科研产出
莲雾转录组SSR信息分析及其分子标记开发
《园艺学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：对莲雾[Syzygium samarangense(Bl.)Merr.et Perry]开展转录组测序分析,共获得87 538条Unigene。利用MISA软件搜索1 kb以上的21 153条Unigene,共检测出11 641个SSR位点,分布于8 115条Unigene中,出现频率为55.03%,平均分布距离为4.08 kb。优势重复基序为单核苷酸、二核苷酸和三核苷酸,分别占总SSR的43.44%、30.98%和24.38%。二核苷酸重复基元中以AG/CT为优势重复基元,占总位点的26.99%,三核苷酸重复基元以CCG/CGG为主。利用Primer 3.0共设计出25 734对SSR引物。从94对有效扩增引物中随机选择35对引物,对30个莲雾种质进行多态性验证分析,其中25对(占71.43%)引物表现稳定可重复的多态性。利用UPGMA作图,将30份供试材料分为2类。利用莲雾转录组数据进行SSR标记开发能获得较高频率的SSR位点,且类型丰富,可为莲雾遗传多样性分析和遗传图谱构建提供更丰富可靠的标记选择。
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莲雾实时荧光定量PCR内参基因的筛选和验证
《果树学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】莲雾果实品质不稳定和冬季低温寒害是生产上的两大问题,筛选稳定可靠的内参基因,以便开展莲雾品质形成和低温胁迫响应分子机制研究。【方法】以‘紫红’‘黑珍珠’‘翡翠’3个莲雾品种为材料,利用qRT-PCR检测7个候选内参基因ACT-7、GAPDH、UBQ、α-TUB、CYP20-1、EF-2和APRT-5在果实发育和低温胁迫时的表达水平,通过geNorm、NormFinder、BestKeeper和RefFinder软件进行基因稳定性评价。【结果】不同软件分析结果不同,geNorm、NormFinder和RefFinder结果相似,果肉发育过程、果皮发育过程、低温胁迫下表达最稳定的内参基因分别是ACT-7、α-TUB和CYP20-1,BestKeeper则显示UBQ为表达最稳定的基因。用筛选的内参基因α-TUB和UBQ分析莲雾花青苷合成途径中F3H基因的表达,2者表达规律较一致。【结论】莲雾果肉发育过程、果皮发育过程、低温胁迫下最适的内参基因数分别为4个(ACT-7、GAPDH、UBQ、α-TUB)、2个(α-TUB、UBQ)和2个(CYP20-1、UBQ)。
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硬孔灵芝和赤芝孢子油的脂肪酸、角鲨烯及麦角甾醇类的比较
《食用菌学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：采用超临界CO_2流体萃取技术分别从硬孔灵芝(Ganoderma duropora)和赤芝(G.lucidum)孢子粉中萃取分离孢子油,采用气相色谱(GC)法测定孢子油(萃取条件相同)的脂肪酸成分和角鲨烯含量,用气相色谱-质谱联用选择性离子检测(GC-MS/SIM)模式测定麦角甾醇类成分和总含量。结果表明:两种孢子油中脂肪酸成分组成相似,在不同分离条件(分离I和II)下获得的样品(分别标记分离I和II得到的硬孔灵芝样品为A和B,赤芝样品为C和D)均由油酸、亚油酸、硬脂酸和棕榈酸组成,4种脂肪酸在硬孔灵芝中占检出成分的95.1%～96.3%(质量分数),在赤芝中占97.0%～97.9%(质量分数),其中硬孔灵芝A和B中两种不饱和脂肪酸(油酸和亚油酸)的相对含量分别合计为71.2%和73.1%,略低于赤芝(C和D分别合计为76.8%和77.7%);两种孢子油中均检测出开链三萜——角鲨烯,其在硬孔灵芝孢子油A和B中含量分别为0.40mg/g和0.44mg/g,在赤芝孢子油C和D中分别为0.41mg/g和0.43mg/g;两种孢子油中也均检测出至少4种麦角甾醇类成分,组成相似,其中硬孔灵芝孢子油A和B中含量分别合计为1.9mg/g和2.9mg/g,与赤芝孢子油(C和D中分别为2.4mg/g和2.7mg/g)中相近。
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一株酸奶发酵嗜热链球菌的筛选及特性研究
《西北农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为获得能发酵鲜奶产生酸奶的嗜热链球菌菌种,采用50℃高温及MC选择性培养基为筛选条件,从自然发酵的酸奶中分离、筛选菌株,采用形态学观察、生理生化特征鉴定、16SrDNA基因序列测定及系统发育树同源性分析进行鉴定,并对该菌发酵酸奶特性及微生物学特性进行研究。筛选出一株能发酵产生酸奶的菌株LCM46,鉴定为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)。该菌以鲜奶为基质,在42℃、发酵11h可产生风味俱佳、口感脆嫩的凝固型酸奶,酸度为(80.77±0.17)°T,菌落总数(11.71±0.20)×108 cfu/mL。该菌对数生长期为2~12h,最适生长基质为牛乳、温度40℃、pH 6.0,适合生长温度为10~60℃、pH 4.3~7.5,耐受pH临界值为3.5,自凝集率为19.28%,对大肠杆菌DH5α凝集率为12.32%。该菌有望与高黏附型菌种混合发酵提高发酵乳品质及口感。
关键词： 酸奶 16SrDNA 嗜热链球菌 筛选 微生物学特性
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福建省水稻稻纵卷叶螟田间种群对6种杀虫剂的敏感性测定
《南方农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】测定6种杀虫剂对福建省稻纵卷叶螟田间种群的毒力及田间防治效果,为稻纵卷叶螟持续控制提供科学依据。【方法】采用浸叶法测定氯虫苯甲酰胺、乙基多杀菌素、茚虫威、阿维菌素、甲氨基阿维菌素和毒死蜱对福建省3个不同地理种群(福建福州、闽侯和沙县)稻纵卷叶螟3龄幼虫的室内毒力;在田间稻纵卷叶螟1~2龄幼虫高峰期,采用田间茎叶喷雾法开展氯虫苯甲酰胺、乙基多杀菌素、茚虫威、阿维菌素、甲氨基阿维菌素和毒死蜱等6种杀虫剂对稻纵卷叶螟的田间防治效果试验。【结果】室内毒力测定结果显示,3个地理种群稻纵卷叶螟对同一种杀虫剂的敏感性均以福州种群最敏感,其次是闽侯和沙县种群;6种供试杀虫剂对同一种群稻纵卷叶螟3龄幼虫的毒力排序为:阿维菌素>乙基多杀菌素>甲氨基阿维菌素>氯虫苯甲酰胺>茚虫威>毒死蜱。在试验设计剂量范围内,6种供试药剂对稻纵卷叶螟均具有良好的田间控制作用,药后14 d的保叶效果为80.02%~88.81%,杀虫效果为82.99%~95.38%。【结论】福建省稻纵卷叶螟尚未对氯虫苯甲酰胺、乙基多杀菌素、茚虫威、阿维菌素、甲氨基阿维菌素和毒死蜱等6种杀虫剂产生明显的抗药性,6种药剂可有效控制稻纵卷叶螟的为害。
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设施番茄连作障碍土壤修复及其对青枯病害的防治效果
《中国生物防治学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：连作障碍的土壤修复是世界性难题。本研究利用土壤微生态修复剂结合青枯病植物疫苗菌剂来改良土壤和预防青枯病发生。在连作7年的番茄地,设3种处理,处理1为添加量60 t/hm~2的土壤微生态修复剂和植物疫苗100倍稀释液,处理2为添加量30 t/hm~2的土壤微生态修复剂和植物疫苗100倍稀释液,CK为不添加土壤微生态修复剂和植物疫苗,研究不同处理对连作番茄土壤养分、土壤酶活性、植株生长特性及病害防效的影响。结果表明,土壤微生态修复剂2种不同添加量处理的番茄土壤有机质、全氮、全磷和交换性钙含量均显著高于对照,而全钾含量显著低于对照;两种不同添加量处理的番茄土壤过氧化氢酶、脲酶、蔗糖酶和酸性磷酸酶活性均显著高于对照,添加量为30 t/hm~2处理的土壤各酶活性(酸性磷酸酶除外)大于添加量为60 t/hm~2处理的土壤;添加30 t/hm~2处理的单果重量(113.82 g)显著高于添加量60 t/hm~2处理(104.07 g)和对照处理(104.99 g)(P<0.05),其对番茄青枯病防效达91.87%,大于添加量为60 t/hm~2处理的防效(55.34%)。
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不同处理对刺葡萄愈伤组织花青素和原花青素生物合成的影响
《热带作物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以刺葡萄2个同质不同型的愈伤组织细胞系为材料,研究不同处理因子对其花青素和原花青素合成能力的影响。试验结果表明,刺葡萄DLR细胞系具有高产花青素和原花青素的能力,在培养至45 d时,其花青素与原花青素的含量均达到最高值,分别为113.85μg/g(FW)和3 562.95μg/g(FW);低温、高温、肉桂酸、壳聚糖、紫外线、黑暗和KT等因子,对DLR细胞系花青素和原花青素的累积表现出不同的效应;其中,4℃低温处理下,DLR细胞花青素的积累效果最佳,比对照提高了2.14倍;壳聚糖处理下,原花青素积累效果最佳,是对照的2.84倍。刺葡萄DLW细胞系不具有或极低的花青素和原花青素合成能力,处理因子调控对其作用效果不明显。本研究的结论为进一步进行刺葡萄细胞花青素和原花青素合成调控奠定了基础。
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米良1号猕猴桃漆酶基因的克隆与表达分析
《农业生物技术学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：漆酶(laccases)为含铜的糖蛋白,通过保守结构域上铜离子的氧化还原催化各种各样的底物,进而参与植物的各种生理生化进程,如木质素的合成、铁代谢、类黄酮的合成、伤口愈合和抗逆响应等过程。但在果实采后贮藏中的作用未见报道。为了研究漆酶基因在猕猴桃(Actinidia chinensis var.deliciosa)果实贮藏过程中的功能,本研究采用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和RACE-PCR法从米良1号猕猴桃(Actinidia chinensis var.deliciosa'Miliang-1')中克隆到2条漆酶基因,分别命名为AdLAC3和AdLAC7。AdLAC3全长序列为2 594 bp,开放阅读框为2205 bp,编码734个氨基酸,登录号为MF405444;AdLAC7全长序列为2 126 bp,开放阅读框为1 695 bp,编码564个氨基酸,登录号为MF405447。此外,还获得了AdLAC3基因的2条可变剪接转录本(AdLAC3-variant1和AdLAC3-variant2),其中AdLAC3-variant1的登录号为MF405445,AdLAC3-variant2的登录号为MF405446。结构域分析显示,AdLAC3和AdLAC7蛋白均具有植物漆酶的3个典型铜离子结合域(Cu-oxidase_3,Cu-oxidase和Cu-oxidase_2),但在系统进化分析中,两种蛋白聚在不同的进化分支,序列差异较大,可能源自不同的基因祖先。AdLAC3和AdLAC7基因均由5个内含子和6个外显子组成。不同组织部位的定量表达分析表明,AdLAC3在根部的表达量最高,其次为茎和叶中,在果实中基本不表达。类似地,AdLAC7基因也在根中的表达量最高,在茎中的表达量次之,在叶和果实中基本不表达。对果实在不同贮藏条件下的qRT-PCR分析结果表明,AdLAC3基因在25℃、4℃和ABA处理的果实中都被显著诱导表达,而AdLAC7基因仅在ABA处理的果实中显著上调表达,说明AdLAC3和AdLAC7基因在猕猴桃果实贮藏中发挥的具体功能不同。本研究为猕猴桃的采后贮藏和品质调控研究提供了新依据。
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丝瓜多聚泛素基因(LcUBQ)的克隆及表达分析
《中国细胞生物学学报 》 2018 CSCD
摘要：泛素是一种逆境响应蛋白,所介导的泛素/26S蛋白酶体途径在植物适应逆境过程中发挥重要作用。为探究丝瓜(Luffa cylindrica)泛素基因的功能,采用RT-PCR(reverse transcription-PCR)和RACE(rapid-amplification of cDNA ends)技术从丝瓜中克隆到多聚泛素基因(polyubiquitin gene),命名为LcUBQ(Gen Bank登录号:KR349345),该基因cDNA全长1 579 bp,包含一个1 371 bp的完整开放阅读框,编码457个氨基酸组成的蛋白质,预测其分子量和等电点分别为51.26 kDa和7.05,未发现信号肽和跨膜结构,WoLF PSORT预测其亚细胞定位于细胞质,二级结构中α-螺旋、延伸带和无规卷曲各占24.73%、22.54%和52.74%。进化树分析表明,丝瓜LcUBQ蛋白质与黄瓜、甜瓜等葫芦科植物亲缘关系较近。荧光定量PCR分析发现,LcUBQ基因在丝瓜的不同组织皆有表达,其中在根和叶中表达量最低,高温(40°C)、低温(4°C)以及弱光[20μmol/(m~2?s)]均能诱导叶片中LcUBQ基因的高表达,尤其是低温胁迫。低温胁迫下,LcUBQ基因的表达量呈现先升高再下降的趋势,与其对应的泛素水平的变化基本一致,并且无论是低温或弱光处理,LcUBQ基因的表达量及对应的泛素水平均在前2 h增加得最为明显,推测LcUBQ基因可能参与丝瓜的早期胁迫信号转导及低温、弱光胁迫应答过程。
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