科研产出
单核细胞增生李斯特菌RsbS蛋白的抗应激机制作用研究
《中国预防兽医学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)RsbS蛋白的抗应激机制,本研究设计针对rsbS基因完整ORF的引物,PCR扩增rsbS基因,构建重组表达质粒pET-30a-rsbS,转化至表达菌株Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导培养后SDS-PAGE检测,结果显示获得18.8 ku带His标签的重组RsbS蛋白,利用His-Ni纯化柱纯化重组RsbS蛋白,得到浓度约1 μg/mL的纯化蛋白.以纯化的重组RsbS蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,经间接ELISA测定抗体效价为1∶128 000;经western blot检测RsbS多克隆抗体具有良好的反应原性.通过等温滴定量热试验检测与RsbS互作的蛋白,结果显示RsbS与其上游RsbR蛋白存在体外互作.将Lm野生株10403S和缺失株△rsbR分别接种至BHI液体培养基和含5%NaCl的BHI应激培养基培养后,分别采用荧光定量PCR和western blot对rsbS的转录和表达水平进行分析,结果显示经5%NaCl应激30 min后,野生株中rsbS的转录和表达水平增高,而缺失株中rsbS的转录和表达水平均降低.综上,本研究首次证实RsbS通过与RsbR蛋白互作参与Lm的抗应激反应.本研究为进一步揭示RsbS蛋白的生物学功能及Lm的抗应激机制研究奠定基础.
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利用微卫星标记分析湖羊群体遗传多样性
《上海农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：利用微卫星标记技术分析湖羊群体遗传多样性.结果表明:31个湖羊样本共检测出等位基因210个,Shannon指数I为1.416,多态信息含量PIC为0.634,观察杂合度Ho为0.692,期望杂合度He为0.685,Ewens-Watterson检测所有位点都处于置信区间内.公羊Ho为0.694,He为0.643,I为1.190,PIC为0.564;母羊Ho为0.676,He为0.693,I值为1.403,PIC为0.636,表明群体遗传多样性丰富,变异程度高.等位基因频率分布呈L型,各位点均值处于Hard-Weinberg平衡,表明湖羊群体未出现瓶颈效应.研究结果为湖羊育种奠定了一定基础.
关键词： 湖羊群体;微卫星;遗传多样性;瓶颈效应
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滤解带构建对硬质驳岸水体微生物功能多样性的影响
《生态与农村环境学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：根据人工湿地、生态滤床等思路设计了一种滤解带装置,在硬质驳岸岸线构建人工生态系统对其进行修复,对比研究了短期和长期不同类型滤解带(无植物和有植物)设置对水体污染物(TN、TP、TOC)浓度的影响,采用Biolog方法对水体微生物功能多样性特征进行分析.结果表明:滤解带短期设置对水体污染物浓度无影响,长期设置则显著降低污染物浓度,与对照相比,试验9个月,无植物滤解带处理水体中ρ(TN)、ρ(TP)和ρ(TOC)分别降低17.2%、16.6%和29.8%,有植物滤解带处理分别降低28.7%、18.4%和42.7%.滤解带长期设置增加了水体微生物碳源利用率和功能多样性,优化了水体微生物碳源利用类型,且有植物滤解带设置区域微生物作用比无植物滤解带设置区域更为明显.这表明滤解带设置能够部分解决河湖岸带硬化导致的生态系统退化问题,对硬质驳岸生态功能提升具有重要的指导意义.
关键词： 滤解带;硬质驳岸;水体;污染物;微生物
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淡足侧沟茧蜂寄生对草地贪夜蛾幼虫血淋巴黑化反应及酚氧化酶的影响
《应用昆虫学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确淡足侧沟茧蜂Microplitis pallidipes寄生对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda血淋巴黑化率、酚氧化酶原（Prophenoloxidase,PPO）基因表达量和酚氧化酶（Phenoloxidase,PO）活性的影响，为更有效的利用淡足侧沟茧蜂防控草地贪夜蛾提供理论依据。【方法】通过室内寄生实验确定草地贪夜蛾被淡足侧沟茧蜂寄生的最佳龄期；通过RT-qPCR分析草地贪夜蛾两个PPO基因（SfPPO1和SfPPO2）的时空表达谱；通过薄膜法统计草地贪夜蛾被寄生后的血淋巴黑化率；采用吸光光度法测定草地贪夜蛾被寄生后的血淋巴PO活性；采用RT-qPCR测定草地贪夜蛾被寄生后血淋巴SfPPO1和SfPPO2的相对基因表达量。【结果】草地贪夜蛾被淡足侧沟茧蜂寄生的最佳龄期为3龄幼虫，SfPPO1和SfPPO2均在卵块和4龄幼虫中基因表达量较高，且主要在幼虫血淋巴中表达。草地贪夜蛾被寄生后12、24、48和72 h的血淋巴黑化率显著低于未寄生组（P<0.05）,SfPPO1和SfPPO2的相对基因表达量和PO活性也低于未寄生组。相关关系分析表明，SfPPO1的相对基因表达量与SfPPO2的表达量呈现线性关系（R2=0.9124）,PO活性与两个PPO基因相对表达量之间、黑化率与PO活性和PPO基因相对表达量之间均呈现正相关。【结论】淡足侧沟茧蜂寄生会抑制草地贪夜蛾血淋巴的黑化率，下调血淋巴中酚氧化酶原基因的表达量和PO活性，且PO活性、PPO基因相对表达量及血淋巴黑化率3个指标之中，两两之间均呈现正相关性。
关键词： 淡足侧沟茧蜂 草地贪夜蛾 黑化反应 酚氧化酶 生物防治
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基于Amplex Red荧光分析法的新型高通量乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选模型构建以及应用
《食用菌学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：基于Amplex Red荧光分析法,构建新型乙酰胆碱酯酶抑制剂(acetylcholinesterase inhibitor,AChEI)高通量筛选模型并对其进行评价,检测97个灵芝(Ganoderma lucidum)子实体醇提物对乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)的抑制活性,再通过细胞模型进行验证.结果表明:构建的新型高通量AChEI筛选模型具有准确度、灵敏度高,不受测试样品溶液颜色干扰等优点;筛选出3个对乙酰胆碱酯酶具有较强抑制活性的灵芝子实体醇提物,研究结果可为后续灵芝来源AChEI的开发提供参考.
关键词： 食用菌 阿尔茨海默症 乙酰胆碱酯酶抑制剂 灵芝 SH-SY5Y细胞
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猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国兽医科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)作为一种新型的猪肠道腹泻病毒,建立快速有效的检测手段十分必要.本研究根据PDCoV N基因中的保守序列设计了 1对特异性引物,PCR扩增后克隆至pEASY-Blunt Zero载体,构建了阳性质粒pEASY-PDCoV/N.以阳性质粒pEASY-PDCoV/N为模板,建立了检测PDCoV的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,并对其敏感性、特异性和重复性等进行了优化与验证.结果显示,Ct值与标准模板在5.83×107~5.83×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,线性方程的斜率为-3.323,最低检测限度为5.83×101 copies/μL.该方法特异性和重复性均较好,对PEDV、PRV、TGEV等病毒均未出现检测信号,批内和批间变异系数分别小于1%和2%.利用建立的PDCoV荧光定量PCR检测方法对60份猪腹泻样品进行核酸检测,阳性率为18.3%,比普通PCR检出率高6.7%.结果表明,该方法可适用于临床快速检测PDCoV,为该病的预防和控制提供技术支持.
关键词： 猪德尔塔冠状病毒;N基因;荧光定量PCR
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茶树菇原生质体再生及单核体菌株的特性
《微生物学通报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【背景】茶树菇遗传育种工作是茶树菇产业持续发展的保障和关键，原生质体的制备及单核体菌株的获得可为茶树菇遗传育种工作的开展提供技术支持。【目的】获得茶树菇原生质体的再生特性、单核化特性及其交配型，为开展茶树菇的杂交育种、融合育种、诱变育种、遗传转化和功能基因挖掘等奠定基础。【方法】以茶树菇保藏菌种Aa11的菌丝为材料，采用甘露醇溶液和溶壁酶溶液直接处理平板菌丝制备茶树菇原生质体，而后对原生质体进行分离和再生培养。通过原生质体单核菌丝体两两单单对峙培养，观察对峙培养过程中的菌落形态变化。【结果】当接种块数量为7、酶解温度为33-34℃、酶解时间为60-80 min时，原生质体数量为107个/mL。茶树菇原生质体在涂布平板7 d后肉眼才可见明显的再生菌落形成，在再生培养基上再生率为0.71%，单核化率为41.1%；再生异核体和再生单核体在形成再生菌落时有时间差，从第7天开始往后连续3 d的再生菌落均为异核体菌株，往后第4天开始陆续出现单核体菌落，之后时间内的菌落均为单核体菌株。试验共得到290个原生质体单核体，分为A1B1和A2B2两种亲本交配型，A1B1和A2B2二者的比例为138:152；两种交配型的单核体在菌落形态上都表现为气生菌丝旺盛、颜色浓白，A1B1单核体的生长速度要快于A2B2单核体。双亲菌落接触部位存在一条明显比周围菌丝体稀疏的分界线，双亲菌落接触区域的分界线均向菌落扩大速度慢的亲本菌落弯曲。【结论】两种交配型单核体菌株及其对峙培养后的菌落形态变化特征可为茶树菇杂交育种的亲本选择提供依据。
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观赏樱属植物基因组SSR分子标记开发及鉴定
《分子植物育种 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了开发樱属植物的基因组SSR（简单重复序列）分子标记，本研究在IlluminaNovaSeq PE平台上进行喜马拉雅樱花（Cerasus cerasoides）基因组序列勘测。利用Perl脚本MISA识别微卫星序列，并随机合成100对引物进行引物多态性筛选。选择易扩增、多态性高的引物，采用荧光标记毛细管电泳法在45种樱属植物中进行检测和遗传多样性分析。结果表明，喜马拉雅樱花基因组共存在113 571个SSR位点（≥5个重复），其中包含53.31%单核苷酸基序，36.64%二核苷酸基序，其余基序类型占比10%。在此基础上共筛选出21个SSR标记，并将其用于观赏樱属植物的遗传多态性评估，结果共检测到215个等位基因，平均每个位点10.24个等位基因，平均杂合度为0.38。采用SSR标记构建的进化树较好地反映了45种供试樱属植物之间的亲缘关系。本研究开发了全新的樱花基因组SSR分子标记，可用于樱属植物的遗传多样性分析和分子标记辅助育种。
关键词： 喜马拉雅樱花 基因组SSR 微卫星 分子标记 遗传多样性
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甘蓝型油菜新品种'沪白1号'的选育
《上海农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：甘蓝型双低油菜品种'沪白1号'采用品种(系)间杂交后经系统选育而成,种子含油量45.0%,芥酸含量0.9%,硫苷含量18.0μmol∕g.在2017—2018年度上海市油菜区域试验中,平均产量2597.6 kg∕hm2,比对照'沪油21'增产6.61%;在2018—2019年度上海市油菜区域试验中,平均产量2631.2 kg∕hm2,比对照'沪油21'增产1.67%;两年的上海区域试验平均单产2614.4 kg∕hm2,比对照品种'沪油21'增产4.14%.'沪白1号'适于我国长江下游地区种植.'沪白1号'可作为蔬菜食用,在30万—45万株∕hm2直播密度下,单株菜薹重30 g,产量达9000—13500 kg∕hm2,菜薹中蛋白质含量25.3%,可溶性糖含量20.9 g∕(100 g),维生素C含量3.02 mg∕kg.
关键词： 甘蓝型油菜;双低;’沪白1号’
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