转基因抗草甘膦油菜的实用PCR检测方法

潘爱虎; 张大兵; 潘良文; 陈家华; 袁政; 梁婉琪; 《中国农业科学 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：利用定性PCR技术 ,建立了检测孟山都公司培育的转基因抗草甘膦油菜中的epsps、gox和fmv35s的方法 ,同时设立了阳性内对照napin。该方法的检测灵敏度为 0 .0 5 %。利用复合PCR可以在一个PCR反应中同时检测出epsps、gox、fmv35s和napin基因。这种方法可以有效地用于转基因抗草甘膦油菜中的外源基因的检测。

关键词： 转基因油菜 聚合酶链式反应 复合PCR 检测方法 草甘膦抗性

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七个巴西蘑菇菌株品比试验

倪新江; 梁丽琨; 初洋; 潘迎捷; 《中国食用菌 》 2003 北大核心

摘要：通过对七个巴西蘑菇菌株生物学性状比较,筛选出A4为最优菌株。其特点为:菌丝生长速度较快、生物学效率较高、菇体较大且韧性好,适宜在生产上推广。

关键词： 巴西蘑菇 生物学性状 菌株比较

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信号肽序列对毕赤酵母表达外源蛋白质的影响

熊爱生; 彭日荷; 李贤; 范惠琴; 姚泉洪; 郭美锦; 张嗣良; 《生物化学与生物物理学报 》 2003 SCI 北大核心 CSCD

摘要：乙醇氧化酶启动子被分离、克隆 ,并建立了转化方法后 ,毕赤酵母已被发展成为一种高效的外源蛋白表达宿主。为了进一步提高外源蛋白质的分泌表达 ,对信号肽序列进行了研究。首先按毕赤酵母的偏爱密码合成了酿酒酵母的α因子信号肽序列MF4I,随后在MF4I信号肽序列的N端分别引入 1～ 10个毕赤酵母Aox1蛋白质的N端氨基酸 ,构成 10种不同的分泌信号肽序列 ,10种不同的分泌信号肽序列被用于植酸酶基因的毕赤酵母分泌表达。以上新的信号肽序列都可使植酸酶的分泌表达量增加 ,而以N端增加A、I、P三个氨基酸的信号肽序列引起的提高最大 ;和野生型的酿酒酵母α因子信号肽序列相比 ,使植酸酶分泌表达量增加 5倍 ,摇瓶中植酸酶的分泌表达量为 90mg/L。此外在MF4I信号肽的引导序列和内切蛋白酶间增加了EEAEAEAEP和K共 10个氨基酸 ,进一步提高信号肽的分泌效率 ,使表达又提高约 35 % ,使得摇瓶中酸性植酸酶的表达量达到 12 0mg/L ,是pPCI9K表达量的 8倍。

关键词： 毕赤酵母 信号肽序列 表达载体 高效表达

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天然物质对切割蔬菜中常见微生物的抑制作用研究

宋义忠; 孔秋莲; 孟宪军; 陈留勇; 贺继东; 章丽丽; 《食品科技 》 2003 北大核心

摘要：研究了正离子水和姜黄、虎杖、艾叶、丁香提取物对切割蔬菜中常见微生物(大肠杆菌、荧光假单胞菌、啤酒酵母)的抑制作用,结果表明:正离子水对大肠杆菌、荧光假单胞菌、啤酒酵母无抑制作用,抑制率均为0;姜黄、虎杖、艾叶、丁香提取物对3种微生物均有一定的抑制作用。适宜温度培养7d后,姜黄、虎杖、艾叶、丁香提取物对大肠杆菌的抑制率从大到小依次为:姜黄(51.7%),艾叶(37.2%),虎杖(36.5%),丁香(30.4%);对荧光假单胞菌的抑制率从大到小依次为:丁香(100%),姜黄(55.8%),艾叶(55.8%),虎杖(46.7%);对啤酒酵母的抑制率从大到小依次为:丁香(100%),姜黄(35.3%),艾叶(35.3%),虎杖(33%)。

关键词： 天然物质 切割蔬菜 微生物 抑制作用

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口蹄疫病毒非结构蛋白3B真核表达载体的构建及表达

尤永进; 葛艳; 陈波; 饶忠; 徐泉兴; 朱彩珠; 张强; 卢永干; 《中国预防兽医学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：设计、合成FMDV非结构蛋白 3B基因的PCR引物 ,并在引物 5’端和 3’端分别加入含BamHI和HindⅢ限制性酶切位点序列。以FMDV基因组RNA为模板 ,利用RT_PCR技术扩增 3B基因 ,得到的基因片段经BamHI/HindⅢ双酶切后与转座载体pFASTBACHTa连接 ,转化宿主菌DH10BAC ,在含庆大霉素、卡那霉素、X_gal、IPTG的LB平板上 37℃培养 2 4h ,提取白色菌落 ,从中提取重组穿梭载体Bacmid 3B ,与脂质体共同转染昆虫细胞sf9,得到重组杆状病毒 ,病毒经传代扩增后感染High 5细胞 ,表达目的蛋白———FMDV非结构蛋白 3B。SDS_PAGE及WesternBlot结果显示 ,本研究成功构建了Bacmid_3B重组表达载体 ,并在昆虫细胞中表达了NSP_3B蛋白 ,该表达产物可与FMDV感染的猪、牛血清产生免疫反应。

关键词： 口蹄疫病毒 非结构蛋白 真核表达载体 克隆 表达

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信号转导抑制剂对囊素刺激杂交瘤细胞抗体分泌及其mRNA表达的影响

缪德年; 苏小运; 姚惠娟; 樊生超; 陈溥言; 《南京农业大学学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 3激酶抑制剂heparin、Ca2 + /calmodulin依赖蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN 6 2、磷脂酶C抑制剂U 7312 2和蛋白激酶G抑制剂后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响明显 (P <0 0 1)。而加入蛋白激酶A抑制剂 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein和丝裂原活化的蛋白激酶抑制剂PD 980 5 9后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ,这 3种抑制剂对杂交瘤细胞抗体分泌速度的抑制率分别为 74 5 5 % ,91 13%和80 6 9%。加入 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、genistein和PD 980 5 9后 ,囊素处理组与对照组γ1mRNA的表达水平差异不显著 (P >0 0 5 ) ,说明这 3种抑制剂阻断了囊素刺激的杂交瘤细胞抗体mRNA的表达。以上结果表明 ,蛋白激酶A、酪氨酸蛋白激酶和丝裂原活化的蛋白激酶参与了囊素在杂交瘤细胞中的信号转导。

关键词： 杂交瘤细胞 信号转导抑制剂 囊素

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上海地区李树栽培中应注意的几个问题

张学英; 骆军; 叶正文; 《中国南方果树 》 2003 北大核心

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一种作用于花青素和甜菊醇的甜菊糖基转移酶的基因克隆和功能分析(英文)

马凌波; 张大兵; 陈亮; 陈睦传; 《实验生物学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：本文对一种新的甜菊糖基转移酶进行了基因克隆和功能分析。获得的基因cDNA全长1419bp,编码473个氨基酸,蛋白质分子量约53.2K Da。与常见的糖基转移酶基因比较,相似性达44%以上,且具有糖基转移酶的保守序列。体外异源表达获得的融合蛋白,具有在花青素类和甜菊醇等糖基受体上转糖基的酶活性。在对一系列不同底物的酶活性进行比较后,推测这种糖基转移酶在体内参与了甜菊糖苷的合成。结果表明,具有广泛的底物活性的类黄酮类糖基转移酶,在甜菊体内不仅对类黄酮转糖基,而且在生成水溶性甜菊糖苷的过程中也扮演重要的角色。

关键词： 甜菊 糖基转移酶 甜菊糖苷 花色素苷

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异源三倍体黄瓜的离体繁殖和鉴定

陈劲枫; 罗向东; 余纪柱; 钱春桃; 庄飞云; 任刚; 《植物生理学通讯 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：对甜瓜属双二倍体种 (CucumishytivusChenandKirkbride,2n =4x =38)与栽培黄瓜“北京截头”(C .sativuscv .Bei jingjietou,2n =2x =14 )杂交的种子进行胚拯救。假定为杂种植株的顶芽和腋芽用于离体繁殖的结果表明 :在MS +2 .2mg·L-16 BA和MS +3.0mg·L-1KT +0 .2mg·L-1NAA培养基上诱导不定芽的增殖系数分别为 6 .5 3和 6 .6 3;丛生芽在MS +0 .2mg·L-16 BA的培养基上伸长 ,大约 10d后取整齐一致的芽用于生根 ,在 1/ 2MS +0 .2mg·L-1IBA上生根率达91.7%。田间组培苗的单性结实能力比“双亲”更强 ;果刺黑色 ,与C .hytivus相同 ;叶深绿色 ,不同于双二倍体特有的淡黄绿色而与“北京截头”一致 ;花粉粒可染率不到 10 % ,根尖体细胞染色体鉴定为为 2n =3x =2 6 ,从而确定其为异源三倍体黄瓜。

关键词： 远缘杂交 异源三倍体 离体繁殖 黄瓜

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不同灵芝菌丝体中三萜与多糖含量的比较

赵明文; 王晨光; 鲍鹏; 邢增涛; 梁婉琪; 郁建强; 尚晓冬; 门殿英; 王南; 潘迎捷; 《中国食用菌 》 2003 北大核心

摘要：根据十九种不同来源的灵芝菌株的生长速度及长势 ,从中选出了菌丝体阶段生长性能良好的 10个菌株进行液体培养 ,并测定了菌丝中三萜和多糖的含量。结果表明 :不同灵芝菌株在三萜和多糖含量上存在着一定的差异 ,其中多糖含量以汉城 2号、日本灵芝、南韩灵芝为高 ;三萜含量却以韩国灵芝、灵芝 0 772、灵芝 0 771为高 ;并且二者的含量不存在必然的联系 ,这为灵芝优良品种的筛选提供了理论依据。

关键词： 灵芝、液体培养、三萜、多糖

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