科研产出
利用抑制差减杂交筛选稻瘟菌继代接种菌株差异表达基因
《浙江农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：稻瘟菌是重要的水稻病原微生物,通过各种变异机制提高自身对水稻的致病力。通过继代接种可使稻瘟菌发生适应性变异,从而增强致病力。为了解相关适应性变异的分子机制,利用稻瘟菌原始菌株与在水稻上继代接种的第四代菌株构建了抑制消减杂交文库。经过PCR验证及测序分析,共计获得168条EST非冗余序列。拼接后,Unigene的数量为110个。利用不同数据库,进行BLASTX分析,获得了与这些序列推测蛋白相似的功能蛋白,分析蛋白功能注释表明这些蛋白主要与合成和信号传导相关。GO分析表明相关蛋白涉及生命活动的多个方面,但主要集中于细胞生长发育、核酸结合及外界刺激的感知及传导。
关键词： 稻瘟菌 适应性变异 抑制消减杂交 表达序列标签 致病性
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HPLC法测定辣椒秸秆中辣椒素和二氢辣椒素含量
《药物分析杂志 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：目的:检测分析超越馨香和福椒六号辣椒品种秸秆不同时期叶片、侧枝、主杆部位的辣椒素与二氢辣椒素含量,为有效利用辣椒秸秆提供依据。方法:辣椒秸秆分成叶片、侧枝、主杆,60℃烘干粉碎,与甲醇溶液充分混合,采用HPLC法测定辣椒素和二氢辣椒素含量,并用精确度、浓缩、重复性、稳定性和加样回收率试验检验测定方法的可靠性。HPLC色谱条件:采用Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-超纯水(85:15)为流动相,流速1 mL·min-1,检测波长280 nm,柱温37℃。结果:辣椒素与二氢辣椒素的标准和浓缩曲线呈显著的线性变化;连续5次进样,RSD分别为0.13%和0.08%;重复性试验,样品辣椒素和二氢辣椒含量的RSD分别为1.7%和2.7%;稳定性试验,12 h内供试品溶液中辣椒素和二氢辣椒素浓度的RSD分别为2.3%和1.7%;回收率分别为95.8%和94.3%。除超越馨香,辣椒素和二氢辣椒素含量在不同收获时间和部位之间均存在显著差异,并存在时间和部位的交互效应,叶片辣椒素和二氢辣椒素含量显著高于侧枝和主杆(P<0.05)。结论:本研究采用HPLC法检测辣椒秸秆中辣椒素和二氢辣椒素含量的方法是可行的;辣椒秸秆中含有较高浓度的辣椒素和二氢辣椒素,其含量与品种、部位和采收时间有关。
关键词： 辣椒秸秆 品种 部位 采收时间 辣椒素 二氢辣椒素 高效液相色谱
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生防菌株MT-06对黄瓜白粉病的防治及其定殖力测定
《浙江农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：不同MT-06发酵液、孢子液和菌液防治黄瓜白粉病的盆栽试验研究发现:不同浓度梯度MT-06制剂对黄瓜白粉病都有抑制作用。MT-06菌液10倍稀释液处理3 d后的保护效果和治疗效果分别达到87.86%和84.89%,与对照三唑酮的处理效果相当,但处理11 d后MT-06菌液10倍稀释液的治疗效果显著高于三唑酮处理(P<0.05),其他处理防治效果都未能达到三唑酮的防治效果。MT-06菌液和孢子液表现防效较MT-06发酵液持久。MT-06定殖试验表明:叶柄上的定殖率仅1×105个.mL-1MT-06孢子液为85%,其余孢子液及菌液处理定殖率均为100%;MT-06在叶片上定殖率较低,MT-06菌液10倍稀释液的定殖率最高为40%。分析认为MT-06防效的保持性较好可能与其能定殖于植物上有关。
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利用PCR-RFLP方法检测中国荷斯坦牛STAT4基因内含子20多态性
《浙江农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以浙江省金华市伊康乳业奶牛场核心群357头中国荷斯坦牛为试验材料,旨在建立一种中国荷斯坦牛STAT4基因内含子20的单核苷酸多态性的简便检测方法。首先采用PCR-SSCP检测,结合DNA测序方法对STAT4基因内含子20的遗传多态性进行分析,并根据突变形式将PCR-SSCP检测方法转化为PCR-RFLP检测方法。结果发现STAT4基因内含子20内存在由g.95879 G>A和g.96013 G>C组成的完全连锁的单倍型模块。根据96013 G→C的突变可形成一个SduⅠ酶切多态位点的特性,建立了该单倍型的SduⅠ酶切检测体系。利用该体系检测到中国荷斯坦牛群体STAT4内含子20内存在GGGG,GAGC和AACC 3种不同的基因型,基因型频率分别为0.0784,0.4538和0.4678,而GG和AC基因频率分别为0.3053和0.6947。
关键词： 多态性 STAT4 PCR-RFLP 中国荷斯坦牛
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丽穗凤梨ISSR遗传多样性分析与指纹图谱构建
《中国农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探讨丽穗凤梨品种遗传多样性和亲缘关系,并建立其分子指纹图谱,为今后丽穗凤梨杂交育种和品种鉴定提供依据。【方法】利用ISSR分子标记技术研究41个丽穗凤梨品种的遗传多样性水平,并构建DNA指纹图谱。【结果】12条ISSR引物共扩增出132个清晰可辩位点,其中多态性位点125个,多态位点百分率达94.70%。41个丽穗凤梨品种平均有效等位基因数为1.5311,平均Nei’s基因多样性指数为0.3101,平均Shannon信息指数为0.4668,品种间的相似系数介于0.3561～0.9394之间;基于ISSR分子标记数据建立的UPGMA亲缘关系聚类图,41个丽穗凤梨品种在相似系数0.601处被划分为两大类群;同时利用4条多态性ISSR引物构建了41个丽穗凤梨品种的分子指纹图谱。【结论】供试41个丽穗凤梨品种遗传多样性丰富,其亲缘关系与叶片横纹的有无具有一定的相关性。ISSR分子标记技术可以有效地用于丽穗凤梨品种资源评价和指纹图谱构建。
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马唐生防菌Col-68发酵条件的筛选
《浙江农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了最大程度增强马唐生防菌Col-68在发酵过程中产孢能力以及次生代谢产物除草活性,试验以Col-68发酵滤液对马唐种子根、芽生长的抑制率为活性指标,综合不同培养条件下菌株产孢的差异,利用单因素筛选试验筛选出了适合该菌株发酵的不同碳氮源、碳氮比及初始碳源适宜浓度。研究结果表明,在初始pH=6.5,每300 mL锥形瓶装液120 mL,接种100μL菌原液,28℃、160 r.min-1震荡培养10 d的最佳发酵条件下,菌株活性差异显著,以蔗糖为碳源时Col-68活性、产孢量以及对马唐根长抑制率最高,蔗糖浓度在30～50 g.L-1时菌株产孢量以及对马唐根长抑制率较高,发酵最适宜利用的氮源为硝酸钠,最佳碳氮比则为2.5∶1.0。同时,不同条件下的发酵滤液对马唐根生长的抑制率均明显高于对芽生长的抑制率。
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棉铃虫成虫野生型与体色突变体的蛋白组成比较
《核农学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为进一步了解棉铃虫体色突变体的成色和调控机理,利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术、基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-TOF/MS)和生物信息学技术,对棉铃虫显性、隐性体色突变体与野生型成虫的蛋白质组成进行了比较分析。研究发现:显性体色突变体与野生型之间差异不明显,而隐性体色突变体和野生型之间存在一些明显差异,选取其中比较明显的3条差异条带进行质谱分析,发现一些与能量代谢、细胞骨架相关的蛋白。结果表明,这2类蛋白可能与棉铃虫体色突变性状的发生和调控相关。
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第二代测序技术用于水稻和稻瘟菌互作早期转录组的分析
《遗传 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：稻瘟菌为了实现对水稻的有效侵染,在侵染水稻时可能通过表达和转运一定数量的效应蛋白进入到水稻细胞,抑制和干扰水稻的先天免疫机制。文章利用Solexa第二代测序技术,通过开展水稻和稻瘟菌互作早期转录组的测定和分析,克隆和鉴定在互作早期表达的稻瘟菌效应蛋白基因。利用序列同源比对,我们从总计约12.5 M条序列标签中,分离和鉴定了338 942条来源于稻瘟菌的序列,并最终定位到779个稻瘟菌预测基因。其中108个基因很可能参与了水稻和稻瘟菌互作过程,42个基因为预测的分泌蛋白基因。通过RT-PCR分析,最终确认了42个预测分泌蛋白基因中有12个基因在侵染水稻早期有显著的表达,而其中有4个基因表现为侵染早期特异表达。文章尝试利用第二代测序技术实现稻瘟菌侵染早期特异表达基因,尤其是分泌蛋白基因的快速克隆和鉴定,为稻瘟菌效应蛋白基因的克隆和功能鉴定提供了较为有意义的探索。
关键词： Solexa测序技术 分泌蛋白 转录组分析 表达特异性 稻瘟菌
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加温促成栽培‘上野’温州蜜柑物候期与品质变化特性研究
《果树学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以‘上野’温州蜜柑为试材,研究了加温促成栽培柑橘果实成熟期间着色变化与糖、酸积累特性及加温起始时间对柑橘物候期变化的影响。结果表明,12月13日加温可使柑橘1月开花,6月下旬成熟,比露地栽培成熟期提早4个月以上;加温延迟,物候期相应推迟。加温促成栽培柑橘果实的色差值随果实成熟而上升,但成熟时色差a*和b*值都比露地成熟果实低。促成栽培柑橘果实可溶性固形物和糖分含量随果实成熟而上升,可滴定酸与有机酸含量随果实成熟而下降。促成栽培的柑橘果实以积累果糖为主,其次为葡萄糖,蔗糖含量最低,不到总糖含量的1/3。加温促成栽培柑橘着色不良与糖分构成的改变可能与果实成熟期间所处的高温环境有关。
关键词： ‘上野’温州蜜柑 加温促成栽培 物候期 着色 品质
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