调节作用,而其瞬时表达却能触发H2O2的积累和过敏性细胞坏死,表明CaSYT1以不依赖于细胞坏死和H2O2积累的方式在辣椒应答疫霉侵染中起着负调节作用.
关键词： 辣椒 CaSYT1 疫霉 基因鉴定 信号通路 表达分析
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不同光质对蛹虫草生长发育及代谢产物影响
《中国野生植物资源 》 2024 CSCD
摘要：目的：研究不同光质对蛹虫草子实体生物量和品质的影响。方法：将转色后的蛹虫草罐头瓶分别置于黑光（BK）、白光（W）、青色光（CY）、红光（R）、蓝光（BE）、洋红色光（CA）、太阳色光（SU）、黄光（Y）和绿光（G）9种光质条件下培养，分析不同光质条件下蛹虫草子实体色泽、生物量、活性成分和营养成分的差异。结果：光质Y处理的蛹虫草子实体颜色最优；光质Y处理的蛹虫草子实体生物量和腺苷含量最高，分别为29.97 g和2.45 mg/g；光质W处理的蛹虫草子实体多糖含量最高，为8.95 mg/g；光质BE处理的蛹虫草子实体虫草素含量最高，为0.30 mg/g；蛹虫草子实体被检测出的氨基酸种类有17种，其中光质BE处理的子实体总氨基酸含量最高，为25.32 g/100 g。结论：光质Y有助于提高子实体色泽、生物量和腺苷含量，光质W有助于提高子实体多糖含量，光质BE有助提高虫草素和总氨基酸含量。
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鹅VDR基因克隆及其多克隆抗体制备与鉴定
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】维生素D3（vitamin D3,VD3）是一类重要的类固醇激素，参与调控动物体内多种生理活动，具有生物活性的VD3代谢物1,25（OH）2D3通过与维生素D受体（vitamin D receptor, VDR）结合发挥生物学功能。试验旨在克隆鹅VDR基因CDS序列并制备鹅VDR多克隆抗体，为后续开展VDR介导VD3调控鹅体内多种生理活动的分子机制研究提供基础支撑。【方法】通过基因克隆方法获得鹅VDR基因CDS序列，并采用生物信息学方法对其编码蛋白进行结构和功能预测分析。通过基因合成和亚克隆方法构建鹅VDR基因重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达和镍柱纯化后获得鹅VDR重组蛋白。以纯化的鹅VDR重组蛋白作为免疫原，制备兔抗鹅VDR多克隆抗体，采用间接ELISA法检测抗体效价，采用Western blotting检测抗体特异性。【结果】试验成功克隆了鹅VDR基因编码区序列，长度为1 356 bp,编码451个氨基酸残基。该编码蛋白与鸡VDR蛋白的相似性高达91.4%,无信号肽和跨膜结构域，N-端含有核定位序列，且含有DNA结合域和配体结合域2个保守结构域，属于类固醇/甲状腺激素受体超家族成员。试验成功构建了pET-30a（+）-VDR重组质粒，并诱导表达鹅VDR重组蛋白。纯化后的重组蛋白纯度高达90%以上，且大小符合预期（52 ku）。试验制备了兔抗鹅VDR多克隆抗体，其抗体效价＞1∶1 093 500;除肝脏组织外，该多克隆抗体在产蛋鹅肾脏、十二指肠、空肠和回肠组织中均能够识别天然VDR蛋白的2种亚型。【结论】试验成功克隆了鹅VDR基因CDS序列，并制备了兔抗鹅VDR多克隆抗体，该多克隆抗体特异性高，可用于后续鹅体内VDR介导的生物学功能研究。
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江苏淮北地区小麦穗发芽抗性鉴定及其等位基因检测
《麦类作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为了解江苏淮北地区小麦品种穗发芽抗性以及相关基因的分布，以该地区近20年通过审定的44份小麦品种作为材料，采用整穗发芽和籽粒发芽两种方法鉴定其穗发芽抗性；利用分子标记对主要穗发芽抗性相关基因TaVp-1B、TaMFT-3A、TaMKK3-A、TaPM19-A1、Tamyb10-D1和TaDFR-B进行检测，并结合其表型分析不同抗性基因的效应。结果显示，44份品种的SGR（整穗发芽率）均值为52.5%,变化范围为10.5%～88.8%;GI（发芽指数）均值为53.9%,变化范围为12.4%～96.7%;有7份品种的SGR和GI值达到了中抗水平，可以作为抗穗发芽种质资源；未发现高抗品种。在6个与穗发芽抗性相关的基因中，TaDFR-Bb分布频率最高，达到95.5%,其余基因依次为TaMFT-3Aa（68.2%）、TaVp-1Bc（50.0%）、TaMKK3-Ac（25.0%）、TaPM19-A1a（13.6%）、Tamyb10-D1b（0）。与表型结合分析发现，只有TaMFT-3Aa和TaMKK3-Ac与穗发芽抗性显著相关，TaVp-1Bc和TaPM19-A1a与表型相关性不显著。因此，在抗穗发芽育种过程中，可以结合分子标记对TaMFT-3Aa和TaMKK3-Ac基因进行筛选并加以利用。
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基于GF-1卫星影像数据融合的冬小麦田空间信息提取
《麦类作物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为给高标准农田建设规划和粮食安全生产措施的制定提供准确信息，在对国产GF-1/PMS卫星影像进行辐射定标、大气校正、几何校正和裁剪等预处理的基础上，经过影像融合提取了高标准麦田多地物的点像元光谱信息，通过分析不同地物光谱特征，利用波段反射率、归一化差值植被指数（NDVI）和差值植被指数（DVI）构建植被光谱特征指标阈值，进而对冬小麦田及非麦田进行分类，以获取高标准麦田的空间分布信息。结果表明，光谱特征指标选择BR4>0.3、NDVI>0.619和DVI>0.317,可以较准确地从影像中识别出冬小麦田，并减少田间道路被误判为冬小麦田像元。在非麦田分类中，选择BR3>0.15和BR4>0.2,可将建筑用地与河流（沟渠）区分开。利用田间样方统计面积和遥感提取面积进行精度验证，总体精度可达97.33%,说明通过中、高空间分辨率遥感数据融合，结合多重光谱特征指标建立合理的分类阈值，可以准确提取冬小麦田及非麦田的分布信息。
关键词： 冬小麦 多光谱指标 高标准麦田 决策树分类 空间信息提取
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