科研产出
大蒜热激转录因子基因AsHSFB1的克隆、亚细胞定位及其表达分析
《江苏农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：热激转录因子(HSF)基因是植物热胁迫响应的重要转录调节基因,在植物胁迫应答和其他抗逆反应过程中起着关键作用.为研究大蒜热激反应的分子机制,本研究基于大蒜转录组数据,以徐蒜 6 号为试验材料,采用同源克隆方法获得编码HSF的AsHSFB1基因.序列分析结果显示,AsHSFB1 含有 882 bp的开放阅读框,编码 293 个氨基酸,其蛋白质含有热激转录因子的特征结构域.在进化关系上,AsHSFB1 与拟南芥AT4G11660(AtHSFB2B)同源性最高.亚细胞定位结果表明,AsHSFB1 蛋白主要定位在细胞核和细胞质上.本研究采用同源重组技术成功构建pCAMBIA1305-AsHSFB1过表达载体,为进一步研究该转录因子基因的功能,培育耐热大蒜品种奠定基础.RT-PCR分析结果表明,不同大蒜品种中,AsHSFB1基因在叶片中相对表达水平均最高,具有组织表达特异性;38℃高温胁迫处理下,徐蒜6号中的AsHSFB1基因相对表达水平在24 h时明显上调;4℃低温胁迫下,徐蒜 815 和徐蒜 6 号中AsHS-FB1基因相对表达水平的变化趋势相似,均先上升后下降,在处理4 h时相对表达水平达到峰值.
关键词： 大蒜 AsHSFB1基因 同源重组技术 亚细胞定位 相对表达水平
全文链接
请求原文
转基因在菊花叶肉原生质体瞬时表达及亚细胞定位分析
《江苏农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为探究用于亚细胞定位研究的菊花叶肉原生质体分离的最适条件，本研究以菊花无菌苗叶片为受体材料，分析不同叶龄叶片和酶解时间对菊花原生质体细胞产量的影响，并利用外源质粒的导入验证了聚乙二醇（PEG）介导的菊花原生质体瞬时转化体系。结果表明，以组织培养14 d的菊花无菌苗叶片为外植体材料，在含1.5%纤维素酶、0.4%离析酶和0.8 mol/L甘露醇的酶解液中振荡酶解6 h,能获得高产的原生质体细胞。采用PEG介导的瞬时转化含绿色荧光蛋白（GFP）的表达载体，在菊花原生质体细胞中观察到强烈的绿色荧光信号。结果显示，稗草乙烯转录因子基因（EcERF）在菊花原生质体中与本氏烟草叶片中的瞬时表达一致，EcERF基因定位于细胞核中。
全文链接
请求原文
单核细胞增生李斯特氏菌内化素InlJ对噬菌体敏感性及生物被膜形成的影响
《食品科学 》 2023 EI 北大核心 CSCD
摘要：为深入探索单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)inlJ基因在噬菌体敏感性和生物被膜中的作用及功能,本研究通过同源重组构建inlJ基因缺失株Lm NJ05-ΔinlJ,鉴定其生长、黏附及侵袭特性,解析其对噬菌体敏感性和生物被膜形成中的作用机制.结果表明:与野生型Lm NJ05相比,构建的缺失株Lm NJ05-ΔinlJ对RAW264.7细胞的黏附率和侵袭率分别为20.05%和4.42%,黏附和侵袭能力显著减弱;Lm NJ05-ΔinlJ对李斯特菌噬菌体vB-LmoM-NJ05的成斑率提高至2.72 倍;体外裂解分析表明噬菌体vB-LmoM-NJ05对缺失株Lm NJ05-ΔinlJ裂解效果更强;噬菌体效价分别在105 PFU/mL和108 PFU/mL能够完全抑制和清除Lm NJ05-ΔinlJ生物被膜;生物被膜形成相关基因的转录分析表明,噬菌体作用缺失株Lm NJ05-ΔinlJ后,degU、agrA、agrD、luxS、yneA、recA和hpt基因的转录均下调(表达水平趋向于0).由此可见,inlJ基因的缺失能够增强Lm对噬菌体敏感性,下调Lm对细胞侵袭力和生物被膜形成能力.因此,内化素基因inlJ不仅具有调控Lm自身的作用,还能够调节其对噬菌体的相互作用,为噬菌体的生物防控技术开发和应用奠定基础.
关键词： 单核细胞增生李斯特氏菌 内化素InlJ 噬菌体敏感性 细胞黏附和侵袭 生物被膜
全文链接
请求原文
真空预冷过程中喷雾补水处理对上海青低温流通及货架期品质的影响
《食品科学 》 2023 EI 北大核心 CSCD
摘要：目的：探究真空预冷过程中喷雾补水处理对上海青低温流通及货架期间品质的影响。方法：采用真空预冷处理及其与喷雾补水结合共处理上海青，模拟低温流通（（4±1）℃、1 d）和货架销售（（20±1）℃、5 d），并分析流通和货架期间上海青的品质指标和营养指标。结果：与单独真空预冷相比，真空预冷结合喷雾补水不仅使上海青预冷时间缩短了68%，而且使上海青的失水率降低了73.29%，货架结束后质量损失率也降低了15.6%。真空预冷与喷雾补水共处理亦显著延缓了上海青的黄化进程，维持了组织较高的可滴定酸质量分数、可溶性糖含量和可溶性蛋白含量。此外，在货架期最后1 d时，真空预冷与喷雾补水共处理组的亚硝酸盐和丙二醛含量比单独真空预冷组分别降低了13.70%和14.82%。结论：真空预冷过程中喷雾补水既能解决单独真空预冷造成的失水问题，缩短预冷时间；又可延缓采后上海青的黄化衰老进程、维持组织较好的营养品质。
全文链接
请求原文
圆锥绣球'花园蕾丝'组培快繁技术研究
《中国农学通报 》 2023 CSCD
摘要：以圆锥绣球‘花园蕾丝’的带芽茎段为外植体，研究外植体消毒方法、基本培养基与植物生长调节剂组合对其腋芽萌发、丛生芽增殖和不定根诱导的效果，以及不同基质对组培苗移栽的影响。以不同有效氯浓度的次氯酸钠溶液消毒不同时间处理进行消毒效果比较，并以MS、1/2MS、WPM、1/2WPM等作为基本培养基，添加不同浓度的6-BA、NAA或IBA进行侧芽诱导、增殖和生根；以珍珠岩、蛭石、泥炭配比成不同的基质，进行组培苗的移栽。结果表明，‘花园蕾丝’外植体最佳消毒方法是75%乙醇消毒30 s后，经无菌水冲洗3～4次，再用有效氯浓度2.0%的次氯酸钠溶液消毒8～10 min，最后用无菌水冲洗4～6次；腋芽萌发最佳培养基为1/2WPM+2.0 mg/L 6-BA，芽增殖的最佳培养基为WPM+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，诱导生根的最佳培养基为1/2WPM+0.3～0.5 mg/L IBA，组培苗移栽最佳基质为按等体积比混匀的珍珠岩、蛭石和泥炭土。研究初步建立了圆锥绣球‘花园蕾丝’的组培快繁技术体系，可为其工厂化育苗和规模化生产提供技术支持。
关键词： 圆锥绣球 离体培养 快繁技术 组培苗 外植体消毒 炼苗移栽
全文链接
请求原文
大麦根系响应湿害胁迫的转录组分析
《麦类作物学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：湿害是影响大麦产量和品质的主要非生物胁迫之一。为进一步明确大麦响应湿害胁迫的应答机理，本研究以耐湿大麦品种泰兴9425为材料，利用高通量转录组测序（RNA-seq）技术，比较不同湿害胁迫时间下的基因表达差异。结果表明，湿害胁迫12 h后获得1 436个差异表达基因，而胁迫48 h后获得2 090个差异表达基因，其中共同上调表达基因286个。GO富集分析发现，涉及代谢过程、细胞膜、催化活性等的差异表达基因占比最多。KEGG富集分析发现，差异表达基因主要富集于糖酵解、类黄酮生物合成、乙烯合成等代谢通路。对7个耐湿相关的候选基因进行qRT-PCR分析，发现差异表达基因的表达量变化趋势与RNA-seq结果一致。
全文链接
请求原文
猪流行性腹泻病毒S1蛋白IgG抗体间接ELISA检测方法的建立
《中国兽医科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：根据猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株的S1基因序列，与pcDNA3.1载体构建重组表达质粒pcDNA-12S1，利用瞬时转染方法将pcDNA-12S1转染至293F细胞，每隔24 h取样，进行Western-blot检测，确定最佳收样时间，并采用镍离子亲和层析技术进行蛋白纯化。SDS-PAGE和Western-blot结果显示，该S1蛋白的纯度高、免疫原性好。以S1蛋白作为包被抗原，建立并优化了IgG抗体间接ELISA方法。结果显示，S1蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/m L；最佳封闭剂和最佳封闭时间为5%脱脂奶粉溶液37℃作用3 h；待检血清和酶标二抗的最佳稀释度分别为1∶100和1∶20 000，最佳孵育时间均为37℃30 min。采用该方法检测猪非典型瘟病毒（APPV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪轮状病毒（PoRV）的阳性血清，结果均为阴性，表明该方法特异性好；该方法的批内和批间变异系数（CV）均＜9%，表明该方法重复性较好；该方法与间接免疫荧光（IFA）相比较，阳性符合率为93.54%，阴性符合率为94.74%，总符合率为94%。上述结果表明，该方法可用于检测临床猪血清中的PEDV抗体，为PEDV的感染与接种疫苗后的免疫保护状态监测提供有效依据。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 S1蛋白 293F细胞 间接ELISA
全文链接
请求原文
甘薯茎线虫病抗扩展性遗传特性分析与QTL定位
《植物遗传资源学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：甘薯茎线虫病由马铃薯腐烂线虫引起，是严重影响甘薯产量和品质的检疫性病害。挖掘抗茎线虫病基因并通过分子设计育种培育抗病品种是防控茎线虫病的有效途径。本研究前期以抗茎线虫病甘薯品种美国红为父本，感病品种徐紫薯8号为母本，通过控制授粉有性杂交方式构建了包含274个F1子代的分离群体。以该F1群体为材料，利用室内人工接种法对F1子代的茎线虫病抗扩展性进行鉴定，结果表明，甘薯茎线虫病抗扩展性呈连续性偏峰态分布，甘薯茎线虫病发病体积比与扩展直径和扩展长度呈极显著正相关，与薯块直径、薯块长度和薯块长宽比无相关性，说明薯块的大小和薯形对抗扩展性鉴定结果无影响。甘薯茎线虫病抗扩展性遗传力为75.7%，表明抗扩展性主要受遗传因素控制。基于前期构建的甘薯SNP遗传图谱对抗扩展性进展QTL定位，获得与抗扩展性紧密连锁的QTL 10个，解释6.6%～10.7%的表型变异。候选基因功能注释表明，苯丙素生物合成、植物激素信号转导、植物病原互作代谢等通路参与抗病胁迫。筛选5个关键候选基因进行荧光定量表达分析，在接种茎线虫后候选基因itf13g19570表达量显著增高。研究结果为甘薯茎线虫病抗病基因挖掘和抗病机理解析提供了重要参考。
关键词： 甘薯茎线虫病 F1群体 遗传力 QTL定位 候选基因注释
全文链接
请求原文
玉米中伏马毒素B污染高光谱快速检测模型研究
《中国粮油学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为提高基于高光谱的玉米伏马毒素B(Fumonisin B,FB)污染检测模型的精度和稳健性,本研究提出了一种通过特征变量筛选结合麻雀搜索算法(SSA)优化BP神经网络的建模策略,并与基于全谱段和特征变量构建的PLS-DA、PLS和BP神经网络模型结果进行对比.在所有玉米FBs污染等级判别分析模型中,SPA-SSA-BP神经网络与基于全谱段构建的PLS-DA的模型总识别正确率相同且最高,均为95.56%;在玉米FBs污染水平定量分析中,CARS-SSA-BP神经网络模型精度最高,RMSEP和RPD分别为12.41 mg/kg和3.62,SPA-SSA-BP神经网络次之,RMSEP和RPD分别为12.85 mg/kg和3.46.结果表明,CARS和SPA两种算法都能有效提取高光谱特征信息,且SSA算法具有通过对BP神经网络的初始权值和阈值进行优化,提升模型的稳健性,改善BP神经网络预测精度的能力.
全文链接
请求原文
