科研产出
鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5的原核表达及特性分析
《浙江农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：通过在大肠杆菌中表达鹅坦布苏病毒非结构蛋白NS5对其纯化,并进行特性分析。根据鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS5基因序列,设计1对特异性引物,利用PCR技术扩增得到全长NS5基因序列,并将其定向克隆至原核表达载体p ET32a中,获得重组表达质粒p ET32a-NS5,经双酶切鉴定及测序正确后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。经IPTG诱导表达,表达的重组融合蛋白最终经SDS-PAGE及Western-blotting鉴定。结果显示,NS5融合蛋白分子质量约为120 ku,在诱导后5 h达到表达量高峰,融合蛋白以包涵体形式存在,Western-blotting显示原核表达的蛋白可被兔抗鹅坦布苏病毒血清特异性识别,表明以NS5蛋白为抗原制备的多克隆抗体具有较高的敏感性与特异性。
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华东地区H9N2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析
《江苏农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为了解华东地区H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的遗传特点和流行规律,利用RT-PCR方法扩增华东地区2008~2013年分离的17株H9N2亚型AIV血凝素(HA)基因片段,进行序列测定和遗传进化分析,并对HA蛋白质的裂解位点、受体结合位点和潜在的糖基化位点进行分析。结果显示,17株H9N2亚型AIV HA基因核苷酸和推导的氨基酸同源性分别为84.6%~99.3%和86.0%~99.5%,均属于欧亚分支。其中15株鸡源病毒属于Y280-like亚系,2株鸭源病毒属于G1-like亚系。HA裂解位点都是非连续碱性氨基酸,属于低致病力毒株。HA受体结合位点149、150、191、198和234位氨基酸存在变异,尤其是234位氨基酸有14株毒株变为L,表现出人流感病毒受体结合特性。有2株毒株在145位氨基酸出现新的糖基化位点,5个毒株在218位氨基酸缺失1个糖基化位点,13个毒株在313位氨基酸增加了一个新的糖基化位点。研究结果表明华东地区近年来H9N2亚型AIV存在一定的变异,应加强对该类病毒的分子流行病学监测。
关键词： H9N2亚型禽流感病毒 HA基因 进化分析
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氮肥水平对木薯渣复合基质栽培黄瓜生长及光合作用的影响
《江苏农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以露丰黄瓜为试验材料,使用木薯渣复合基质进行桶栽试验,研究了氮肥施用水平(每桶0 g尿素、1 g尿素、5 g尿素、15 g尿素、25 g尿素)对黄瓜植株营养生长和光合作用的影响。结果显示:在营养生长期间,植株的株高、茎粗和叶面积均随着氮肥水平的提高出现先增长后降低的趋势;氮肥水平的提高增加了植株叶片中的叶绿素含量和净光合速率Pn,每桶内施用15 g尿素处理的植株叶绿素含量为所有处理中最高,与施氮水平每桶0 g尿素、1 g尿素、5 g尿素的植株相比,叶绿素总含量显著升高,氮肥水平为每桶25 g尿素的植株的净光合速率(Pn)最高,与氮肥水平每桶15 g尿素处理差异不显著,但与氮肥水平每桶0 g尿素、1 g尿素和5 g尿素处理的植株差异达到显著水平。
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赤霉病菌拮抗菌Bacillus subtilis AF0907抗菌物质研究
《中国生物防治学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：菌株AF0907是从土壤中分离到的1株对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用的枯草芽孢杆菌,该菌株不仅对小麦赤霉病菌具有很好的拮抗活性,对其他多种植物病原菌都具有很好的拮抗效果。为了明确菌株AF0907对赤霉病菌的抑菌机理,本研究首先使用平板对持法对拮抗物质进行定位,结果表明该菌分泌的拮抗物质主要位于细胞上清液中。采用不同饱和度的硫酸铵沉淀细胞上清液,确定了60%的硫酸铵饱和度是沉淀该拮抗物质的最佳条件;分别研究了温度、p H值、蛋白酶K、氯仿对该拮抗物质活性的影响,结果表明该拮抗物质在低温下比较稳定,在60℃以上的高温下,活性迅速降低;在酸性或碱性条件下不稳定;该拮抗物质分别加入蛋白酶K和氯仿作用后拮抗活性分别下降了60.68%、80.07%,因此,初步判断该拮抗物质为蛋白质。利用DEAE-52离子交换柱层析法分离纯化了该拮抗蛋白并进行了SDS-PAGE电泳,结果显示该拮抗蛋白的分子量为48 k Da;利用PPSQ-31A蛋白自动测序仪测定拮抗蛋白N-末端15个氨基酸序列为:His-Glu-Phe-Pro-Thr-Tyr-Lys-His-Met-Tyr-Gln-Val-Met-His-Leu。
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甘蓝型油菜BnADH3基因的克隆及转BnADH3拟南芥的耐淹性
《作物学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：利用RT-PCR技术从甘蓝型油菜耐淹品系WR-4中克隆获得Bn ADH3基因,其完整开放阅读框为1137 bp。该基因编码379个氨基酸,与甘蓝Bo ADH3基因和拟南芥At ADH3基因高度同源,同源性分别达到96%和91%。利用定量RT-PCR检测Bn ADH3基因在油菜耐淹系WR-4和不耐淹系WR-24中的表达表明,在淹水处理下该基因表达受到一定的诱导,淹水处理6 h后表达开始上调,说明Bn ADH3基因在油菜耐淹机制中发挥作用;将其转化到模式生物拟南芥中,采用幼苗淹水3 d后去水处理,测定表明转基因株系叶片和根系中乙醇脱氢酶活性均高于野生型;生长4周和6周的拟南芥植株淹水3 d后的表型显示,Bn ADH3的表达可增强拟南芥对淹水胁迫的耐性,处理的T2代转基因幼苗大部分恢复,但野生型幼苗枯死;调查表明,淹水5 d后野生型植株的存活率为26.7%,转基因株系ADH33和ADH44的存活率分别为80.0%和66.7%。
关键词： 甘蓝型油菜 基因Bn ADH3 转基因拟南芥 淹水胁迫 耐淹性
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不同溶质桃果实的软化与乙烯合成相关基因的差异表达
《园艺学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以八成熟Stonyhard型桃‘霞脆’和‘有名白桃’、软溶质桃‘银花露’、硬溶质桃‘湖景蜜露’、不溶质桃‘金童6号’的果实为试材,研究了25℃和4℃贮藏条件下果实软化及乙烯生物合成途径相关基因表达水平的差异。结果显示:两种贮藏温度下,Stonyhard型桃‘有名白桃’和‘霞脆’果实释放极少量乙烯;25℃常温条件下,Stonyhard型桃果实硬度保持较高水平,但4℃低温诱导了‘有名白桃’果实软化。实时荧光定量PCR表明,软溶质、硬溶质和不溶质桃的PpACS1基因均具有高表达丰度,而Stonyhard型‘霞脆’和‘有名白桃’的表达水平极低;两种贮藏温度下,5个桃品种果实在整个贮藏期间均未检测到PpACS2和PpACS3基因的表达。此外,低温诱导了PpACO1基因在Stonyhard型桃‘霞脆’和‘有名白桃’中的表达,‘有名白桃’果实endo-PG基因受低温刺激表达也上调。说明不同肉质类型的桃贮藏期间果实软化与乙烯的生物合成关系密切,不同温度下通过调节相关基因的表达水平进而调控果实软化进程。
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养猪发酵床垫料有机肥对辣椒产量及土壤微生物多样性的影响
《土壤 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：随着环保压力的日益增加和农户环保意识的逐渐增强,发酵床养猪技术逐渐被农户接受,但是发酵床熟化垫料再利用相对较难,限制了发酵床养猪技术的推广。本研究将两种发酵床熟化垫料分别进行高温堆肥处理,熟化垫料总养分(氮、磷、钾)含量均超过50 g/kg,重金属和粪大肠杆菌含量均未超标,蛔虫卵死亡率95%以上,符合商品有机肥标准。作物试验表明,在等氮量施用条件下,发酵床熟化垫料有机肥施用后辣椒产量与化肥和常规有机肥处理相当,并能提高辣椒品质,改善土壤肥力。PCR-DGGE结果表明,不同处理土壤细菌群落结构可大致分为3种类型,对照(CK)和化肥(CF)处理群落结构相似,为第一类;常规猪粪有机肥(POF)为第二类;两种发酵床熟化垫料有机肥(FOF和ROF)群落结构相似,为第三类。施肥处理能明显改变土壤微生物多样性,施用有机肥(POF、FOF、ROF)对土壤微生物多样性改变的效果比化肥(CF)大;不同来源的有机肥(POF和FOF、ROF)对土壤中微生物区系改变方向不一样,来源接近的有机肥(FOF和ROF)对土壤微生物区系改变方向接近。
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NaCl胁迫对黄秋葵种子萌发和幼苗生理特性的影响
《扬州大学学报(农业与生命科学版) 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以8个黄秋葵(Abelmoschus esculentus L.)品种(系)为材料,研究不同浓度的NaCl溶液处理下种子萌发期发芽表现及其幼苗期生理特征。结果表明:萌发期超级五角耐盐性最强,Y116耐盐性中等,扬大K5、南平黄秋葵、台湾五福、黄羊角、Y112、红五角耐盐性较差。幼苗期随盐胁迫的加重,丙二醛(MDA)含量、Na+含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性逐步增加,K+含量逐渐减少,K+/Na+比值降低,过氧化物酶(POD)活性呈先升后降的趋势,且不同材料变化幅度不同。MDA、K+含量、K+/Na+比值等指标较好地反映了材料间的耐盐性,可以作为黄秋葵幼苗期耐盐评价的鉴定指标,SOD和POD酶活性的变化可以作为参考指标。
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气调包装对刀豆贮藏品质及抗氧化酶活性的影响
《食品科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为探讨刀豆最适宜气调包装气体组分,在(20±1)℃和相对湿度80%~90%条件下,以盒中充空气为对照1(CK1)及盒中充空气后盒侧打孔为对照2(CK2),研究了9组气体组分(O2+CO2,N2为平衡气)处理对刀豆贮藏品质及抗氧化酶活性的影响。结果表明,与其他处理组及对照组相比,气体组分为1%~4%O2+1%CO2处理的刀豆感官品质最好,其有效地抑制了刀豆粗纤维和丙二醛含量增加,维持了刀豆叶绿素、VC、可溶性糖和还原糖的含量,并抑制了刀豆多酚氧化酶活性上升和超氧化物歧化酶活性降低,但其对维持刀豆可溶性蛋白含量和过氧化物酶活性的效果与部分处理组之间差异不大,且得出9组处理之间刀豆的质量损失率差异不显著。在此基础上,用主成分分析法对各处理进行了综合评价,得出最适宜刀豆贮藏的气体组分为1%~4%O2+1%CO2。
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