科研产出
小菜蛾RyR调控蛋白FKBP基因克隆及其时空表达谱
《南方农业学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确FK506结合蛋白（FKBP）基因在小菜蛾对氯虫苯甲酰胺抗性形成中的作用，筛选出起主要作用的关键FKBP基因，为阐明小菜蛾抗双酰胺类杀虫剂的分子机理提供新思路。【方法】以抗氯虫苯甲酰胺种群和敏感种群小菜蛾为研究对象，采用浸叶法测定不同种群小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的敏感性差异；利用cDNA末端快速扩增（RACE）方法克隆3个FKBP基因（FKBP8、FKBP12和FKBP52）的全长序列，并通过GSDS 2.0、CDD和MEME在线分析软件分析其基因结构与蛋白保守结构域和Motif；采用实时荧光定量PCR分析抗性种群不同发育阶段和敏感、抗性种群4龄幼虫不同组织FKBP基因的时空表达特性。【结果】生物测定结果显示，抗性种群小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗性倍数为122.67倍，属于高水平抗性。实时荧光定量PCR分析发现，抗性种群小菜蛾体内3个FKBP基因的相对表达量均显著高于敏感种群（P<0.05，下同），其中FKBP8基因的表达差异最显著，是敏感种群的968倍。通过RACE方法克隆得到FKBP52、FKBP8和FKBP12基因的全长序列，长度分别为1473、1525和649 bp，分别编码423、307和108个氨基酸残基，其蛋白均为亲水蛋白。FKBP52、FKBP8和FKBP12基因具有相同的基因结构，FKBP52和FKBP12蛋白具有相同的保守结构域FkpA，而FKBP8蛋白具有2个不同的保守结构域。抗性种群小菜蛾4龄幼虫体内3个FKBP基因表达量均高于蛹期，其中FKBP12和FKBP8基因在4龄幼虫中的表达量最高，显著高于其他龄期和蛹期。FKBP8基因在抗性种群小菜蛾中肠和表皮中的表达量显著高于敏感种群，分别是敏感种群的3.2和3.7倍。【结论】FKBP52、FKBP8和FKBP12基因在氯虫苯甲酰胺抗性种群小菜蛾中均过量表达，其中FKBP8基因在高抗氯虫苯甲酰胺种群小菜蛾的中肠高表达，表明其可能通过过量表达参与小菜蛾对氯虫苯甲酰胺的抗药性。
关键词： FK506结合蛋白 FKBP基因 小菜蛾 氯虫苯甲酰胺 时空表达特性 抗药性
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桑叶食品不良风味的形成与改良技术研究进展
《蚕业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：桑叶是我国传统的药食两用植物原料，富含多种营养成分和功能成分，在食疗养生和中医临床上应用广泛。目前，通过干燥、打浆、发酵等加工方式生产的桑叶食品普遍存在草腥味特征的不良风味，严重影响了其食用品质，限制了其食用化产品的开发。文中综述了品种、成熟度、加工工艺对桑叶食品风味品质的影响及桑叶食品风味品质改良技术的研究进展，以期为优质桑叶食品加工提供参考。
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穿心莲叶绿体基因组密码子偏好性分析
《分子植物育种 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：本研究对穿心莲叶绿体基因组密码子使用偏性进行了分析，并探究造成密码子偏好性的主要影响因素。利用软件R Studio、Excel 2019和在线软件CUSP、Codon W 1.4.2等对筛选出的53个蛋白编码区进行计算分析，得到了53个编码蛋白质的基因序列（coding DNA sequence, CDS）的碱基组成和有效密码子数（effective number of codon, ENC），以及通过相对同义密码子使用度（relative synonymous codon usage, RSCU）分析确定了最优密码子。结果表明，穿心莲GCall平均含量为38.52%，其中第1、2位碱基的GC含量均远高于第3位碱基；ENC值的平均值为48.024，且ENC值大于45的占75.47%，穿心莲偏性较弱；通过ENC-plot绘图分析、PR2-plot绘图分析以及中性绘图分析确定了密码子偏好性在主要受到选择的影响的同时还受到突变因素影响；共确定了UUU、UUA、CUU等18个最优密码子，均为A/U结尾。该研究为完善穿心莲叶绿体基因组学、植物鉴定等方面提供数据参考。
关键词： 穿心莲(Andrographis paniculata) 密码子偏性 叶绿体基因组 最优密码子
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气相色谱-氢火焰离子化测定脂肪酸甲酯的响应机理与定量规律
《食品科学 》 2024 EI 北大核心 CSCD
摘要：针对国内外现行标准中气相色谱-氢火焰离子化检测器(gas chromatography-flame ionization detector,GC-FID)测定脂肪酸甲酯(fatty acid methyl esters,FAME)定量方法的不足,本实验通过理论推导和实验验证,从仪器、色谱柱、分流比、标准物质方面系统研究利用GC-FID分析37种FAME的响应规律、理论模型及实验干扰因素,提出"质量系数"和"关联因子"概念,揭示实验关联因子(experimental relevance factors,FFE)和理论关联因子(theoretical relevance factors,FFT)的函数关系和等值性条件,并经多个实验证实了关联因子的稳定性,发现当脂肪酸碳数大于10时,可充分利用理论质量系数(theoretical quality coefficient,QCT)和FFT对FAME进行相对或绝对定量;当脂肪酸碳数小于10时,可以通过现配FAME标准物质等方法精确测定实验质量系数(experimental quality coefficient,QCE)和实验关联因子FFE,并用此校正FAME的量进行定量,不仅能够提高定量结果的准确性,而且能够增加标准物质的使用时效以及节省标准物质的使用量.
关键词： 脂肪酸甲酯 甲酯化 气相色谱-氢火焰离子化检测 质量系数 关联因子
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东革阿里提取物对红火蚁工蚁的生物活性研究
《植物保护 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为明确东革阿里Eurycoma longifolia提取物对红火蚁Solenopsis invicta工蚁的防治效果，本研究采用水试管喂毒法测定了其主要成分苦木苦味素对红火蚁工蚁的毒杀活性和行为能力的影响。结果表明，喂毒后1～10 d,苦木苦味素化合物ep6对红火蚁工蚁的毒杀活性与处理时间和浓度呈正相关，20 mg/L浓度下处理10 d后的死亡率为77.78%。ep6对红火蚁工蚁的聚集率、抓附率、行走率、爬杆率和食物识别率有显著抑制活性，但对红火蚁食物消耗率基本没有显著影响。20 mg/L浓度下处理10 d的聚集率、抓附率、爬杆率、行走率、食物识别率和食物消耗率与对照相比分别降低了73.86、50.27、44.99、27.78、6.67和10.81百分点。苦木苦味素化合物对红火蚁工蚁具有良好的毒杀和抑制行为活性。
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H9N2亚型禽流感病毒感染鸡呼吸道应答模式研究
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应.[方法]将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100 μL/只(108 EID50/100 μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡的临床特征,采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品;感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化,收集气管灌洗液、气管和肺脏组织;通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量;应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律,通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性;通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平.[结果]H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征,但感染后1~5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸,且感染3 d后病毒载量最高,感染5 d后检测不到病毒核酸;感染5 d时,在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸,其中前两者载量高于肺脏;血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多,感染后5~9 d维持较高水平,且具有较强的病毒中和活性;血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势;但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低,且感染前后无明显变化.[结论]本研究成功建立了 H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型,确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位,H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子,可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素.本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础.
关键词： H9N2亚型禽流感病毒 呼吸道感染 免疫应答 模型评价
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东海近远岸浮游细菌多样性比较及其影响因素研究
《海洋渔业 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：浮游细菌是海洋微食物环的重要组成部分，在地球水体生态系统物质循环、蓝碳、藻菌互作及维持海洋生态平衡等过程中发挥着关键驱动作用。为探究东海不同海域浮游细菌的分布特征及其影响因素，利用16S rRNA高通量测序技术，解析了冬季东海近远岸11个站位的浮游细菌丰度差异及对其主要影响环境因素。结果表明，调查海域的近岸浮游细菌种类主要包括变形菌门、拟杆菌门、放线菌门和厚壁菌门，其中2个优势属(丰度>5%)为假交替单胞菌属(22.33%)和盐单胞菌属(5.09%)。而其远岸浮游细菌类群则主要由变形菌门、拟杆菌门和放线菌门组成，其5个优势属为假交替单胞菌属(12.30%)、食链菌属(9.98%)、弧菌属(8.67%)、海水单胞菌属(6.09%)及假单胞菌属(5.73%)。多样性指数分析结果表明，调查海域近岸浮游细菌丰度明显高于远岸海域；离岸距离、海水盐度及溶氧量是影响调查海域浮游细菌群落多样性差异的主要环境因素。在所解析的5个属的标志细菌物种中，其中4个属即盐单胞菌属(Halomonas)、极地杆菌属(Polaribacter)、Krokinobacter属和Fluviicola属的物种丰度与离岸距离和盐度均呈正相关(P<0.05),而与溶氧量呈负相关(P<0.01);而小红卵菌属(Rhodovulum)的物种丰度与离岸距离(P<0.05)和盐度(P<0.01)均呈负相关，与溶氧量呈正相关(P<0.001)。研究结果可为进一步探究东海浮游细菌的生态学功能提供科学参考。
关键词： 东海 浮游细菌 物种多样性 环境因素 16S rRNA高通量测序
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棉籽蛋白的营养价值及其在动物饲料中的应用研究进展
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：由于畜禽水产养殖业的快速发展,优质饲料蛋白面临需求量快速增加、原料价格上涨和品质参差不齐等问题,寻找优质的替代蛋白成为解决问题的关键.棉籽蛋白作为一种优质蛋白在动物饲料中广泛使用,蛋白质含量可以达到40%以上,资源丰富且价格低廉,但其存在的抗营养因子限制了其在生产中的应用.随着棉籽蛋白生产工艺的不断发展,通过合理有效的科学技术手段去除棉籽蛋白的抗营养因子并进一步优化其营养组成,其营养价值和适口性不断提高.合理利用棉籽蛋白能在保证动物生长性能的同时可以大幅降低动物饲料成本,但关于棉籽蛋白在不同养殖动物和生长阶段的适宜添加量和添加形式,对动物吸收、代谢、生理功能的影响及作用机制研究尚未明确.作者阐述了棉籽蛋白的营养价值、生产工艺、替代饲料蛋白源的研究现状以及影响棉籽蛋白利用价值的因素,为棉籽蛋白的合理使用和进一步提高棉籽蛋白利用价值提供参考.
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不同砧木嫁接番茄对酶活和激素含量的影响
《广东农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究茄果类作物嫁接的亲和性表现，探究不同砧木嫁接番茄接穗后接口处的生理生化反应。【方法】以番茄接穗自嫁接(TS/TS)为对照，与番茄接穗嫁接番茄砧木(TS/TR)、番茄接穗嫁接茄子砧木(TS/ER)、番茄接穗嫁接辣椒砧木(TS/PR)进行对比，系统评估各嫁接组合在嫁接后不同时间节点的多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)活性，总酚、总类黄酮、丙二醛(MDA)、生长素(IAA)、细胞分裂素(CTK)及赤霉素(GA)、脱落酸(ABA)、茉莉酸(JA)、水杨酸(SA)含量变化。【结果】研究发现，TS/TS、TS/TR、TS/ER组合亲和性较好，TS/PR组合亲和性差，其中TS/PR组合在嫁接24 d后接口处总酚、总类黄酮、MDA含量分别为2.26 mg/g、1.88 mg/g、6.51 μmol/L，而TS/TS组合下三者分别为0.65 mg/g、0.26 mg/g、2.66 μmol/L。自嫁接及亲和性较好的TS/TR、TS/ER组合，接口处总酚、总类黄酮、MDA含量显著低于TS/PR组合，接口氧化应激程度较小。而TS/TR、TS/ER组合在生长阶段接口处总酚、总类黄酮、MDA含量显著高于TS/TS组合。对接口处酶活性及相关物质含量进行主成分分析，发现同种嫁接与异种嫁接在接口处氧化相关指标上具有显著差异。测定不同嫁接组合接口处6种激素后发现，自嫁接接口处CTK含量最低、JA含量最高，TS/PR组合接口CTK含量最高、JA含量最低。对6种激素含量进行相关性分析，发现不同嫁接组合接口处JA与SA含量呈极显著正相关，CTK与ABA含量呈极显著正相关；CTK与JA含量呈极显著负相关，ABA与JA含量呈显著负相关，SA与CTK含量呈显著负相关。【结论】番茄嫁接苗接口处的生理生化状态与嫁接亲和性有关，砧穗亲和性好，其接口处氧化应激程度低，亲和性越差的组合其氧化应激程度越高，且嫁接亲和性不仅体现在嫁接后能否正常生长，还体现在砧木与接穗嫁接后的共生过程。嫁接接口处的激素含量与砧穗亲和性存在关联，亲和嫁接组合接口处JA、SA含量较高，不亲和嫁接组合中ABA、CTK含量较高。
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2型鹅星状病毒VP27蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
《中国家禽 》 2024 北大核心
摘要：为进一步研究2型鹅星状病毒（GAstV-2）及其纤突结构蛋白VP27，通过基因密码子优化合成构建pCZN1-VP27原核表达质粒；利用大肠杆菌系统通过IPTG诱导表达VP27蛋白后进行纯化，以纯化的VP27蛋白免疫新西兰白兔，收获抗血清并纯化得到VP27多克隆抗体；分别通过间接ELISA和SDS-PAGE分析抗体的效价和纯度；将GAstV-1、GAstV-2病毒液接种LMH细胞，通过免疫印迹和免疫荧光试验对VP27多克隆抗体进行验证；将GAstV-2阳性或阴性的临床病料组织研磨液接种LMH细胞，利用VP27多克隆抗体进行免疫荧光检测以评价其临床应用效果。结果显示：纯化后的VP27多克隆抗体效价高达1∶3 280 500，纯度高于85%。免疫印迹试验结果显示，GAstV-2感染组在35 ku处出现特异性条带，GAstV-1感染组则未出现该条带；免疫荧光结果显示仅GAstV-2感染组可观察到特异性荧光；临床病料组织的免疫荧光试验结果显示，GAstV-2阳性的病料组织均可出现特异性荧光，GAstV-2阴性的病料组织未出现荧光。研究获得了可特异性识别GAstV-2的VP27多克隆抗体，为深入研究VP27蛋白在GAstV-2的感染和致病机制中的作用提供生物材料，也为建立GAstV-2抗原免疫检测技术奠定基础。
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