甘蓝型油菜GPDH基因克隆、表达分析及植物过表达载体构建

张超; 付三雄; 周小婴; 唐容; 黄莎; 杨克相; 戚存扣; 《南方农业学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：【目的】克隆甘蓝型油菜的甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)基因(BnGPDH),分析其表达特性并构建植物过表达载体,为研究该基因在油菜种子三酰甘油(TAG)合成和积累中的作用机制提供理论参考。【方法】以甘蓝型油菜H105为材料,采用同源克隆技术克隆与At3G07690同源的BnGPDH基因,对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BnGPDH基因在甘蓝型油菜不同组织[根、茎、叶、蕾、花及花后(DAF)7、14、21、30和40 d角果皮和种子]及高、低油含量自交系角果皮和种子中的表达情况,并将克隆获得的BnGPDH基因连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上构建植物过表达载体。【结果】克隆获得的BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因编码区(CDS)长度均为1338 bp,编码445个氨基酸,其编码蛋白仅有5个氨基酸差异,均具有NAD_Gly3P_dh_N和NAD_Gly3P_dh_C结构域,定位于细胞质,分别与白菜细胞质型GPDH蛋白(XP_009147040.1)和甘蓝细胞质型GPDH蛋白(XP_013585317.1)的氨基酸序列具有较高相似度,对应的相似度为100.00%和99.78%,且二者与双子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较近,与单子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较远。BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同组织中均有表达,且表达模式总体上相似,在21DAF和30DAF种子中的表达量显著高于其他组织部位(P<0.05,下同),表明21DAF和30DAF是油菜种子TAG合成和积累的高峰期,但在角果生长发育不同时期这2个基因的表达略有不同,且在茎、蕾、种子(7DAF、21DAF、30DAF和40DAF)和角果皮(7DAF和40DAF)中,BnGPDHc2-1基因的表达量均显著高于BnGPDHc2-2基因,而在14DAF角果皮中BnGPDHc2-2基因的表达量显著高于BnGPDHc2-1基因。21DAF种子中BnGPDHc2-1基因在3个高油含量自交系中的表达量显著高于3个低油含量自交系,BnGPDHc2-2基因在高油含量自交系IL130和IL594中的表达量显著高于3个低油含量自交系;在30DAF种子中,BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2在3个高油含量自交系中的表达量均显著高于3个低油含量自交系。将BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因分别连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上可成功构建获得植物过表达载体。【结论】BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同发育期角果中行使的功能存在一定分化,在进化过程中可能分别来源于白菜基因组和甘蓝基因组,但均在甘蓝型油菜种子TAG合成和积累发挥重要调控作用。因此,构建的植物过表达载体可用于BnGPDH基因功能分析及油菜种子油含量基因工程改良研究。

关键词： 甘蓝型油菜 甘油-3-磷酸脱氢酶（GPDH） 表达特性 生物信息学 植物过表达载体

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贵州山区加州鲈池塘养殖试验

杨星; 张美彦; 赵飞; 张效平; 申晓东; 《科学养鱼 》 2019 北大核心

摘要：贵州省水资源丰富,水质优良,适宜于加州鲈的养殖,具有开展商品加州鲈养殖的优越条件.为探索加州鲈在贵州山区池塘的养殖效果,我们于2018年在贵州省绥阳县风华镇进行了加州鲈池塘养殖试验.一、养殖及管理1.水源水源为水库水,水质符合国家规定的渔业水质标准,通过水泵抽入池塘.2.池塘试验池塘1口,面积为2亩.池塘进排水方便,池塘水深1.0~1.3米.每口池塘配备1.2千瓦叶轮增氧机1台.

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酶法修饰抑制马铃薯泥回生工艺优化

陈朝军; 刘永翔; 《食品科技 》 2019 北大核心

摘要：以β-淀粉酶对马铃薯泥进行抗回生处理,研究酶作用时间、酶作用温度和酶浓度对马铃薯泥回生的影响,通过单因素试验和响应面法确定优化处理工艺,并对马铃薯泥冷冻干燥后进行SEM观察.结果表明:抑制马铃薯泥最佳工艺条件为酶作用温度55.7℃、酶作用时间30.2 min、酶浓度41.6 U.在此条件下制得马铃薯泥,经4℃冷藏7 d后测得的马铃薯泥回生度为12.53%,而未经淀粉酶处理的马铃薯泥,经4℃冷藏7 d后测得的马铃薯泥回生度为16.84%,马铃薯泥回生度下降25.59%;经SEM观察马铃薯泥颗粒松散,排列不规则说明酶处理有效降低回生度.

关键词： 马铃薯泥 β-淀粉酶 回生 响应面

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⁶⁰Co-γ辐照处理对蓝莓保鲜效果的影响

龙明秀; 吴凤玉; 田竹希; 刘敏; 何扬波; 李咏富; 石彬; 梁倩; 《核农学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为延长蓝莓果实的货架期,本试验利用市售保鲜盒和专利保鲜盒包装蓝莓,并结合60Co-γ辐照处理,分析贮藏期间蓝莓果实微观结构、生理生化指标、主要营养成分的变化.结果表明,专利保鲜盒+1.0 kGy剂量辐照处理可显著降低果实表面的菌落总数,较好地保持果实原有结构、色泽、硬度及抗氧化性,有效减缓了蓝莓花青素、总酚、Vc等营养成分的消耗,延长了蓝莓保鲜时间;而专利保鲜盒+2.0kGy剂量辐照处理加速了果实衰老和品质劣变;专利保鲜盒因具有微气调作用而使其保鲜效果明显优于普通市售保鲜盒.因此,低剂量的辐照处理与微气调保鲜盒结合使用可有效延长蓝莓的货架期.

关键词： 蓝莓 辐照 贮藏品质 微观结构

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3个柠檬品种果实非可食部分初生代谢物分析

李文云; 罗怿; 郑乾明; 柏自琴; 韩秀梅; 王小柯; 李金强; 《中国南方果树 》 2019 北大核心

摘要：为了比较贵州产尤力克柠檬、四季柠檬和阿特摩柠檬果实非可食部分(黄皮层、白皮层和囊衣)的品质特征,采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分析了3个柠檬品种成熟果实非可食部分的氨基酸、有机酸和糖等初生代谢物含量.结果表明,共检测到29种初生代谢物,其中,氨基酸8种,有机酸11种,可溶性糖10种;不同品种和不同组织的氨基酸、有机酸、糖等初生代谢物种类和含量存在较大差异.从氨基酸来看,3个品种均是脯氨酸含量最高;3个品种有机酸种类相似,黄皮层和白皮层含量最高的为奎宁酸,囊衣含量最高的为柠檬酸;从可溶性糖含量来看,3个品种均是葡萄糖含量最高.

关键词： 柠檬 初生代谢物 糖 有机酸 氨基酸

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马铃薯片的热泵干燥与干燥动力学拟合

周罗娜; 王辉; 刘嘉; 刘永翔; 雷尊国; 叶发银; 计保芮; 《江苏农业科学 》 2019 北大核心

摘要：以马铃薯为原料,拟探索在热泵干燥的过程中,马铃薯片的切片厚度、漂烫时间、干燥温度、马铃薯品种及酸、盐处理对干燥速率的影响.结果 表明,马铃薯片的切片厚度、漂烫时间、干燥温度对干燥速率均有较大影响,当切片厚度为2 mm,漂烫时间为60 s,干燥温度为80℃时,马铃薯片的干燥速率最快;马铃薯品种不同,干燥速率也有所不同,其中品种为费乌瑞它的马铃薯片干燥速率最快;马铃薯片经过酸、盐预处理均能提高热泵干燥的干燥速率,其中乳酸、氯化钠提高得最多.通过模型拟合,得出符合马铃薯片热泵干燥动力学特性的模型为Page模型,可以准确地预测马铃薯片热风干燥的过程,从而为实际生产提供理论依据.

关键词： 马铃薯片 热泵干燥 模型拟合 动力学拟合

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长期不同施肥对水稻干物质和磷素积累与转运的影响

刘彦伶; 李渝; 白怡婧; 黄兴成; 张雅蓉; 张萌; 张文安; 蒋太明; 《植物营养与肥料学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：【目的】磷是制约黄壤生产力的重要限制因子,提高作物的磷效率是农业科学研究的热点之一。探讨不同施肥模式对水稻干物质和磷素积累与转运的影响,为黄壤稻田合理施用磷肥提供理论依据。【方法】依托22年的黄壤(水田)长期定位试验,选取其中6种施肥模式:不施肥(CK);不施磷肥(NK);平衡施用化肥(NPK);单施有机肥(M);1/2有机肥替代1/2 NP (0.5 MNP);有机肥化肥配施(MNPK)。除CK和MNPK外,NK、NPK、M、1/2 MN处理为等氮量165 kg/hm2,施磷量依次为P2O5 0、82.5、79.4、81.0 kg/hm2,MNPK施N330 kg/hm2、P2O5 161.9 kg/hm2。于水稻分蘖期、开花期及成熟期,采集水稻植株样品,分析比较各处理水稻产量、干物质和磷素积累与转移特征、磷肥吸收利用效率的差异。【结果】水稻产量、干物质和磷素积累量大小顺序均表现为MNPK> M> 0.5 MNP> NPK> CK> NK。磷素积累快速增长开始(t1)和结束(t2)时间均较干物质积累提前2～8 d和5～20 d,且磷素积累快速增长持续时间(Δt)也较干物质缩短了4～12 d,表明磷素快速吸收较干物质早,且持续时间短。处理NK、NPK、0.5 MNP、MNPK干物质最大增长速率(Vm)出现时间(t0)以及t1、t2分别比CK和M处理滞后5～10 d、1～4 d、6～16 d,Δt延长了1～14 d。各处理干物质和磷素积累的Vm均表现为M、MNPK> 0.5 MNP、CK> NPK> NK。水稻籽粒干物质积累量主要来源于花后干物质积累,磷素积累量则主要来源于花前磷素积累向籽粒的转运,各处理花后干物质积累率为29.5%～43.4%,施用化肥各处理显著高于CK和M处理,各处理花前磷素积累率为60.5%～85.6%,大小为CK> NPK、M> NK、0.5 MNP、MNPK。与NPK处理相比,M和0.5 MNP处理磷肥吸收效率、磷肥偏生产力、磷肥利用率分别显著提高了0.43kg/kg、48.9 kg/kg、40.8个百分点和0.26 kg/kg、32.2 kg/kg、25.3个百分点。【结论】黄壤地区水稻栽培中长期缺磷不利于花后干物质的积累,也不利于花前磷素的积累,严重制约水稻产量和磷吸收量的提高。在氮磷钾投入平衡前提下,长期单施有机肥可促进花前干物质和磷素的积累及其向籽粒的转运,但不利于花后干物质和磷素的积累,长期单施化肥可延长干物质和磷素积累的快速增长持续时间,但最大增长速率较小,而长期有机无机配施均较有利于促进水稻花前和花后干物质和磷素的积累,水稻产量和磷肥利用率均较高,是最合理的施肥方式。

关键词： 水稻 黄壤 干物质 磷素 积累与转运

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微生物制剂对草莓重要真菌病害的作用研究

赵玳琳; 陶刚; 卯婷婷; 王廿; 赵兴丽; 娄璇; 孙漫红; 李世东; 《中国生物防治学报 》 2019 北大核心

摘要：为筛选防治草莓几种重要真菌病害的高效微生物制剂,本研究测定了以植物免疫蛋白、淡紫拟青霉、枯草芽胞杆菌和粉红黏帚霉等为活性成分的3种微生物制剂对草莓炭疽病、灰霉病和白粉病的防治作用及对草莓生长的影响.结果表明,3种微生物制剂对草莓炭疽病的防效均在65%以上,对灰霉病的防效在30%~55%.对于草莓白粉病害,沃丰康-克线散防治效果较好,达到64.1%,而普绿通粉剂和沃丰康-复合微生物菌剂防效不明显(<40%).此外,3种微生物菌剂均表现出明显的促生、增产作用,其中沃丰康-复合微生物菌剂效果最为显著,植株干重增加57.3%,草莓干重增加83.1%;施用沃丰康-克线散粉剂植株和果实增幅分别为47.5%和76.1%,普绿通粉剂分别增加17.9%和66.2%.本研究表明,生防制剂可以替代化学农药用于草莓病害防治和有机生产.

关键词： 微生物菌剂 草莓 真菌病害 促生 生物防治

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拟南芥中一个锌指蛋白AT 5 g 47610的基因克隆及表达分析

陈存; 高志宏; 冯媛媛; 伍勇; 祁伟亮; 陈成; 陈洁; 伍林涛; 奉斌; 蔡菁; 《种子 》 2019 北大核心

摘要：逆境胁迫是植物正常生长发育与作物产量提高的重要限制因素,具有锌指结构的E 3泛素连接酶作为一个重要的蛋白家族,在植物逆境胁迫应激中起着重要的调控作用。本文从一个含有锌指结构的蛋白AT 5 g 47610出发,通过PCR对其基因进行克隆,然后连接到PET 32 a原核表达载体,37℃通过0.2 mM IPTG诱导出了目标蛋白,为后续的蛋白功能鉴定研究奠定了基础。

关键词： E 3连接酶 基因克隆 诱导表达

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干扰E2F7对C2C12成肌细胞增殖的影响

范源; 甘麦邻; 罗嘉; 谭娅; 张顺华; 朱砺; 《云南农业大学学报(自然科学) 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：【目的】探究转录因子E2F7在骨骼肌细胞发育过程中的作用。【方法】以C2C12成肌细胞为研究对象,通过设计小干扰RNA干扰C2C12成肌细胞中E2F7的表达,分为干扰组和对照组,并利用RT-PCR、CCK-8和EdU等技术检测在C2C12成肌细胞中干扰E2F7后对成肌细胞增殖的影响。【结果】E2F7 mRNA表达水平在C2C12成肌细胞增殖期极显著高于分化期(P<0.01);与对照组相比,干扰组的细胞活率和新生细胞比率皆极显著高于对照组(P<0.01);干扰E2F7显著提升了C2C12成肌细胞中Cyclin E的表达水平(P<0.05),极显著促进Cyclin D和CDK4的表达(P<0.01);并且干扰E2F7可显著促进E2F2 (P<0.05)和极显著促进E2F1及E2F3的表达(P<0.01),同时极显著促进与成肌细胞增殖相关microRNAs (miR-7、miR-25、miR-27和miR-92a)的表达(P<0.01)。【结论】干扰E2F7可促进C2C12成肌细胞的增殖,E2F7可能是通过调控经典E2Fs信号通路和成肌细胞增殖相关microRNA发挥作用。

关键词： E2F7 C2C12成肌细胞 增殖 小干扰RNA 骨骼肌发育

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