科研产出
酶解改性对小麦醇溶蛋白致敏性的影响与工艺优化
《河南农业科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：小麦醇溶蛋白(GLI)是小麦中的主要过敏原,为降低其致敏性,研究酶法改性对GLI致敏性的影响,并对酶解工艺进行优化.首先,以致敏性特征值OD450为评价指标,筛选出碱性蛋白酶和复合蛋白酶进行同步酶解.然后以OD450和水解度为指标进行单因素试验,并通过响应面试验优化酶解工艺,得到降低GLI致敏性的最佳酶解工艺:酶添加量为3 080 U/g,底物质量浓度为32 g/L,酶解温度为50.5℃,酶解pH值为7.48,酶解时间为4h.在此条件下,OD450由未处理的1.013 2降至0.363 5.SDS-PAGE和Tricine-SDS-PAGE电泳分析显示,双酶酶解比单酶酶解有更高的酶解效率.ELISA和Western blot分析显示,酶法改性降低GLI致敏性的效果明显,且最优酶配方(双酶)比单酶降低致敏性的效果更佳.
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非洲猪瘟病毒H240R蛋白单克隆抗体的筛选与鉴定
《动物医学进展 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)H240R蛋白单克隆抗体,首先构建原核表达质粒pET-29b-H240R,再进行蛋白表达与纯化,随后免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备、间接ELISA方法筛选获得单克隆抗体.结果显示,共获得4株杂交瘤细胞株,腹水效价均高于1:40000;亚型鉴定结果显示,3株单克隆抗体(12D6、21G3、8G7)重链亚类为IgG2b,13D2重链亚类为IgG1,轻链亚类均为k.Western blot和Dot blot鉴定结果表明,21G3、13D2株单克隆抗体识别的抗原表位为线性表位,而12D6和8G7识别的是构象表位.间接免疫荧光试验(IFA)结果显示,4株单克隆抗体均能特异性识别HEK293T细胞中表达的H240R蛋白.制备了ASFV H240R蛋白单克隆抗体,为H240R蛋白的表位和功能研究奠定了基础.
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黄淮海中南部玉米氮高效品种筛选及产量性状分析
《玉米科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：以40个玉米品种为研究对象,采用田间试验方法,对10个重要性状在2个供氮水平(高氮水平270 kg/hm2;低氮水平,不施氮)进行调查、计算和分析,对玉米氮效率类型进行划分和评价.结果 表明,除穗行数外,其他9个性状在2个供氮水平上均存在极显著差异.相关分析表明,在2个供氮水平下,子粒产量与干物质积累量、穗长、行粒数、穗粒数、百粒重和单穗粒重均呈显著正相关.通径分析表明,在低氮水平下,对子粒产量直接作用较大的性状依次为穗粒数>百粒重>单穗粒重>行粒数;在高氮水平下,依次为单穗粒重>穗粒数>行粒数>百粒重.根据2个供氮水平下的子粒产量,将供试玉米品种分为4种类型,即双高效型、低氮高效型、高氮高效型和双低效型,分别占比30%、15%、27.5%和27.5%.
关键词： 玉米;子粒产量;氮效率类型;品种筛选
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甘蓝型油菜组蛋白乙酰转移酶Bn-HAM2基因的克隆及生物信息学分析
《分子植物育种 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：HAM2基因在植物生长、发育和应激反应中起重要的调控作用.本研究以油菜品种'美国油王88'和'南油868'为材料,通过PCR技术扩增HAM2完整编码区,利用生物信息软件进行序列分析,并通过PlantCARE对其启动子序列进行分析.结果表明,Bn-HAM2-MY88和Bn-HAM2-NY868的开放阅读框长度均为1 326 bp,编码441个氨基酸,分子量分别约为50.81 kD和50.86 kD,理论等电点分别为7.88和7.56;亚细胞定位预测分析发现该基因编码的蛋白主要分布于细胞核;功能结构域分析结果证实,Bn-HAM2-MY88和Bn-HAM2-NY868蛋白都包含有保守的MYST结构域,属于MYST亚家族成员;多序列比对及进化树分析结果表明,Bn-HAM2-MY88和Bn-HAM2-NY868与NCBI中公布的甘蓝型油菜组蛋白乙酰转移酶氨基酸序列(XP_013715766)相似性最高,分别为99.77%和100%,与拟南芥组蛋白乙酰转移酶序列(KAG7554717.1)相似性高达90%以上;启动子分析表明,除含有真核生物启动子TATA和CAAT固有元件外,还存在W-box、P-box、TGA-element、TC-richrepeats等多种响应逆境胁迫的顺式元件.本研究结果为进一步研究Bn-HAM2-MY88和Bn-HAM2-NY868的生物学功能提供了基础资料.
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不同品种香菇子实体游离氨基酸组成的主成分分析及综合评价
《河南农业科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为科学评价不同香菇品种的营养特征与口感风味,以河南省常规栽培的14个香菇品种为研究对象,采用氨基酸自动分析仪测定其游离氨基酸,并系统比较了 14个香菇品种的游离氨基酸组分比例及呈味特征.结果表明,14个香菇品种中游离氨基酸含量丰富,多数含17种氨基酸,总含量为10.91~20.57 mg/g,不同品种间差异较大.14个香菇品种中必需氨基酸/(必需氨基酸+非必需氨基酸)均接近40%,必需氨基酸/非必需氨基酸接近或大于60%,是理想的蛋白质来源.呈味氨基酸中,豫香1号甜味、苦味及芳香族氨基酸含量均最高.谷氨酸对香菇风味的影响最大,其味道强度值(TAV)在9.29~20.06.主成分和聚类分析结果一致,14个香菇品种被显著分为4类(欧氏距离=2.5),其中,豫香1号综合品质最好,为第1类;农香1号、南山1号和香1024综合品质次之,聚成第2类;香25、香LS、香28、雨花3号、L18、香808、香9608、香931、韩香1号聚成第3类;农香3号综合品质最差,为第4类.该结果较好地反映出香菇不同种质间的差异性.
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不同基因型烟草对氯离子吸收、积累与分配的差异性分析
《河南农业科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为明确不同基因型烟草氯离子吸收、积累与分配的差异，筛选出氯高吸收和低吸收基因型的烟草种质，采用盆栽试验，选取9个烤烟品种为试材，设置3个施氯水平处理（0、50、100 mg/kg），分析烟草成熟期不同部位氯离子吸收、积累、转运、分配特性。结果表明，随着施氯量增加，烟草各部位氯离子含量上升，烟草各部位氯离子含量表现为脚叶＞下部叶＞中部叶＞上部叶＞茎＞根，其中，K326叶片总体氯离子含量和积累量均较高，分别为206.4 mg/kg和16.58 mg；渝金香1号中、上部叶氯离子含量较低，分别为150.09mg/kg和95.00 mg/kg，脚叶（1.35 mg）和下部叶（4.63 mg）氯离子积累较高；在50、100 mg/kg氯处理下，辽烟17叶片氯离子含量、积累量和转运系数较CK分别增长59.62%、95.67%,37.04%、52.49%和39.88%、89.43%，渝金香1号氯离子转运系数仅增长7.88%和12.90%，秦烟96氯离子积累量和分配率仅增长1.73%、2.04%和0.05%、0.07%，与CK相比差异不显著。总体上，在参试9个烟草品种中，秦烟96、渝金香1号烟株氯离子吸收、积累量较小，中、上部叶氯离子转运分配较少，可在土壤氯离子含量较高的烟区种植；K326、辽烟17对氯离子吸收量较大，烟株各部位氯离子含量较高，在生产上应采取相应控氯措施。
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广谱性识别H7亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体制备与鉴定
《河南农业科学 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：H7N9亚型禽流感病毒（AIV）的快速进化与变异使得其逃脱现有抗体的识别，为提供H7亚型AIV鉴别诊断所需重要材料，制备可识别H7亚型AIV HA蛋白的单克隆抗体（mAb）。采用差速离心法纯化的H7N9亚型AIV（A/Chicken/Guangdong/SW154/2015）免疫BALB/c小鼠，利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞，采用血凝抑制（HI）试验、免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和间接ELISA检测方法筛选阳性杂交瘤细胞株。结果显示，获得5株稳定分泌抗H7N9 AIV HA蛋白mAb的杂交瘤细胞，腹水ELISA效价均为1∶1 000 000；其中，4株mAb的重链为IgG1,1株mAb的重链为IgG2b，轻链均为κ链。特异性测定结果显示，5株mAb仅与H7亚型AIV反应，不与其他亚型流感病毒发生反应；广谱性测定结果显示，5株mAb均可与不同年份分离出的H7亚型AIV发生反应；HI结果显示，腹水针对H7-Re3抗原株的HI效价为7 log2～12 log2;MDCK细胞微量中和试验结果显示，5株mAb均具有中和活性；Dot blot检测结果显示，5株mAb均可识别H7-Re2抗原株和H7-Re3抗原株；Western blot检测结果表明，5株杂交瘤细胞培养上清均在63 ku附近出现1条特异性的蛋白质条带，说明这5株mAb均识别线性表位。综上，成功制备了5株广谱性识别H7 AIV HA蛋白的单克隆抗体。
关键词： 禽流感病毒 H7N9 单克隆抗体 广谱性 中和活性
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4个禾本科植物NAC基因家族的系统进化及其在玉米中的干旱表达谱分析
《干旱地区农业研究 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：利用生物信息学方法,对4个禾本科物种玉米、高粱、二穗短柄草和水稻的NAC基因家族进行鉴定和系统进化分析.结果表明:4个禾本科物种共556个NAC基因可以聚类为6个进化枝;物种内NAC转录因子有相似的理化性质,但在进化枝上又表现出差异,进化枝1、2、3和进化枝4、5、6分别表现出相似的相对分子质量,进化枝1、2、3、5表现出相似的等电点,进化枝4、6表现出相似的等电点;4个物种共鉴定出27个含跨膜结构域的NAC基因,并且大部分(88.9%)都位于进化枝4上;使用溯源法共鉴定出174个禾本科祖先基因,每个物种NAC基因丢失和保留都存在差异;基因复制分析发现,串联复制对禾本科NAC基因家族扩张贡献明显(20.3%,113/556),而玉米的大片段复制事件对玉米NAC基因家族扩张贡献明显(30.5%,50/164);干旱胁迫下玉米转录表达分析鉴定出51个差异表达基因,且不同组织内的差异表达基因数目存在差异,叶和雌穗内的差异表达基因数目多于雄穗.
关键词： 禾本科植物 系统进化 NAC基因家族 干旱胁迫 玉米 基因表达
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红花类黄酮3-O-糖基转移酶基因CtUF3GT的克隆及功能鉴定
《药学学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：UDP-葡萄糖:类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶(UF3GT)以黄酮醇、二氢黄酮醇或花青素作为受体,以UDP-葡萄糖作为供体催化生成类黄酮3-O-糖苷类化合物.本研究以红花为材料,基于同源比对和转录组数据分析,筛选并克隆得到1条UF3GT基因命名为CtUF3GT(GenBank登录号OM948976).CtUF3GT开放阅读框为1 446 bp,编码481个氨基酸,推测其分子质量为52.36 kD,理论等电点为5.33.生物学信息分析表明CtUF3GT具有植物UGT家族成员特有的PSPG基序,多重序列比对显示,CtUF3GT与来自菊科植物中的UF3GT同源性较高,系统进化分析表明CtUF3GT与其他物种中已鉴定的UF3GT聚为一类.体外催化功能鉴定显示,CtUF3GT催化山柰酚和槲皮素生成山柰酚-3-O-葡萄糖苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷,并且对山柰酚具有较高的底物偏好性;qRT-PCR分析表明,UF3GT基因在花中表达量最高,叶中次之,在苞片和茎中表达量极低,在根中无表达.在花发育的不同时期,UF3GT基因的表达量呈现先升高后降低的趋势,白色和红色红花两个品种中CtUF3GT基因的表达量在花发育的Sl、S2、S5、S6、S7时期均差异极显著(P<0.01),其中在S6期、S7期,白色红花中CtUF3GT基因表达量是红色红花中的5.3倍和3.1倍.该研究为进一步探索CtUF3GT基因在红花类黄酮次生代谢产物合成积累机制中的作用奠定了基础.
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