科研产出
水稻用药策略风险评估与安全性分析
《南京农业大学学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：[目的]本文旨在对水稻全生育期使用的农药进行膳食暴露风险评估和土壤生态环境影响分析,以评估农药使用策略的合理性。[方法]对江苏省、江西省单季稻-双季稻种植区的农药使用情况及其在稻米和土壤的残留情况进行长期调查,对减施农药示范区和常规施药对照区的稻米和不同生育期（分蘖期、抽穗期和收获期）的稻田土壤进行残留监测,采用膳食暴露评估模型和生态相对风险模型（EcoRR）对急、慢性膳食暴露风险和生态环境风险进行评估。[结果]水稻上常规使用的51种农药,有4种在收获的稻米中检出,其中吡蚜酮和己唑醇具有较高的检出率,分别为93.00%和28.75%,毒死蜱和戊唑醇检出率为14.29%和7.14%。急、慢性膳食暴露风险评估表明:稻米中残留的吡蚜酮、己唑醇、毒死蜱和戊唑醇对不同年龄人群的食用安全风险较低,减施农药仍可进一步降低膳食暴露风险。对水稻不同生育期土壤中农药残留的调查表明,有13种农药在土壤中检出,其中三环唑、己唑醇和丙环唑检出率为100%,这与其较长的半衰期、使用频率以及在前茬作物的使用有关。生态风险评估表明:减施农药能够降低稻田生态环境风险,其中穗期减少吡蚜酮的施用量对稻田生态风险的降低效果最为显著,部分地区可由中等风险转变为低风险或无风险级别。生态风险贡献率分析表明:吡蚜酮的风险贡献率最高,在水稻分蘖期、抽穗期、收获期分别为54.16%～83.68%、19.07%～84.39%和0.00%～82.32%;其次是分蘖期丙草胺、抽穗期苯醚甲环唑和收获期丙环唑的使用,风险贡献率分别为0.00%～71.50%、0.00%～68.95%和1.12%～62.24%,亦是影响稻田生态风险的关键药剂。[结论]减少关键农药品种在水稻不同生长时期的使用,可以显著降低其生态环境风险,特别是吡蚜酮、苯醚甲环唑、丙环唑和丙草胺的合理使用,是调控稻田生态环境安全的关键。
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绵羊乳腺上皮细胞的分离鉴定及炎性模型的建立
《中国兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：探索高效易行的绵羊乳腺上皮细胞原代培养方法并建立细胞炎性模型。分别采用组织块法、酶消化法和酶消化组织块法分离培养绵羊的乳腺上皮细胞,通过形态学观察、免疫荧光染色和RT-PCR等方法对细胞进行鉴定;用不同浓度的脂多糖（LPS）作用细胞后,通过CCK-8法检测细胞相对存活率;利用ELISA方法检测IL-8和TNF-α表达量;通过Western blot检测TLR-4蛋白表达量。结果显示,酶消化组织块法是最符合预期的方法,可在较短时间内获得活力旺盛的乳腺上皮细胞;细胞生长曲线呈"S"型,CK-18免疫荧光染色呈阳性,β-酪蛋白基因表达呈阳性。10 mg/L LPS处理12 h的细胞相对存活率明显升高（P<0.01）,细胞上清液中IL-8和TNF-α表达量极显著上升（P<0.01）,TLR-4蛋白表达量升高,表明细胞炎性模型建立成功。
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Cry1B抗独特型单链抗体的定点突变及生物活性分析
《生物技术通报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：Bt毒素的长期应用使其在害虫抗药性等方面存在生态风险,这一现状促使高特异活性和新功能Bt抗虫资源的积极开发。前期研究发现抗独特型单链抗体制备技术是开发新型杀虫蛋白的一个新途径。然而获得的Bt Cry1B抗独特型单链抗体C7与昆虫BBMV结合能力不高,需进一步改造提高。通过分子模拟技术对C7与稻纵卷叶螟BBMV上的受体氨肽酶N进行同源建模、分子对接,并预测C7与氨肽酶N结合区域的热点残基。利用C7的热点残基构建饱和突变抗体库,并采用固相筛选方法,得到突变体Y124G。BIAcore分析表明Y124G与BBMV的结合能力增加,生物测定发现对稻纵卷叶螟的杀虫活性提高。这为抗体分子改造技术的应用奠定了基础,也为新型生物农药创制提供了新的思路。
关键词： Cry1B 分子改造 定点突变 杀虫活性 表面等离子共振
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水稻叶宽调控基因ZY1的图位克隆与功能分析
《植物遗传资源学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：叶宽是水稻株型的重要组成部分,适宜的叶宽有助于提高光利用效率进而提高水稻产量。利用水稻叶宽突变体,阐明新的水稻叶宽调控相关基因的功能,有助于进一步阐明水稻叶宽发育调控机制。本研究利用育种中间材料中发现的窄叶突变体zhaiye1（zy1）,与野生型（WT,wild type）相比,zy1出现明显的窄叶表型,株高也出现显著降低,穗型减小,种子呈现开颖畸形。组织观察结果说明,zy1中是由于叶脉数量减少导致窄叶表型的出现。通过计算F2群体的表型分离比,发现窄叶表型显示由2个隐性遗传位点控制。图位克隆最终将突变基因分别定位到第11染色体短臂顶端76 kb和第12染色体短臂顶端150 kb的区域内,利用测序和PCR扩增验证最终证明突变基因为Os11g01130和Os12g01120,二者为重复基因,编码一个OsWOX3A转录因子。进化树分析表明,ZY1蛋白与疣粒野生稻中的同源蛋白进化关系最近。ZY1蛋白亚细胞定位于细胞核中。转录组分析结果说明ZY1突变后差异表达基因分布在多个信号途径中,同时ZY1可能通过生长素信号途径调控水稻叶宽发育。综上所述,ZY1不仅调控水稻叶宽发育,而且参与水稻株高、穗型、颖壳等多个性状的发育调控。
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需冷量和需热量差异对桃花叶物候进程的影响
《植物遗传资源学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了明确桃开花展叶先后的花叶物候进程,花芽与叶芽需冷量和需热量差异对花叶物候进程的影响规律,本研究首先连续2年分别评价了99份和257份桃种质花芽叶芽的需冷量和需热量,并调查了盛花期和展叶期,将所试桃材料按花芽需冷量高低分为极低、低、中和高4种类型,系统讨论不同年度不同类型桃花叶物候进程,以及各进程的花芽与叶芽需冷量和需热量差异表现模式.结果 发现,极低和低需冷量桃呈现出先花后叶、花叶同放和先叶后花3种花叶物候进程,同一种质的花叶物候进程会因年度不同而改变,其需冷量和需热量差异表现模式种类复杂且年度间有变动;中和高需冷量桃仅呈现出先花后叶1种花叶物候进程,其需冷量和需热量差异表现模式种类简单且年度间保持不变.桃花叶物候进程与需冷量和需热量差异模式相关,并主要取决于需热量的差异.表现为无论花芽需冷量是等于、小于还是大于叶芽,只要花芽需热量小于叶芽,则为先花后叶;二者需热量相等,则为花叶同放;花芽需热量大于叶芽,则为先叶后花.结果 表明,花芽与叶芽的需热量差异是形成桃多样易变的花叶物候进程的重要因素.
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中强度脉冲电场对娃娃菜活性物质含量及抗氧化能力的影响
《食品科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为探明中强度脉冲电场（moderate intensity pulsed electric fields,MIPEF）诱导果蔬代谢的应激机制,同时确定最佳处理条件以获得高活性物质含量的娃娃菜,本实验研究不同电场强度（0.4～2.0 kV/cm）和占空比（0%～49.2%）的MIPEF处理对娃娃菜活性物质含量、抗氧化酶系（过氧化氢酶、过氧化物酶、抗坏血酸过氧化物酶、谷胱甘肽还原酶）活性以及抗氧化能力的影响。结果表明,MIPEF可刺激娃娃菜酚类物质、抗坏血酸、谷胱甘肽、总硫代葡萄糖苷和异硫氰酸酯的合成（2.76%～818.03%）,同时显著提升抗氧化酶系的活性（2.22%～42.00%）,从而提高1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-dipenyl-2-pierylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2-·）清除率和总还原力（1.81%～202.11%）,以延缓娃娃菜衰老进程。通过拟合预测和验证实验,得出最优处理条件为电场强度1.1 kV/cm、占空比46.4%,此时活性物质含量为理论预测值的88.91%～103.40%。结论:MIPEF处理可显著提升娃娃菜活性物质含量和抗氧化能力,是一种极具潜力的果蔬非热预处理方式。
关键词： 中强度脉冲电场 娃娃菜 活性物质 抗氧化酶 抗氧化能力
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鉴别猪胸膜肺炎放线杆菌2/6/8/12型的多重PCR方法的建立
《中国兽医科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为快速准确鉴别猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae,APP）血清2、6、8、12型,从已发表的文献中筛选出4对引物,通过扩增体系和扩增程序的优化来建立APP血清2、6、8、12型的多重PCR检测方法,并对其特异性和敏感性进行了研究。结果发现,所建立的多重PCR方法特异性良好,对APP血清1～15型进行PCR检测,除血清2、6、8、12型外,均不能扩增出任何条带,检测猪链球菌、副猪嗜血杆菌、猪多杀性巴氏杆菌和猪大肠杆菌也呈阴性,对APP血清2、6、8、12型的细菌纯培养物、组织样品的检测敏感性分别都为1×103CFU/mL、1×103CFU/g。本PCR方法快速有效,可在4.5 h左右直接从肺脏组织中得到检测结果。本方法的建立为APP的分子分型和流行病学调查提供了有力的技术支撑。
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含免疫增强剂CVC1302口蹄疫灭活疫苗缩短免疫应答窗口期机制的研究
《中国预防兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为探究免疫增强剂CVC1302缩短口蹄疫灭活疫苗（KV）免疫应答窗口期的机制,本研究将灭活的O型口蹄疫病毒（FMDV）与CVC1302按照1.50配比后,与ISA206佐剂乳化制备疫苗（KV-CVC1302）;将灭活的FMDV与ISA206佐剂乳化制备疫苗（KV）,将上述疫苗分别免疫6周龄BALB/c雌性小鼠。免疫后7 d、28 d、56 d、90 d、120 d、150 d和180 d采血分离血清,利用O型FMD液相阻断ELISA（LBP ELISA）试剂盒检测各组小鼠血清FMDV特异性抗体水平。免疫后1 d,取注射位点肌肉,分别利用qPCR和ELISA检测其中细胞趋化因子的转录及表达水平。免疫后1 d、3 d、5 d和7 d分别采集注射位点肌肉及腹股沟淋巴结,制备单个淋巴细胞,利用流式细胞仪检测注射位点肌肉和腹股沟淋巴结的抗原递呈细胞（APC）[树突状细胞（DC）、巨噬细胞（Mph）、单核细胞（Mo）]的数量;免疫后1 d,利用流式细胞仪检测注射位点肌肉中DC的活化情况。结果显示,KV-CVC1302组小鼠FMDV特异性抗体水平、注射位点趋化因子转录及表达水平均显著高于KV组（p<0.01、p<0.001）;且注射位点APC的数量及DC的活化水平也显著提高（p<0.001）,该组小鼠腹股沟淋巴结APC的数量也明显高于KV组（p<0.05、p<0.01或p<0.001）。综上结果表明,CVC1302通过增强KV于注射位点诱导产生趋化因子的能力,募集大量的APC,进而对FMDV进行有效的捕获加工和递呈,转运至腹股沟淋巴结,诱导B细胞的形成,并分泌高水平抗体,从而缩短免疫应答窗口期。本研究首次证实CVC1302是在疫苗诱导免疫应答的启动阶段发挥作用,其通过募集活化的APC捕获更为有效的抗原以激活免疫系统,缩短了免疫应答窗口期,为后续研制新型免疫增强剂提供了新思路。
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紫云英不同时期还田部分替代化肥对氨挥发及水稻产量的影响
《江苏农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：氨挥发是稻田氮肥损失的主要途径,研究紫云英还田对稻田氨挥发和水稻产量的综合影响对于合理利用绿肥以及稻田化肥减量有重要意义。本研究以稻麦轮作常规施氮（M）为对照,在紫云英旺长期（F1）、始花期（F2）、盛花期（F3）和初荚期（F4）翻压还田并减少稻季20%的化学氮肥用量,研究了紫云英不同时期还田部分替代化肥对氨挥发及水稻产量的影响。结果表明,水稻生长期间氨挥发损失总量随紫云英翻压还田时期的推迟呈先增加后减少的趋势,处理间无显著差异,但均较对照显著减少。F3、F4、F2处理的水稻产量较高,显著高于F1处理,但与对照的差异均未达到显著水平。F1、F2、F3、F4处理间氨挥发排放强度无显著差异,但均显著低于对照。不同翻压还田时期造成了紫云英干物质质量和氮素养分还田量的差异,最终影响了稻田氨挥发和水稻产量;减少化学氮肥的投入可以有效降低稻田氨挥发。说明,紫云英还田应选择在盛花期至初荚期进行,并减少稻季20%的化学氮肥用量,可在确保水稻高产前提下降低氨挥发排放强度。
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不同凝固剂对豆腐品质特性及风味成分的影响
《食品工业科技 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为探究不同凝固剂对豆腐品质特性和风味成分的影响,利用质构分析、扫描电镜分析和固相微萃取-气相色谱-质谱联用（SPME-GC-MS）等技术以及聚类分析和主成分分析等分析方法研究了MgCl2、CaSO4、乳酸、醋酸、葡萄糖酸内酯（GDL）和酸浆对豆腐得率、质构、色差、微观结构以及挥发性物质组成的影响。结果表明:酸浆豆腐和GDL豆腐含水量和得率显著高于其他凝固剂豆腐（P<0.05）;醋酸豆腐的硬度（244.04 mN）和咀嚼性（176.34 mJ）最大,而L*值（82.77）最低;CaSO4豆腐和GDL豆腐具有致密的网状结构,醋酸豆腐表面粗糙,具有孔隙。从豆乳和不同种凝固剂豆腐中共检测出醇类、醛类、酮类、酯类、酸类、酚类等100种挥发性风味物质,且豆乳中挥发性物质总量显著高于不同凝固剂豆腐的挥发性物质总量（P<0.05）。酸浆豆腐挥发性物质种类最多,但致"豆腥味"挥发性物质含量最低。聚类分析表明乳酸豆腐、醋酸豆腐和MgCl2豆腐的挥发性风味特征相似度高,CaSO4豆腐和GDL豆腐的挥发性风味特征相似度高。主成分分析表明对豆腐风味贡献较大的挥发性物质有2, 4-壬二烯醛、（E）-2-辛烯醛、1-己醇、（E）-2-癸烯醛和（E, E）-2, 4-癸二烯醛。感官评价表明CaSO4豆腐和酸浆豆腐优于其他凝固剂豆腐。综上,不同凝固剂对豆腐得率、质构、色差、微观结构、风味物质和感官评价影响显著,其中CaSO4豆腐和酸浆豆腐与其他凝固剂豆腐相比,拥有更佳的质地、风味和更高的消费吸引力。
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