科研产出
β_1-和β_2-微管蛋白基因在赤霉病菌抗多菌灵中的作用
《中国农业科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】揭示β1-微管蛋白基因(β1-tub)和β2-微管蛋白基因(β2-tub)在赤霉病菌(Gibberella zeae)对多菌灵的抗性过程中所起的作用。【方法】采用PCR克隆测序法测定Js449(EC50=7.911μg·m L-1)、Js462(EC50=6.515μg·m L-1)、Js484(EC50=5.031μg·m L-1)、Js506(EC50=8.455μg·m L-1)和Js519(EC50=6.280μg·m L-1)等5个多菌灵抗性菌株的α-、β1-、β2-、γ-tub序列,并与敏感菌株HG-1(EC50=0.552μg·m L-1)进行比对。采用实时荧光定量PCR(q PCR)测定β1-tub和β2-tub在多菌灵胁迫下的抗性菌株Js506中的相对表达量。构建β1-tub和β2-tub的超量表达载体,分别在HG-1中表达。运用split PCR获得含有潮霉素磷酸转移酶基因和目标基因的融合片段,并对Js506进行原生质体转化,通过同源重组获得β2-tub的敲除体和互补体。对菌株Js506、HG-1及其突变体分别进行多菌灵敏感性测定、菌落生长观察和致病力测定。【结果】基因比对结果表明,5个抗性菌株的α-、β1-、γ-tub基因序列与敏感菌株的一致。对β2-tub序列比对结果表明,Js449、Js462和Js506菌株的第167位氨基酸由苯丙氨酸(Phe)变为酪氨酸(Tyr)。Js484菌株的第200位氨基酸由苯丙氨酸(Phe)变为酪氨酸(Tyr)。Js519菌株的第198位氨基酸由谷氨酸(Glu)变为谷氨酰胺(Gln)。5μg·m L-1多菌灵能诱导Js506菌株的β1-tub表达量显著上调(P<0.05)。10μg·m L-1的多菌灵对Js506菌株的β2-tub表达量影响不显著。β1-tub的超量表达使HG-1突变体的EC50增加至2.839μg·m L-1,抗药性显著增强(P<0.05)。β2-tub超量表达突变体的抗性水平与野生型菌株无显著差异。对Js506菌株的β2-tub进行敲除试验,分别获得了2个转化体(△β2tub-Js506-1、△β2tubJs506-2),经潮霉素抗性筛选、PCR和Southern杂交验证,确认2个转化体均不含有β2-tub。与野生型菌株Js506相比,敲除体△β2tub-Js506-1(EC50=0.078μg·m L-1)和△β2tub-Js506-2(EC50=0.072μg·m L-1)对多菌灵均表现为超级敏感,且菌落生长变慢,致病力显著下降(P<0.05)。对△β2tub-Js506-1进行互补转化获得了2个互补体,β2tub-Js506-C1(EC50=7.521μg·m L-1)和β2tub-Js506-C2(EC50=7.243μg·m L-1),2个互补转化体均使敲除体△β2tubJs506-1基本恢复了抗性、菌落生长速率和致病力。【结论】5个赤霉病菌菌株对多菌灵的抗性与β2-tub的第167、198、200位密码子突变有关,与α-、β1-和γ-tub序列的突变无关。β1-tub在多菌灵胁迫下诱导表达,且β1-tub的超量表达能增强赤霉病菌对多菌灵的抗性。β2-tub是小麦赤霉病菌对多菌灵抗性所必需的,β1-tub和β2tub均能影响赤霉病菌对多菌灵的抗性。
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水稻抗稻瘟病基因Piz-t特异性分子标记开发及应用
《分子植物育种 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：Piz-t是一个具有广谱稻瘟病抗性的基因,对于选育稻瘟病抗性品种具有重要的应用价值,但其所在位点多个不同的等位基因限制了对它的筛选及利用。本研究通过将Piz-t不同等位基因及其上下游测序,比对鉴定到一个Piz-t特异性SNP位点(Piz-t为A,其余均为G)。在两对交叉引物PCR(PCR with confronting two-pair primers,PCR-CTPP)方法的基础上加以改进开发了一套鉴定该SNP的标记,利用该标记及待检测水稻品种基因组DNA进行PCR扩增,通过不同PCR产物条带大小将Piz-t与其它等位基因区分开。该方法简便快速、成本低廉,可广泛应用于分子标记辅助选择育种或者水稻种质资源Piz-t基因型鉴定。
关键词： 稻瘟病抗性 Pizt 两对交叉引物PCR 分子标记辅助选择
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大豆竞争替代紫茎泽兰的种植模式研究
《中国油料作物学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为明确大豆与紫茎泽兰的种间竞争关系,探索紫茎泽兰替代控制的途径和策略,采用田间试验方法,研究土壤翻耕方式、紫茎泽兰的割除方式和大豆的种植密度等栽培方法对大豆和紫茎泽兰的竞争效应的影响,定量分析两者的株高和密度、对光照和水肥的竞争能力以及大豆的产量。结果表明:不翻耕、在紫茎泽兰空隙间点播大豆的处理区,紫茎泽兰为优势种群,大豆的生长和产量受到明显抑制。不翻耕、刈割紫茎泽兰后点播大豆的处理区,大豆为优势种群,对光照的竞争能力强,紫茎泽兰的发生密度和株高被显著抑制,对水肥的吸收显著降低,且随着大豆种植密度的增加,大豆产量显著增加,从2 113.66kg/hm2增加至2 885.62kg/hm2。旋耕处理区,紫茎泽兰的防除效果达到了100%,大豆的产量达到3 828.02~4 007.87kg/hm2。通过合理的栽培措施,大豆的竞争优势很强,可以有效替代紫茎泽兰,且产生较高的经济效益。
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CRISPR/Cas9技术制备猪肌肉生长抑制素基因敲除细胞
《基因组学与应用生物学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：采用CRISPR/Cas9技术制备质粒HRX-2MCS和PX330,两种质粒转染湖北白猪胎儿成纤维细胞,G418筛选抗性细胞株。收集培养细胞提取总DNA,分子定位PCR法检测绿色荧光蛋白(GFP)基因在猪肌肉生长抑制素(MSTN)基因外显子上的定位整合情况,得到T1靶位点整合细胞5株和T3靶位点整合细胞3株。Q-PCR定量分析结果表明3108号阳性细胞株MSTN基因m RNA表达量减少50%,实验获得的基因敲除细胞可以用于体细胞核移植法制备MSTN基因敲除猪的研究。
关键词： CRISPR/Cas9 肌肉生长抑制素 基因敲除 表达
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石窑当归干物质积累和养分吸收规律研究
《中药材 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：目的:研究窑归干物质积累和养分吸收规律,从而为窑归合理施肥提供理论依据。方法:在窑归的不同生长时期,采集样品,称取地上部分(茎叶)和地下部分(根部)的鲜重、干重并测定其氮、磷、钾含量。结果:随播种后天数的增加,窑归茎叶、根部、全株的干物质积累和养分吸收均可用Logistic方程进行拟合,拟合效果良好。窑归出苗后茎叶与根部的干物质积累和养分吸收均十分缓慢,7月下旬开始茎叶的干物质积累和养分吸收加快,8月上中旬根部养分吸收加快,9月下旬根部干物质积累速度达到最快,10月上旬窑归茎叶和根部干物质积累和养分吸收速度均开始大幅度变缓,10月中旬进入窑归采收期。结论:窑归种植中,应该以少量磷肥为基肥,以氮肥为追肥分次追施为主。
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麦角甾醇对S180荷瘤小鼠肿瘤血管生成和Bax、Bcl-2表达的影响
《营养学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：目的探讨麦角甾醇对S180荷瘤小鼠肿瘤血管和Bax、Bcl-2蛋白的影响。方法建立S180荷瘤小鼠模型,将50只荷瘤小鼠随机等量分为模型对照组、环磷酰胺组(CTX),麦角甾醇高、中、低剂量组,雌雄各半,连续给药21d天后颈椎脱臼处死。计算胸腺指数、脾脏指数和抑瘤率;硝酸还原酶法测定肝脏中一氧化氮(NO)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定肿瘤组织中小鼠血管内皮生长因子A(VEGF-A)含量;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果与模型对照组相比,环磷酰胺组、高、中、低剂量组抑瘤率分别是53.96%、41.64%、29.90%、19.52%,均有显著性差异(P<0.05),高、中、低剂量组胸腺指数、脾脏指数均明显增大(P<0.05);与模型对照组相比,实验组(高、中、低剂量组)中NO含量和小鼠血管内皮生长因子A(VEGF-A)表达水平明显降低(P<0.05),且均能明显下调Bcl-2表达水平(P<0.05),明显上调Bax表达水平(P<0.05),Bax/Bcl-2比例明显增大(P<0.05)。与环磷酰胺组相比,实验组NO含量和VEGF-A水平、Bcl-2、Bax表达水平均有统计学差异(P<0.05)。结论香菇提取物麦角甾醇具有抑瘤作用,且与剂量有关,其可能抗肿瘤机制是抑制肿瘤血管生成和调控Bax、Bcl-2蛋白表达水平。
关键词： 麦角甾醇 S180荷瘤小鼠 血管内皮生长因子A Bax Bcl-2
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一种适合普通小麦转基因检测的内标准基因PSG719
《农业生物技术学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：利用定量PCR检测和分析转基因作物外源基因时,首先需要一种具有种属特异性、品种间不显示等位基因变化和较低拷贝数的内标准基因作为对照。本研究通过生物信息学方法和现有文献,筛选到小麦PSG719基因(Gen Bank登录号:FJ497025.1)具有特异性强以及拷贝数低的特点;基于该基因特异区段设计的引物,对包括硬粒小麦在内的16个物种的定性PCR鉴定和16个不同生态区小麦品种的定量PCR检测结果表明,该基因具有普通小麦的特异性和品种间的稳定性。该基因的定性PCR检测极限为2个拷贝的普通小麦基因组;定量PCR检测极限为2个拷贝,定量极限为5个拷贝;这些极限值在已有的小麦内标准基因中均处于最低水平,证明该基因PCR反应的灵敏度较高,可以对小麦转基因成分含量较低的样品进行检测和定量。以经梯度稀释的小麦基因组DNA为模板,定量PCR标准曲线斜率-3.395,相关系数R2为0.999,表明该基因的定量PCR体系适用转基因小麦样品的定量分析。这些结果表明,普通小麦内标准基因PSG719是一个理想的内标准基因,可以用于转基因小麦的定性和定量检测。本研究为将来转基因小麦标识制度的建立提供了一种可靠的定量检测体系。
关键词： 普通小麦 内标准基因 PSG719 定量PCR 转基因小麦
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石灰与秸秆配施对冷浸田水稻产量与土壤特性的影响
《华中农业大学学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：以湖北省典型冷浸田为研究对象,研究石灰与秸秆配施对水稻产量与土壤特性的影响。结果表明,与对照处理(L0+S0)相比,石灰与秸秆的配施能显著提高水稻的产量、穗粒数、结实率和千粒重,增幅分别为46.0%、9.4%、6.7%和2.6%,N、P2O5、K2O的吸收量分别提高47.9%、50.3%和48.2%。与对照处理相比,石灰与秸秆配施显著降低土壤活性还原性物质总量和Fe2+含量,降幅分别为48.3%和38.1%,土壤氧化还原电位(Eh)显著提高48.7%。石灰用量1 500~2 250kg/hm2、秸秆用量4 500kg/hm2是较理想的配施模式。
关键词： 冷浸田 石灰 秸秆 产量 还原性物质 氧化还原电位
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响应面法优化酶法制备杏鲍菇蛋白及其营养评价
《食品科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为确定纤维素酶法提取杏鲍菇蛋白的最佳工艺,并评价所得蛋白的营养价值,在单因素试验的基础上,选择液料比、加酶量(以原料干粉计)、p H值和酶作用温度为影响因素,以蛋白得率为响应指标,利用Box-Behnken进行响应面分析,利用氨基酸系数法来评价杏鲍菇蛋白的营养价值。结果表明:杏鲍菇蛋白提取的最佳工艺为:液料比35∶1(V/m)、加酶量2.6%、p H 7.2、酶解温度60℃,此条件下的杏鲍菇蛋白得率达10.68%;按此方法所得的杏鲍菇蛋白的必需氨基酸与非必需氨基酸比值(essential amino acids/nonessentia amino acids,EAA/NEAA)为0.65,必需氨基酸与总氨基酸比值(EAA/total amino acids,TAA)为0.40,氨基酸比值系数分(score of ratio coefficient,SRC)为75.02。该工艺操作简单,所得蛋白品质较高,可用于工业生产杏鲍菇蛋白产品。
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抛荒对冷浸稻田土壤团聚体及有机碳稳定性的影响
《中国生态农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：冷浸稻田是长江流域重要的低产稻田类型之一,近年来抛荒严重,而抛荒对冷浸稻田土壤团聚体的影响并不清楚。本研究以连年种植的冷浸稻田(CWC)、抛荒3年的冷浸稻田(CWA3)和抛荒6年的冷浸稻田(CWA6)为对象,分析抛荒后冷浸稻田土壤团聚体特征以及有机碳稳定性,以期为准确评估抛荒对长期淹水土壤的结构和有机碳的影响提供数据支持。结果表明,不论是0~25 cm土层还是25~50 cm土层,冷浸稻田土壤<53μm粒级团聚体占总团聚体比例均超过40%;0~25 cm土层土壤>250μm团聚体比例超过35%;53~250μm粒级团聚体比例低于20%。抛荒使0~25 cm土层<53μm粒级团聚体占总团聚体比例显著增加,53~250μm粒级比例显著降低。在0~25 cm土层,抛荒使有机碳活性指数Ⅰ(LIc-Ⅰ)在<53μm粒级和>250μm粒级上升高,有机碳活性指数Ⅱ(LIc-Ⅱ)在53~250μm和>250μm粒级上降低;而有机碳难降解指数(RIc)在<53μm和53~250μm粒级上降低。土壤总有机碳随抛荒时间延长而增加。
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