科研产出
2013年广东水禽产业发展形势与对策建议
《广东农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：2012年,广东水禽养殖仍主要集中在珠三角地区(鸭46.2%、鹅51.5%,略低于2011年比例),但呈现出西迁的趋势,茂名鸭饲养量赶超广州跃居全省第1位。全省采取多种措施积极应对H7N9流感等事件,但仍未能改变水禽产品价格下降的趋势。为推动广东水禽业进一步发展,重点做好以下工作:(1)加大政府对水禽业的监控力度和扶持,建设水禽生产信息体系;(2)探索水禽业补贴机制,推广水禽生产保险、风险基金和收储制度;(3)推广生态养殖模式,推动水禽养殖向现代生产方式转型升级;(4)改变活禽交易销售模式,加快冷链物流设施建设,鼓励冰鲜禽肉消费;(5)加强水禽及其关联产业的经济学研究。
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绿盲蝽超气门蛋白ALUSP的克隆、原核表达及纯化
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆绿盲蝽超气门蛋白基因(ALUSP),获得原核表达的重组蛋白,为ALUSP的功能研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽蜕皮及变态发育的机制提供理论依据。【方法】根据已知昆虫的USP基因序列设计简并引物,获得ALUSP的保守序列;再通过设计特异性引物,利用RACE方法,分别克隆ALUSP 5′及3′段序列,然后通过拼接获得ALUSP全长序列;应用生物信息学方法,对ALUSP基因序列特征及其所编码蛋白的特性进行分析,建立系统进化树;将含有ALUSP的T载体经EcoR I及Xho I双酶切,构建ALUSP原核表达载体pEGX6P1-ALUSP,将该表达载体分别在15、25、30和37℃条件下进行诱导表达,再通过GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析后获得ALUSP功能区纯化蛋白。【结果】ALUSP开放阅读框长1 005 bp,编码334个氨基酸,预测分子量56.63 kD,理论等电点8.42;序列特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有超气门蛋白的典型特征,由A/B域(249 bp)、C域(198 bp)、D域(69 bp)和E域(489 bp)组成,其中C域高度保守,包含2个锌脂结构并含有1个P-盒和1个D-盒,且含有由8个氨基酸构成的核定位信号,D域含有1个识别DNA元件的T-盒,E域含有1个由8个α螺旋和1个β折叠形成袋状结构;氨基酸比对结果表明,ALUSP的氨基酸序列与稻绿蝽USP序列一致性最高(57.82%),与其他昆虫的USP序列一致性较低,如膜翅目的 Melipona scutellaris(46.05%)、Scaptotrigona depilis(45.94%);系统进化树分析结果显示,半翅目与膜翅目、直翅目等昆虫的USP较为分化,位于不同分支,ALUSP与稻绿蝽USP进化关系最近,可能来源于共同的祖先。EcoR I和Xho I双酶切的重组克隆载体可成功亚克隆到pEGX-6P-1载体上,命名为pEGX6P1-ALUSP;经37℃、1.0 mmol·L-1的IPTG诱导的pEGX6P1-ALUSP重组质粒可特异性表达1个约65 kD的蛋白,并且该重组ALUSP蛋白主要以包涵体形式存在;收集含有目的基因的菌株进行GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析,最后进行复性和纯化后在65 kD附近仅出现1条清晰的特异性条带,表明已得到纯化的靶蛋白。【结论】克隆了ALUSP全长,其具有昆虫超气门蛋白的典型特征,并获得了原核表达的重组蛋白。
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鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ的原核表达及免疫原性鉴定
《南方农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTUMV)E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性,为进一步研究GTMUV E蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMUV E蛋白结构域I的编码基因(EI基因),并与携带GST标签的p GEX-4t-1载体连接,转入大肠杆菌后经诱导表达获得融合蛋白,并以Western blotting鉴定融合蛋白是否有免疫原性。【结果】合成获得的E1基因片段为411 bp,将其插入p GEX-4t-1载体可构建重组表达质粒p GEX-4t-1-EI。阳性重组菌经1 mmol/L IPTG诱导5 h后,融合蛋白的表达量达最高峰,且以包涵体形式存在,分子量约41.0 k Da。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与GST标签抗体和E蛋白阳性血清均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域I可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于GTMUV血清学检测试剂盒的研发。
关键词： 鹅坦布苏病毒 E蛋白 结构域Ⅰ 原核表达 免疫原性
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不同垫料组成对猪用发酵床细菌群落的影响
《农业环境科学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了解垫料基质中细菌的群落结构多样性,应用PCR-DGGE技术对发酵床7种不同垫料(锯木屑、稻壳、酒糟、菌糠、醋糟、稻草、稻壳炭)的细菌群落结构进行了研究,根据DGGE指纹图谱,对它们的细菌群落多样性和优势条带进行了分析。结果表明,垫料样品的细菌多样性指数、丰富度均有所不同,酒糟垫料组细菌多样性指数最高,稻草垫料组细菌多样性指数最低。全锯木屑与50%稻壳相似性较高而聚为一类,与50%菌糠次之,与50%稻草的相似性最低。在垫料基质中检测到的菌群主要是节杆菌属(Arthrobacter sp.)、Amaricoccu sp.、马杜拉放线菌属(Actinomadura sp.)、芽孢杆菌属(Bacillales sp.)、梭菌属(Clostridium sp.)、肠杆菌属(Escherichia sp.)、细杆菌属(Microbacterium sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、红球菌属(Rhodococcus sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.),以及一些未知的菌群。垫料组成是影响发酵床垫料微生物构成的重要因素,稻壳、菌糠作为垫料可部分替代锯木屑,而对发酵床垫料的微生物区系影响较小。
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晚熟桃新品种‘霞晖8号’
《园艺学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：‘霞晖8号’是以‘朝晖’为母本,‘瑞光18号’为父本杂交育成的晚熟桃新品种。花蔷薇型,有花粉,自花结实,丰产稳产。果实圆形,平均单果质量246 g,大果390 g;成熟时果面80%以上着红色,外观美丽;果肉白色,硬溶质,风味甜香,可溶性固形物含量13.4%,可溶性糖10.15%,可滴定酸0.21%,粘核。在南京地区8月上中旬成熟,果实生育期132 d。
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稻曲病菌致病力丧失突变菌株B-1015的T-DNA标记基因的克隆
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)致病力丧失突变菌株B-1015,克隆和分析T-DNA插入位点的侧翼序列,为稻曲病菌的致病机制研究提供参考。【方法】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体B-1015菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及致病力等生物学表型。用PCR检测T-DNA在B-1015基因组中插入的稳定性,用Southern杂交检测T-DNA插入的拷贝数,用hiTail-PCR扩增T-DNA侧翼序列,用RACE PCR克隆T-DNA标记基因,半定量RT-PCR分析所克隆基因的表达情况。【结果】与野生菌株P1相比,突变菌株B-1015的生长速率和产孢量都有较明显的降低,孢子萌发率无明显差异,致病力丧失。分子检测结果表明T-DNA在B-1015基因组中为稳定的单拷贝插入。hiTail-PCR得到的T-DNA两端侧翼序列在野生型菌株基因组上不相连,RACE PCR在两边的侧翼序列上分别克隆得到Uvt-1015R和Uvt-1015L。预测分析表明Uvt-1015R包含一个长度为948 bp的开放阅读框(open reading frame finder,ORF),可编码295个氨基酸,5′端非编码区(5′-untranslated regions,5′-UTR)长度为341 bp,3′端非编码区(3′-untranslated regions,3′-UTR)长度为271 bp。Uvt-1015L包含一个长度为351 bp的ORF,可编码116个氨基酸,5′-UTR为31 bp,3′-UTR长度为174 bp。在已知功能的蛋白中检索,没有发现与Uvt-1015R和Uvt-1015L基因同源的蛋白。序列分析发现T-DNA插入在两个基因序列中间,RT-PCR结果显示,在突变菌株B-1015中,Uvt-1015R表达量下降,Uvt-1015L不表达。【结论】稻曲病菌突变菌株B-1015致病力等重要生物学表型发生改变,可能是由于T-DNA的插入导致了B-1015基因组重排和Uvt-1015R、Uvt-1015L基因结构的破坏。
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辣椒胞质雄性不育相关基因的克隆及表达
《江苏农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为分离辣椒细胞质雄性不育基因,并阐明其不育机理,本研究以辣椒细胞质雄性不育系21A及保持系21B的线粒体DNA为材料进行SRAP分析。结果显示,在21A中获得3条多态性条带。对多态性条带回收、克隆和测序分析后发现,这3个片断(分别命名为CMS721、CMS394、CMS285)在GenBank中都与能量代谢途径有关。针对序列特征设计SCAR引物,对21A和21B的基因组DNA进行扩增验证,3对引物只在21A中扩增出目的条带,表明已成功地将SRAP标记转化为SCAR标记。利用荧光定量PCR技术对CMS721、CMS394和CMS285基因在21A不同组织(根、茎、叶和花)中的表达情况进行了分析。结果表明:3个基因只在不育系中表达,且在不同的组织中均有表达,但表达量差异很大,其中基因CMS721表达量在中花蕾中迅速下降,推测该基因控制辣椒花药中与能量代谢相关的蛋白质的表达,从而引起小孢子发育障碍,最终导致雄性不育。
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桃同株花果茎叶杂色材料的获得和特征特性初探
《园艺学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：在观赏桃育种过程中获得了1份特殊材料‘PCM-1’,花为粉—白杂色,叶片为紫红—绿杂色,嫩茎表面有紫红色条带或细点,幼果表面有不规则红色斑块或细点。从杂色性状的形态学特性、无性繁殖表现和有性遗传规律对其进行了初步探索,并进行了其亲本和无性系的SSR鉴定。连续6年观察发现‘PCM-1’的杂色性状稳定;徒手切片观察到杂色均出现在表层的第一层细胞。嫁接繁殖表明杂色性状稳定(97.4%),但无性系中也能分离出较低比例的纯色株系(2.6%);花、果、叶、嫩茎4个部位的杂色具有同步性。以‘PCM-1’为母本,与花色纯白、叶色纯绿的父本杂交,后代中能够出现12.2%~24.7%的杂色单株。通过SSR鉴定发现‘PCM-1’的母本为‘红粉佳人’;经324个SSR标记鉴定,‘PCM-1’(杂色)、‘PCM-1R’(纯红)和‘PCM-1G’(纯绿)3个无性系间未发现等位基因差异。
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