科研产出
雏番鸭细小病毒vp3基因的原核表达及增殖病毒的检测
《生物工程学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：近年来,番鸭细小病毒出现新的流行趋势,估计与病毒基因变异有关,因此针对新流行毒株研发新的检测方法很有必要。本研究根据番鸭细小病毒(MDPV)2012年分离株SAAS-SHNH的全基因序列,设计了一对特异性引物,利用PCR技术扩增全长vp3基因,经鉴定正确后,进行同源性比对分析,同时将其克隆到PET28a载体,构建成PET28a-VP3原核表达载体,经转化及IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳和Western blotting分析,表达出与预期大小相符的63.1 k Da的蛋白,该蛋白可与临床采集的免疫过MDPV的番鸭血清结合,说明该蛋白可用于MDPV的血清学检测。将纯化后蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔源MDPV-VP3蛋白的多克隆抗体,制备的兔源血清能够与MDPV疫苗弱毒株及J3D6株VP3蛋白发生特异结合;MDPV感染原代鸭胚成纤维细胞(DEF)后,利用兔源血清作为一抗进行免疫荧光分析(IFA)分析,在DEF细胞核和细胞质内均能检测到VP3蛋白,表明利用VP3蛋白制备的抗血清可以用于MDPV免疫荧光分析细胞增殖病毒的检测。这为今后MDPV的快速检测提供了技术基础。
关键词： MDPV vp3基因 原核表达 纯化 免疫荧光分析
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八棱海棠MdPPO2B基因的表达及功能分析
《植物生理学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：多酚氧化酶(PPO)是一种含多个铜离子的氧化还原酶,可催化酚类物质氧化为醒类物质。我们从八棱海棠中克隆到一个PPO的同源基因MdPPO2B,构建该基因酵母分泌表达载体并转化到毕赤酵母GS115中。SDS-PAGE电泳结果显示,表达蛋白MdPP02B的分子量约为66.4 kDa。以邻苯二酚作为底物,该酶的最适pH和温度分别为6.5和40℃。除Cu~(2+)、Na~+、Mg~(2+)和Li~+外,4 mmol·L~(-1)的Fe~(3+),Zn~(2+),Mn~(2+)对酶活力表现出较强的抑制作用。在最适条件下,当苯酚浓度达600μmol·L~(-1)时,反应4h,MdPPO2B表达菌株可降解80%的苯酚。表明该基因在工业污水处理中具有广阔的应用潜力。
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水稻品种对稻田CH_4和N_2O排放的影响
《农业环境科学学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：稻田被认为是温室气体甲烷(CH4)和氧化亚氮(N2O)的重要排放源,推广种植较少温室气体排放的水稻品种是控制稻田温室气体排放的有效措施之一。选取在太湖流域推广种植较多的16个品种为对象,通过研究其CH4和N2O排放情况,筛选出该区域内最适宜种植的较低温室气体排放的品种。研究结果表明,水稻的产量与CH4排放量存在显著的线性正相关关系。在常规灌溉条件下,不管是常规品种还是杂交品种,粳稻的CH4、N2O累积排放量和产量都要高于籼稻。与常规品种(粳稻或籼稻)相比,杂交品种的CH4累积排放量和产量相对较高,但N2O累积排放量相对较低。常规粳稻中的早玉香粳和秀水134、杂交粳稻中的花优14、秋优金丰和甬优9号以及杂交籼稻中的旱优113、天优华占均具有较高的产量和较低的温室气体排放强度,有较大的推广种植价值。早玉香粳、旱优8号和旱优113为节水抗旱稻,它们在水分缺少的环境下可能会表现出更大的优势。
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肥皂草素对斑玉蕈菌丝体抗氧化酶活性及相关基因表达量的影响
《微生物学通报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究肥皂草素对斑玉蕈菌丝体的活性氧代谢、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及其基因表达的影响。【方法】在摇瓶培养基中添加不同浓度的肥皂草素研究菌丝体在不同培养时间内活性氧代谢、SOD和CAT的活性及其基因表达的变化。【结果】添加肥皂草素后,在7-11 d内超氧阴离子及丙二醛(MDA)的含量整体较对照组有升高趋势,但是在13-15 d含量较对照又有所下降;肥皂草素处理的菌丝体SOD活性随着浓度的增加而逐渐增强(第9天除外),特别是在培养13-15 d更加明显;CAT活性同样随着浓度的增加而逐渐增强,特别是0.05 g/L实验组酶活性始终保持在较高的水平;不同浓度的肥皂草素都能使Mn-SOD基因、CAT基因的表达出现上调趋势,在0.05 g/L时,肥皂草素诱导Mn-SOD基因的表达与其活性的变化趋势基本一致,而CAT基因表达与其活性的变化并不一致,其活性可能受基因翻译后的修饰调控等因素的影响。【结论】肥皂草素的添加能够诱导SOD和CAT酶活性的增强及上调Mn-SOD、CAT基因的表达量,减缓菌丝培养后期活性氧和MDA的积累。
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分级醇沉宣木瓜多糖含量、分子量测定和活性初步研究
《光谱学与光谱分析 》 2015 EI SCI 北大核心 CSCD
摘要：采用水提取分级醇沉制得宣木瓜多糖,利用苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用高效尺寸排阻色谱-多角度激光光散射-示差折光联用技术(HPSEC-MALLS-RI)分析多糖分子量和分子量分布,用多糖体外刺激巨噬细胞,Griess法检测NO释放量。系列研究旨在考察宣木瓜多糖含量、分子量和分子量分布以及免疫活性,为宣木瓜多糖研究积累实验资料和科学依据;并为中药多糖研究提供较为简单、系统的方法与思路。结果表明,不同乙醇浓度(φ)沉淀宣木瓜多糖含量的高低顺序是:95%>80%>40%≥60%>20%,95%乙醇可较完全地沉淀多糖;当乙醇浓度从20%上升到95%时,粗多糖纯度由35.1%上升至45.0%。宣木瓜多糖主要有3个色谱峰,不同浓度醇沉的多糖经HPSCE分离后出峰位置和数量没有明显差别,表明它们含有的多糖种类相似;重均分子量(Mw)分别为6.570×104 g·moL-1和1.393×104 g·moL-1以及小于1万未能获得准确值;前两种多糖的分子量分布指数(Mw/Mn)分别是1.336和1.639;本试验中宣木瓜多糖对巨噬细胞Raw264.7产生NO没有明显的促进作用。
关键词： 宣木瓜多糖 含量 分子量 高效尺寸排阻色谱-多角度激光散射-示差折光 巨噬细胞 NO
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猴头菌子实体小分子提取物的分离与体外抑制幽门螺旋杆菌的分析
《菌物学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：本研究以甲硝唑为阳性对照,利用HPD-100大孔树脂和95%乙醇将猴头菌子实体中小分子活性物质进行富集,得到乙醇制备液(MREEs);然后对乙醇制备液分别使用石油醚(60–90℃)和氯仿进行多次萃取,得到石油醚萃取物(A1、A2)和氯仿萃取物(B),并进行GC-MS测定;对MREEs和A1、A2、B分别进行药敏试验,同时对5种幽门螺旋杆菌进行最低抑菌浓度测定。结果表明,使用大孔树脂得到的MREEs有较好的抑菌活性,得到的A1、A2和B对幽门螺旋杆菌的抑菌率均高于40.0%,其中石油醚萃取物A1在Helicobacter pylori SSI中的抑菌率甚至高达62.9%;A1、A2和B使用GC-MS测定出的主要成分分别是邻苯二甲酸二丁酯(A1,4.53%和A2,6.93%)和棕榈酸2.87%,但仍有大量成分没有被测出。另外,在最低抑菌浓度试验中,A1相应组分对Helicobacter pylori W2504、Helicobacter pylori 9和Helicobacter pylori ATCC43504的最低抑菌浓度都为0.25mg/m L,A2对Helicobacter pylori 78的最低抑菌浓度仅为0.25mg/m L,而B对Helicobacter pylori W2504、Helicobacter pylori 9的最低抑菌浓度均仅为0.125mg/m L,说明通过石油醚和氯仿萃取得到的猴头菌子实体提取物对幽门螺旋杆菌具有潜在的抑菌作用。
关键词： 猴头菌 小分子活性 抑菌活性 幽门螺旋杆菌 最低抑菌浓度 抑菌率
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水肥优化耦合下设施菜地水、氮响应的定量关系
《环境科学与技术 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：采用正交试验设计,研究了微喷灌条件下,设施菜地土壤水分含量和硝态氮含量对水肥耦合的响应规律。结果显示:(1)灌溉施肥后,0~60 cm土层土壤含水量下降。青菜成熟期时,土壤含水量高于幼苗期和旺长期。(2)在青菜的不同生育时期,各水肥因子对土壤含水量的影响主次程度不同,施肥量、灌水量和肥料配比对土壤含水量的影响较大,灌水周期对土壤含水量的影响相对较小。(3)土壤硝态氮含量受灌溉施肥的影响波动幅度随土壤深度的增加而减缓。灌水后,0~10 cm土层硝态氮含量最高,达到380.53 mg/kg。(4)高肥低水和低肥高水的水肥耦合方式均会造成表层土壤硝态氮积累,引起氮肥流失。各水肥因子中,施肥量对土壤硝态氮含量影响最大,灌水量和肥料配比的影响次之,灌水周期对土壤硝态氮含量的影响最小。研究结果证实在微喷灌条件下,通过水肥优化耦合可以有效避免氮肥淋失。
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不同贮藏温度及薄膜包装对采后金针菇品质的影响
《上海农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：分别用0.03 mm PE无孔膜、0.03 mm PE微孔膜、0.05 mm智能呼吸膜对采后鲜金针菇进行包装,并置于低温(4℃)和冰温(-0.5℃)条件下贮藏,通过测定贮藏过程中金针菇失重率、可溶性固形物含量、Vc含量、色差、细胞膜渗透率及可溶性蛋白质含量的变化,研究不同贮藏条件对金针菇品质的影响。结果表明,冰温贮藏优于低温贮藏,智能呼吸膜包装优于两种PE膜包装,其中冰温条件下智能呼吸膜包装对金针菇的保鲜效果最优,能够长时间保持菇体品质,使金针菇贮藏期延长至30 d左右。
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