科研产出
基因编辑外源基因Cas9定性定量检测方法的研究
《农业生物技术学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：对基因编辑产品进行有效监管、消除公众疑虑是基因编辑产品在我国产业化的前提.目前,Cas9核酸内切酶是基因编辑技术中最常用的手段,因此需要建立针对Cas9核酸内切酶的定性定量检测方法.本研究以基因编辑中最常用的Cas9核酸内切酶外源序列为靶位点,设计和筛选引物、探针,进行PCR体系优化,确定最佳的引物浓度与退火温度,通过特异性、灵敏性等测试建立了检测基因编辑外源基因Cas9的普通PCR和qPCR检测方法.在检测方法特异性实验中,普通PCR和qPCR方法均只在含有Cas9等外源DNA的样品中扩增出了阳性结果,而其他不含有Cas9核酸内切酶的样品则均为阴性结果;在方法灵敏性测试中,普通PCR检测方法的检出限为0.1%,qPCR法检测下限(limit of detection,LOD)为16个拷贝;在方法稳定性实验中,普通PCR和qPCR方法在其相应最低检出限浓度下分别进行了67与60次重复实验,结果均为阳性.该定性定量方法适用于不同基因编辑作物,如水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine max)和油菜(Brassica napus)等.本研究建立的Cas9定性及定量检测方法特异性良好、灵敏度较高、稳定性较强.该方法的建立为将来实现对基因编辑产品的有效监测提供了一定的技术支撑.
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皱环球盖菇不同极性萃取物抗氧化活性比较及成分分析
《菌物学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为考察皱环球盖菇子实体的抗氧化活性，利用溶剂萃取法得到皱环球盖菇子实体二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水4种不同极性萃取物，选用二苯基三硝基苯肼自由基（DPPH）法、羟基自由基法和还原力法对4种萃取物进行体外抗氧化活性分析。结果表明，乙酸乙酯萃取物显示了最强的抗氧化活性；通过超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱法（UPLC-Triple-TOF/MS）分析了皱环球盖菇乙酸乙酯萃取物中化学组成，从中鉴定出9种化合物，多数为核苷类物质，具有很好的抗氧化活性。研究结果为皱环球盖菇的开发提供了理论依据和技术支持。
关键词： 皱环球盖菇 不同极性提取物 抗氧化活性 核苷类物质 超高效液相色谱串联三重四级杆飞行时间质谱分析
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点滴复膜酵母兔源分离株基因组测序及比较分析（英文）
《菌物学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：点滴复膜酵母Cyniclomyces guttulatus是一种定殖及生长于犬、兔、豚鼠、龙猫、大鼠和小鼠等动物胃肠道内的真菌。与大多数传统酵母相比，点滴复膜酵母具有耐酸(pH 1.5–4.5)、耐高温(38–42℃)的独特生长特性，可在体外快速增殖。腹泻动物粪便中可见大量点滴复膜酵母，尽管没有直接证据表明感染点滴复膜酵母会引起明显病状，但其被认为是多种动物的机会性致病菌。本研究通过全基因组测序和转录组测序明确点滴复膜酵母的基因结构和注释信息，获得点滴复膜酵母的系统性基因组和转录组数据。结果显示基因组大小为29.71Mb，包含11307个基因，转录组大小为17.67Mb,GC含量分别为43.02%和43.09%;mRNA、CDS、外显子和内含子的平均长度分别为1 476、1 447、1 374和540 bp；点滴复膜酵母存在517个独特的基因家族，共包括1 162个基因，该酵母的独特基因特点为后续研究奠定基础。比较分析结果表明，点滴复膜酵母的基因组大小和数量明显大于其他12种酵母，提示该酵母可能存在全基因组复制，这可能与其独特的胃肠道定殖、耐酸和耐高温生长特性密切相关。
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浙江2个主栽枇杷品种加工果膏的品质性状比较
《浙江农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为延长枇杷产业链、提高其附加值,对浙江主栽的软条白沙、大红袍枇杷果实进行果膏加工适应性和品质性状比较研究,筛选适宜品种,并研究果浆加酶处理和浓缩程度对该品种果实出汁率,果膏出膏率,总酸、总酚和总黄酮含量,自由基清除能力,色度值和感官评分的影响,确定果膏加工的关键工艺.结果表明,软条白沙枇杷的出汁率为53.18%,出膏率为20.54%,果膏总酸含量为6.70 g·L-1;大红袍枇杷的出汁率为39.88%,出膏率为15.23%,果膏总酸含量为7.64 g·L-1,故软条白沙枇杷的加工适应性较好.软条白沙枇杷打浆后加果胶酶和纤维素酶出膏率可提高6.35百分点;果膏中总酚和总黄酮含量、自由基清除能力随可溶性固形物含量增加而提高,从50%浓缩至80%,总酚和总黄酮含量分别提高了242%和211%,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)和2,2′-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]自由基清除能力分别提高了1.88、15.26百分点.综合考虑品质性状、产率和节能,建议枇杷果膏加工宜选择软条白沙枇杷为原料,榨汁前加酶处理,将果膏浓缩至可溶性固形物含量为70%.
关键词： 枇杷果膏 加工适应性 出膏率 出汁率 抗氧化能力 可溶性固形物
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不同调理剂组合对浙江红壤土壤肥力、微生物群落多样性和水稻产量的影响
《浙江农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：浙江省中低产稻田土壤大多属于红壤，普遍存在土壤酸化、缺肥严重的问题。为提升红壤肥力进而获得水稻高产，以浙江省兰溪市红壤为对象，采用石灰石粉、腐殖酸和秸秆3种调理剂为材料，开展包含CK（不施肥且不施调理剂）、N（常规施肥）、NS（常规施肥+石灰石粉）、NSJ（常规施肥+石灰石粉+秸秆还田）、NSF（常规施肥+石灰石粉+腐殖酸）5个处理的水稻田间试验。结果表明，石灰石粉的施用能迅速提升土壤pH值，NS、NSJ和NSF处理的土壤pH值相较于CK显著（P<0.05）提高了1.17～1.60个单位。与CK和N处理相比，腐殖酸的施用显著（P<0.05）提高了土壤有机质含量，秸秆还田或腐殖酸的施用均显著（P<0.05）提高了土壤速效钾含量。调理剂的施用提高了土壤微生物群落利用碳源的能力，还增加了土壤微生物磷脂脂肪酸（PLFA）含量，其中，以NSF处理的AWCD值和PLFA含量相较于CK提升最多。高通量测序结果表明，调理剂的施用显著改变了土壤微生物群落结构，增强了群落丰富度和群落多样性。石灰石粉、秸秆还田和腐殖酸均能显著（P<0.05）提高水稻产量，其中，以NSF处理的产量最高，较CK处理提高了11.02%。综合来看，在试验条件下，NSF处理是改良红壤、提高水稻产量的最佳组合。
关键词： 中低产田 石灰石粉 腐殖酸 秸秆还田 土壤肥力 水稻产量
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转红色荧光蛋白稻瘟菌的构建与分子分析
《植物生理学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：水稻稻瘟病是水稻重要病害之一,研究稻瘟菌与水稻互作,对水稻稻瘟病防治具有重要意义.通过原生质体转化法将红色荧光蛋白基因RFP转化稻瘟菌菌株E2007046A-2,获得了6个稳定的转化子;通过继代培养,对转化子进行表型鉴定、DNA杂交、qRT-PCR分析,筛选出了产孢量较高、RFP和HPT稳定插入且高表达的转化菌株;在荧光显微镜下,观察到水稻细胞内表达红色荧光蛋白的侵染菌丝形成的侵染结构.本研究建立了稻瘟菌侵染水稻过程的可视化系统,为稻瘟菌与水稻互作提供了材料和研究基础.
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双孢菇菇柄酵素发酵条件优化及其抗氧化活性分析
《食品工业科技 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：本文以双孢菇菇柄为原料,以植物乳杆菌接种量、糖添加量和发酵时间为主要因素,总酚含量为评判指标,在单因素实验基础上,通过响应面试验研究优化了双孢菇菇柄酵素发酵工艺,并对酵素产品发酵前后及在4℃和25℃贮藏5 d的其抗氧化能力进行了研究.结果表明,菇柄酵素发酵的最佳条件为植物乳杆菌接种量3%、糖添加量9.50%、发酵时间24 h,酵素产品总酚含量值可达2.20 mg/mL,与预测值2.19 mg/mL相符;研究发现发酵后菇柄酵素的总酚、抗坏血酸含量分别为2.20 mg/mL与44.40μg/mL,DPPH、ABTS自由基清除率、铁离子还原力和总抗氧化能力分别为51.93%、52.11%、0.70、28.09 U/mL,与发酵前比较有明显地提高.进一步对4℃和25℃贮藏条件下酵素的抗氧化活性分析表明,4℃贮藏的酵素,在贮藏0 d时DPPH、ABTS自由基清除能力、铁离子还原力和抗氧化能力均较强,在贮藏1 d后,酵素的抗氧化能力开始急剧下降,同时25℃条件下贮藏的酵素抗氧化能力显著低于4℃贮藏(P<0.05).
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温州市森林生态系统碳储量研究
《南京林业大学学报(自然科学版) 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】对浙江省温州市森林生态系统碳储量进行研究，摸清区域森林碳储量现状，为区域碳汇功能的评价提供基础数据。【方法】基于温州市2018年森林资源年度监测的马尾松林、其他松林、杉木林、柳杉林、柏木林、硬阔林、针叶混交林、阔叶混交林、针阔混交林、毛竹林等10种主要类型的森林资源监测数据，以及30个调查样地的实测数据，用平均生物量转换因子法计算不同森林类型的碳储量和碳密度，同时采用Pearson相关分析法对不同森林生态系统各组分之间有机碳储量进行相关性分析。【结果】2018年，温州市森林生态系统碳储量为81.70 Tg,其中乔木层18.46 Tg,灌草层1.55 Tg,凋落物层1.02 Tg和土壤层60.67 Tg,分别占生态系统碳储量的22.60%、1.89%、1.25%和74.26%。温州市的森林生态系统碳密度为123.81 t/hm~2,其中乔木层27.98 t/hm~2,灌草层2.34 t/hm~2,凋落物层1.54 t/hm~2和土壤层91.95 t/hm~2,土壤有机碳库为植被有机碳库的2.88倍。乔木层和土壤层有机碳储量是温州市森林生态系统的主要碳库，占全部森林生态系统有机碳储量的96.86%。乔木层碳密度最大的是柏木林，达到46.06 t/hm~2;阔叶混交林碳密度最低，为20.50 t/hm~2;土壤层中，碳密度最大的为柳杉林，达到136.97 t/hm~2;最小的为其他松木林，为49.38 t/hm~2。不同林分生态系统碳密度有一定差异，其中柳杉林碳密度最大（185.42 t/hm~2）,最低的是马尾松林（83.34 t/hm~2）。各组分碳储量相关性分析表明，乔木层与凋落物层碳储量呈显著正相关关系（P＜0.05）,土壤层碳储量与森林生态系统碳储量呈极显著相关关系（P＜0.01）,说明土壤层对整个生态系统碳储量的贡献最大。其他各组分之间相关关系均达不到显著水平。【结论】温州市森林生态系统碳密度略高于浙江省平均水平，但是低于全国平均水平，因此可以通过合理的森林经营管理措施提高森林碳密度。
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杨梅衰弱病根际土壤真菌的定量检测与分析
《植物病理学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：杨梅衰弱病在杨梅主产区发生严重，但其成因尚未明确。为明确根际土壤真菌与衰弱病的相关性，本研究以来自仙居、临海和兰溪3个不同地区的健康植株和衰弱植株的根际土壤为材料，利用实时荧光定量PCR技术，对14种与连作障碍相关的土壤真菌进行了定量检测与分析。结果表明：杨梅根际真菌群体的含量比较丰富；被孢霉属（Mortierella spp.）和轮枝孢属（Verticillium spp.）在发病植株根际的含量均显著高于健康植株，与杨梅衰弱病呈正相关关系；青霉菌属（Penicillium spp.）在发病植株根际的含量显著低于健康植株，与杨梅衰弱病呈负相关关系。本研究建立了杨梅根际土壤真菌的快速检测体系，明确了健康株和衰弱株根际真菌菌群的差异，为杨梅衰弱病的研究和病害防控提供参考。
关键词： 杨梅衰弱病 定量检测 Mortierella Verticillium Penicillium
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