科研产出
甜瓜CmRDR基因家族的鉴定及其对CGMMV侵染的表达分析
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：RNA依赖性RNA聚合酶(RDRs)是RNA沉默途径中一类重要的蛋白,能够以单链核糖核酸(ssRNA)为模板合成双链核糖核酸(dsRNAs),启动新一轮的RNA沉默.众所周知,RDR基因在植物抵御病毒侵染中发挥重要的作用,而甜瓜作为一种易受到病害侵染的经济作物,其RDR基因的鉴定尚未见报道.因此,本研究利用生物信息学手段,在全基因组水平对甜瓜RDR基因进行了鉴定,分析其序列特征、亚细胞定位、进化关系和启动子上的逆境和激素响应元件.此外,利用RT-qPCR对甜瓜CmRDR基因的表达特征进行了分析,结果发现,接种黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)后,大部分甜瓜CmRDR基因的表达显著下调.本研究首次鉴定了甜瓜RDRs家族基因的特性,初步揭示了 CmRDR基因在CGMMV病毒响应中的功能,为后期甜瓜抗病育种提供了一定的理论依据.
关键词： 甜瓜 RNA依赖性RNA聚合酶(RDR) 黄瓜绿斑驳花叶病毒 基因表达 进化分析
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副猪嗜血杆菌CDT三顺反子的表达、组装及生物学活性
《中国兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：副猪嗜血杆菌是猪的常见病原菌，以异源三聚体形式分泌到胞外环境的细胞致死性膨胀毒素（CDT）是该菌重要的毒力因子，制备完整的重组CDT对于其功能研究至关重要。本研究构建了可用于同时表达CDT 3个亚基的三顺反子重组质粒，优化了完整毒素三聚体的体外组装及纯化方法，并验证了重组三聚体毒素的生物学活性。结果显示，CDT 3个亚基以CdtA/CdtB/CdtC-his方式组合时，按0.1 g/L等体积混合，在PBS中以尿素浓度梯度透析时组装效果最好。构建的重组三顺反子质粒在大肠杆菌中可以同时表达出比例相当的3个CDT亚基，并且均以包涵体形式存在，经包涵体离心粗纯化后，即可用于重组三聚体CDT的组装。组装的三聚体CDT经亲和层析及分子筛层析纯化，得到高纯度的完整毒素。完整毒素可以引起Marc145细胞体积明显膨胀，且分裂周期停滞于G2/M期的细胞比例显著增加。结果表明，本研究建立了一种简单有效的副猪嗜血杆菌重组CDT完整毒素制备方法，所制备的CDT具有良好的生物学活性。
关键词： 副猪嗜血杆菌 细胞致死性膨胀毒素 三顺反子质粒 完整毒素
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QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱分析鱼中13种全氟及多氟烷基化合物
《色谱 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：全氟及多氟烷基化合物（PFASs）广泛存在于全球环境水体中，鱼类等水产品的摄入可能是人类接触PFASs的重要来源，因此亟需建立鱼类产品中PFASs的高效、准确分析技术。本研究以磁性纳米材料为净化吸附剂，基于QuEChERS方法，建立了鱼类产品中13种PFASs的超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）分析方法。实验分别考察了萃取溶剂类型、净化吸附剂(Fe3O4-TiO2和N-丙基乙二胺（PSA）)用量对PFASs回收率的影响，确定了最佳样品前处理条件。采用Luna Omega C18色谱柱（100 mm×2.1 mm, 1.6μm）进行分离，利用电喷雾电离（ESI）源，在多反应监测（MRM）模式下采集质谱数据，内标法定量。在优化的实验条件下，13种PFASs在0.01～50μg/L内具有良好的线性关系，相关系数（R）≥0.997 3,检出限为0.001～0.023μg/L,定量限为0.003～0.078μg/L。在低、中、高3个加标水平（0.5、10、100μg/kg）下，13种PFASs的加标回收率为78.1%～118%,日内精密度为0.2%～11.1%,日间精密度为0.8%～8.7%。将该方法应用于实际样品分析，所有鱼样品中均有PFASs检出，分别为全氟辛酸、全氟辛基磺酸、全氟十一烷酸、全氟十二烷酸和全氟十三烷酸，各自的检出总含量为0.327～1.728μg/kg。本方法前处理过程简单且灵敏度高，适用于鱼类产品中PFASs的分析。
关键词： 磁性吸附剂 超高效液相色谱-串联质谱 全氟及多氟烷基化合物 鱼
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磁性"一步法"-液相色谱-串联质谱法测定水产品中28种有机磷农药残留
《分析化学 》 2024 EI SCI 北大核心 CSCD
摘要：基于磁性纳米材料建立了磁性"一步法"前处理技术,结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法,实现了水产品中28种有机磷农药残留的精准定量分析.针对水产品富含蛋白质、脂肪和脂肪酸的特点,选择磁性聚合物(聚二乙烯基苯-吡咯烷酮,Fe3O4-PLS)为净化剂,通过疏水作用、氢键和π-π键等相互协同作用高效吸附基质干扰组分,净化样品.优化了萃取溶剂类型及用量、盐析与除水剂、Fe3O4-PLS和C18 用量等实验条件.在最佳样品前处理条件下,28种有机磷农药的方法检出限(MLOD)为0.03~0.85 μg/kg,方法定量限(MLOQ)为0.50~2.00 μg/kg;不同添加浓度水平下目标物的平均回收率为60.1%~119.0%,相对标准偏差(RSDs)为0.8%~19.0%,方法的灵敏度和准确度高.与QuEChERS方法对比,本方法在萃取溶剂、盐析与除水剂和净化剂用量以及分析效率等方面均展现出明显的优势.采用本方法检测不同种类水产品中有机磷农药残留,结果表明,本方法具有良好的实用性,可为水产品中有机磷农药残留的快速分析提供新的方法依据.
关键词： Fe3O4-PLS 磁性一步法 液相色谱-串联质谱 水产品 有机磷农药
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高光效甘薯品种浙薯86的选育、产量与品质特征
《浙江农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：塑造理想株型是实现作物产量突破和高光效育种的基础和重要途径。采用半直立、优质双亲——淀粉型品种浙薯20和食用型地方品种岳冬进行杂交选育，以理想株型、高产、优质为主要选择目标，育成高光效品种浙薯86。该品种具有理想株型的形态特征，短蔓，基部分枝数多，由较多的直立次生分枝构成半直立株型，垄上株高优势明显，形成较高的冠层空间，叶面积指数高，七裂中等深缺刻叶形，叶片较小而厚，上部叶茎叶夹角小，叶势上冲明显，单株结薯数较多，光合效率和经济系数高，表现出优良的早熟性和丰产性。在浙江省和长江中下游甘薯品种区试中，浙薯86每年的鲜薯产量均居所有参试品种之首，鲜薯、薯干和淀粉产量均比对照徐薯22增产30%左右。浙薯86的块根β-淀粉酶活性高，蒸熟后麦芽糖和可溶性糖含量高，食味优，淀粉率较高，且淀粉的峰值黏度、崩解值和回生值高，糊化温度低，适合用于鲜食、薯脯和淀粉加工。浙薯86适应性广，抗蔓割病，中抗黑斑病、根腐病、Ⅱ型薯瘟病，感茎线虫病、Ⅰ型薯瘟病和基腐病。综上，浙薯86是一个优质、高产、多用途的高光效甘薯品种，适宜在长江中下游地区种植，不宜在浙东南基腐病重疫区推广。
关键词： 甘薯 高光效育种 理想株型 高产 淀粉特性 适应性
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牛肉源热杀索丝菌的致腐差异和比较基因组学研究
《中国食品学报 》 2024 EI 北大核心 CSCD
摘要：为探究牛肉中热杀索丝菌的致腐能力和致腐基因分布特点,经分离纯化、形态观察和PCR鉴定,获得29株热杀索丝菌.将其接种于4℃牛肉汁中,测定挥发性盐基氮(TVB-N)值和乙偶姻指标,评价分离菌株的致腐能力.采用比较基因组学技术分析热杀索丝菌强、弱腐败株基因特点.结果表明,29株热杀索丝菌分离株的TVB-N含量形成较慢,仅有2株菌在第9天超过11.5 mg N/100 g,而产乙偶姻能力强,且有明显差异,其中菌株BT27和BT25含量分别为139.3μg/mL和59.5μg/mL.测定强、弱致腐菌株BT27和BT25的全基因组序列,结果发现,热杀索丝菌基因组中存在大量参与碳水化合物代谢的基因,其中编码糖苷水解酶的基因数量最多,糖基转移酶基因次之.比较基因组学显示,强致腐株BT27被注释到碳水化合物代谢和相应酶的编码基因数量均多于弱致腐株BT25,而两者在编码氨基酸代谢的基因数量相近.研究表明,热杀索丝菌致腐性强、弱与编码碳水化合物代谢基因数量密切相关,研究从基因层面为阐明肉源微生物的致腐机理奠定了良好的基础.
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稻瘟病菌MoZds1的功能分析
《浙江农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：由稻瘟病菌引起的水稻稻瘟病对中国水稻产量造成了严重威胁,开展稻瘟病菌功能基因的研究有利于更好地了解稻瘟病菌致病机制,为稻瘟病的防治奠定基础.研究前期通过遗传学手段在稻瘟病菌中筛选到一个酵母ZDS1 同源基因 MoZDS1.通过基因敲除方法成功获得基因缺失突变体 ΔMozds1,发现缺失MoZDS1 严重影响稻瘟病菌营养生长.为探究MoZds1 在稻瘟病菌中的具体功能,通过生物信息学分析、生长测定、产孢量分析、细胞壁胁迫分析以及自噬流检测等方法,分析了MoZds1 在维持营养生长、产孢、应对细胞壁胁迫以及细胞自噬方面的作用.结果表明,MoZds1 正调控稻瘟病菌菌丝生长,负调控孢子的形成.此外,MoZds1 参与细胞壁完整性途径并调控孢子内糖原的降解速率,然而,MoZds1 的缺失未表现出对细胞自噬途径的显著影响.该研究对稻瘟病菌MoZds1 的功能进行了系统地分析,或为后续更深入研究MoZds1 的功能提供了理论基础.
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PEX10基因缺失对兔须癣毛癣菌生长及致病性的抑制作用
《农业生物技术学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：须癣毛癣菌（Trichophyton mentagrophytes）又称石膏样毛癣菌，对家兔（Oryctolagus cuniculus）具有严重危害性。过氧化物酶体生物合成因子10（peroxisomal biogenesis factor 10, PEX10）与植物病原真菌的药物敏感性具有密切关系，但是其影响动物病原真菌如须癣毛癣菌生长及致病性的机制尚不明晰。本研究首先构建PEX10基因敲除载体，通过根癌农杆菌介导的遗传转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, AtMT）和转化子筛选，获得须癣毛癣菌PEX10基因敲除株；生长特性等表型分析显示，PEX10基因敲除株的生长速率显著减慢（P＜0.01），对盐酸小檗碱的敏感性显著提高（P＜0.001），侵染兔皮肤组织的能力减弱，致病性降低。本研究结果为真菌PEX10基因功能的研究和兔须癣毛癣菌病的防治提供参考。
关键词： 须癣毛癣菌 过氧化物酶体生物合成因子10（PEX10） 过氧化物酶体 耐药性
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基于CRISPR/Cas的生物传感器在食源性病原菌检测中的应用进展
《分析化学 》 2024 EI SCI 北大核心 CSCD
摘要：食源性病原菌严重威胁食品安全及消费者的健康，因此，对食源性病原菌快速、准确的检测方法对保障食品安全尤为重要。规则成簇的短回文重复序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR）/CRISPR相关系统（CRISPR-associated systems, Cas）生物传感器是在引导核糖核酸（RNA）的作用下，使Cas蛋白与RNA形成RNA复合体，并对靶标基因进行特异性识别，从而将靶标信号转化为可检测的物理和化学信号。CRISPR/Cas生物传感器具有特异性好、可编程以及使用简便等优势，在病原菌检测领域具有广阔的应用前景。本文根据Cas蛋白的种类和作用机制不同，分别介绍了不同CRISPR/Cas系统的作用原理和特点，概述了基于不同CRISPR/Cas的生物传感的信号识别、信号放大、信号输出策略及其在食源性病原菌检测中的应用进展，讨论了基于CRISPR/Cas的多重生物传感器的构建原理及其在多病原菌同时检测中的应用，分析了基于CRISPR/Cas的生物传感器在病原菌快速检测中面临的挑战及未来的发展趋势。
关键词： 食源性病原菌 CRISPR/Cas 生物传感器 评述
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15种杀菌剂对异色瓢虫的影响
《植物保护 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：异色瓢虫Harmonia axyridis（Pallas）是一种重要的天敌昆虫，在田间应用时常会受到施用药剂的影响。为了解浙江地区常用杀菌剂对异色瓢虫的影响，本文选用该地区田间15种常用杀菌剂，采用喷雾法，在实验室条件下测定了其对异色瓢虫2龄和4龄幼虫、蛹以及成虫的影响。结果显示：不同杀菌剂对异色瓢虫不同虫态有不同程度的影响，但大多数杀菌剂对异色瓢虫相对安全。60%唑醚·代森联WG、50%异菌脲SC、99%矿物油EC、43%氟菌·肟菌酯SC、42.4%唑醚·氟酰胺SC对异色瓢虫2龄幼虫影响较大，其中42.4%唑醚·氟酰胺SC对异色瓢虫2龄幼虫影响最大，平均校正死亡率最高达到93.22%。30%氧氯化铜SC、1亿cfu/g枯草芽孢杆菌CG、0.5%几丁聚糖AS、42.4%唑醚·氟酰胺SC、40%噻唑锌SC对异色瓢虫蛹有一定程度的影响，其中40%噻唑锌SC对异色瓢虫蛹的影响最大，平均校正死亡率达到31.04%。试验的15种杀菌剂对异色瓢虫4龄幼虫和成虫相对安全，平均校正死亡率皆小于21%。从安全性考虑，当异色瓢虫处于2龄幼虫阶段时，不建议使用60%唑醚·代森联WG、50%异菌脲SC、99%矿物油EC、43%氟菌·肟菌酯SC、42.4%唑醚·氟酰胺SC。当异色瓢虫处于4龄幼虫、蛹和成虫时，15种供试杀菌剂都比较安全，使用时可选用对其影响较小的杀菌剂。
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