科研产出
慢病毒介导稳定表达Cas9蛋白的鸡成纤维细胞系构建及其活性验证
《广东农业科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选稳定表达Cas9蛋白的鸡成纤维细胞系（DF-1），并基于单链退火修复机制（Single Strand Annealing, SSA）的报告载体系统，检测DF-1细胞系中的Cas9核酸酶活性。【方法】将携带Cas9蛋白的慢病毒载体质粒与辅助质粒一起转染293T细胞包装慢病毒，收集慢病毒Cas9上清液感染DF-1细胞，经抗生素筛选得到稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞，分别用PCR和Western blot验证阳性DF-1细胞表达Cas9蛋白的情况；选择鸡卵清白蛋白（OVA）基因的sgRNA序列，将sgRNA退火产物克隆至pYP152构建sgRNA表达载体，并在sgRNA靶位点两端设计引物扩增OVA基因靶片段，将靶片段克隆至报告载体pCMV-SSA-mCherry-HindⅢ，以破坏mCherry蛋白的表达，之后再将sgRNA表达载体与SSA报告载体共同转染稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞，最后在荧光显微镜下分析不同稳转株对mCherry蛋白表达的修复情况。【结果】经抗生素筛选得到27株稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞系，采用PCR扩增稳转细胞基因组，结果显示这些细胞具有Cas9蛋白基因序列，Western blots试验结果显示上述稳转细胞株均表达Cas9蛋白；sgRNA表达载体与mCherry-SSA报告载体共转后，通过荧光显微镜观察发现筛选到的稳转细胞株均可恢复报告载体中mCherry蛋白的表达。【结论】成功构建了具有切割活性的稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞系，可为后续在稳定表达Cas9蛋白的DF-1细胞系上开展鸡相关功能基因研究提供基础材料。
关键词： 稳定表达 慢病毒 CRISPR/Cas9 SSA修复 载体构建 DF-1
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广东省稻水象甲生活史及越冬规律
《昆虫学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]明确广东省稻水象甲Lissorhoptrus orvzophitus生活史、越冬生境、发生规律及寄主植物和天敌种类,为这一害虫的科学防治提供指导.[方法]2019年3月-2021年4月通过实地调查、室内笼罩饲养观察和卵巢解剖研究稻水象甲在广东的生活史和越冬生境;通过对稻水象甲成虫中肠内容物进行分子检测探明其越冬过渡寄主植物;利用特征序列扩增区(sequence characterized amplified region,SCAR)标记技术明确稻水象甲的主要天敌种类.[结果]2019年3月-2021年4月稻水象甲在广东双季稻区一年发生2代,具有越冬和越夏习性.广东稻水象甲经历一个完整世代需要(140.86±1.05)d,幼虫历期为20 d左右.广东稻水象甲以成虫越冬,越冬生境模式为稻田-过渡带(草地)-沼泽地(水草丰盛),且越冬期稻水象甲成虫卵巢存在滞育现象,发育等级I级.稻水象甲成虫中肠内容物分子检测发现,其越冬期主要的过渡寄主植物为再生稻及李氏禾Leersia hexandra.基于SCAR的PCR结果表明,游猎型蜘蛛沟渠豹蛛Pardosa laura为稻水象甲的主要天敌.[结论]稻水象甲在广东一年发生2个世代,主要于沼泽地中越冬,李氏禾和再生稻为其越冬期的主要过渡寄主,越冬地的主要天敌为沟渠豹蛛.这些发现对广东地区稻水象甲疫情精准防控具有理论指导意义.
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采前钨酸钠处理对龙眼果实退糖特性和抗氧化能力的影响
《食品研究与开发 》 2023 北大核心
摘要：为延缓龙眼退糖及品质劣变的速度，从花后89 d开始，每隔7 d～10 d以500 mL/穗的清水（对照）、20 mmol/L和40 mmol/L钨酸钠连续喷施‘石硖’龙眼果实，并分析各处理对果实退糖特性和抗氧化能力的影响。结果表明，留树至花后130 d，对照和20 mmol/L Na2WO4喷施的果实可溶性固形物（total soluble solids,TSS）含量分别下降了8.69%、8.93%，而40 mmol/L Na2WO4处理组果实TSS含量仅下降4.10%，退糖被明显延缓。与对照组相比，40 mmol/L Na2WO4处理后的龙眼果皮总类黄酮含量在花后130 d增加2.32 mg/g，总酚含量增加3.54 mg/g，留树中后期过氧化物酶（peroxidase,POD）活性明显提高；同时，40 mmol/L Na2WO4处理后的龙眼果肉总类黄酮含量在花后130 d增加0.02 mg/g，总酚含量增加0.12 mg/g，苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia lyase,PAL）活性明显提高。因此，40 mmol/L Na2WO4喷施可明显延缓‘石硖’龙眼退糖并维持抗氧化物质的含量。
关键词： ‘石硖’龙眼 退糖 钨酸钠 总类黄酮 总酚 苯丙氨酸解氨酶 过氧化物酶
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天然低共熔溶剂提取米糠酯酶工艺优化及其纯化与酶学性质研究
《食品工业科技 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：目的：采用天然低共熔溶剂（Natural deep eutectic solvents,NADES）提取米糠酯酶并优化提取工艺参数，纯化米糠酯酶获得高纯度米糠酯酶，并探究其酶学特性。方法：合成了10种不同的NADES、选用了水浴搅拌和超声两种处理方式进行筛选，然后对提取效果最佳的NADES和方法进行单因素和响应面优化，参数包括料液比、含水量、提取温度和提取时间；将最优提取工艺得到的粗酶液通过阴离子交换树脂DEAE纯化，然后进行酶学性质的探究。结果：最佳提取米糠酯酶的工艺为在含有5%水分的脯氨酸-甘油（摩尔比1:2）溶剂体系中，水浴搅拌3.0 h，温度74.0℃，米糠和溶剂料液比为9:30，此时米糠酯酶活力为2.96 U。通过阴离子交换树脂DEAE纯化，获得了纯度较高的米糠酯酶，纯化倍数为1.74倍，回收率为69.40%，分子量约为35 kDa，对硝基苯酚乙酯为最适底物，最适温度和pH分别是40.0℃、pH8.0，在30.0～40.0℃和pH7.0～9.0时米糠酯酶均保持良好的稳定性。氯化胆碱-甘油、脯氨酸-甘油两种NADES对米糠酯酶的活力有较好的维持作用。结论：天然低共熔溶剂提取方式是一种简单、绿色的提取方式，可为生物活性化合物的绿色提取研究提供一些参考。
关键词： 天然低共熔溶剂 提取 响应面法 米糠酯酶 纯化 酶学性质
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鼠尾草酸的生物学功能及其在畜禽生产中的应用
《动物营养学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：在饲料禁抗令全面实施的大背景下，我国畜禽生产面临着严峻挑战，如肠道健康受损、生长性能降低、肉蛋等动物产品品质下降等。因此，天然、安全、高效的植物提取物等替抗产品成为研究热点。鼠尾草酸是一种天然的酚萜类化合物，广泛存在于鼠尾草、迷迭香等植物中。本文通过对国内外文献的分析整理，介绍鼠尾草酸的来源、提取方法与理化性质，对其抗氧化、抗炎、抑菌及脂肪代谢调节等生物学功能及其潜在的作用机理进行综述，并在此基础上探讨了鼠尾草酸及其主要来源迷迭香、鼠尾草等在畜禽生产中的应用前景，旨在为推动新型生物活性添加剂的开发及其在畜禽生产中的应用提供参考。
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水稻耐盐分子机制研究进展
《广东农业科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：水稻是世界上重要的粮食作物之一,对盐胁迫比较敏感,土壤盐碱化对水稻的安全生产造成潜在风险.盐胁迫会引起水稻的渗透胁迫和离子毒害,还会在植株中引起氧化胁迫,导致水稻品质和产量下降.由于水稻根系能吸收盐分分泌有机酸,同时具有田间持水和排水晒田的生长特性,因此水稻也是一种改良盐渍土的优良作物.因此培育耐盐水稻新品种,提高水稻耐盐性,可有效提高盐渍化耕地的生产潜力,对保障我国乃至全球粮食安全具有重要意义.近年来,数量遗传学和分子标记技术不断发展,通过遗传、生化及分子生物学等手段,挖掘出大量耐盐相关QTL和基因,对于解析水稻耐盐分子机制,利用分子标记辅助选择、基因编辑等提高耐盐水稻育种效率,均具有非常重要的意义.但目前克隆的耐盐相关基因大多采用反向遗传学方法获得,且大多是在过表达条件下表现出耐盐性,或者耐盐基因为隐性,难以在耐盐水稻育种中应用.总结近年来水稻耐盐相关基因的鉴定和挖掘研究中所取得的进展,从有机物渗透调节、离子吸收转运调节、抗氧化系统清除活性氧调节、激素调节 4 个方面综述水稻耐盐分子机制的研究进展,并探讨未来水稻耐盐性研究面临的挑战,为开展水稻耐盐分子育种提供建议.
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异亮氨酸的营养生理作用及其在猪生产中的应用研究进展
《中国畜牧兽医 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：异亮氨酸作为猪机体内重要的必需氨基酸之一，也是支链氨基酸家族的一员。异亮氨酸具有维持机体葡萄糖稳态，调节蛋白质及脂质合成、分解代谢等生理功能。饲粮中适量的异亮氨酸水平具有改善猪生长性能；改善肠道形态结构，通过促进肠道营养转运载体的表达、调节肠道菌群等功能来促进猪的肠道发育；通过促进免疫细胞增殖、提高免疫反应性物质和宿主防御肽的表达来改善机体免疫；以及改善猪胴体性状、提高猪肉品质等作用。在当前饲料价格高涨与积极推广低蛋白质低豆粕多元化饲粮的行业背景下，异亮氨酸在猪营养中的应用备受重视，其中L-异亮氨酸的生物合成技术、低蛋白质低豆粕饲粮中异亮氨酸与其他氨基酸尤其是支链氨基酸的平衡问题，以及不同生理阶段猪对异亮氨酸的营养需要量、常见饲料原料与非常规饲料原料的回肠可消化异亮氨酸参数及其动态预测模型等都是未来生产应用时值得深入研究的问题。作者对异亮氨酸的营养生理作用及其在猪生产中的营养需要和应用研究进展进行综述，以期为未来猪精准营养供给和生猪养殖的降本增效措施提供一定参考。
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厚朴酚对动物肠道健康的影响及其调控机制
《动物营养学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：动物肠道是机体重要的消化、吸收和免疫器官，同时也是机体抵御外界环境的重要防线。因而，保持肠道健康不仅可以增强动物对营养物质的消化吸收，而且对动物整体健康也十分重要，从而提高动物生产性能和生产水平。厚朴酚是一种从中药厚朴的茎皮中分离出的植物多酚类物质，在畜禽养殖生产中已被广泛应用。研究显示，厚朴酚可通过改善宿主肠道形态、调节肠道蠕动功能和增强肠道屏障功能，继而维护肠道乃至机体健康。本文主要综述厚朴酚调节动物肠道健康的作用机制，旨在为新型饲料添加剂的开发及其在畜禽生产中的应用提供参考。
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一株猪源停乳链球菌类马亚种的分离鉴定
《广东农业科学 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]停乳链球菌(Streptococcus dysgalactiae)可引起猪关节肿大和运动障碍,大大降低饲料报酬和猪场经济效益,近年研究提示停乳链球菌类马亚种(Streptococcus dysgalactiae subsp.equisimilis)是一种潜在的人兽共患病病原.对猪源停乳链球菌类马亚种进行研究,可为防治该病提供数据,具有公共卫生意义.[方法]2022 年 3 月广东省某规模化猪场出现仔猪关节肿大和跛行症状.为确定病因,无菌采集发病仔猪关节液进行细菌分离培养,对优势菌进行形态观察、生化鉴定、16S rDNA基因序列分析、小鼠致病性试验及抗生素敏感性试验,并对其毒力基因进行PCR鉴定.[结果]根据分离菌株的形态特征、生化特性,结合 16S rDNA序列测定与在线BLAST分析结果,确定其为链球菌属的停乳链球菌类马亚种.药敏试验结果表明,分离菌株对头孢曲松、头孢克洛、青霉素G、头孢氨苄、头孢吡肟、环丙沙星、磺胺异恶唑、大观霉素、恩诺沙星敏感,对丁胺卡那、多西环素、多粘菌素B、诺氟沙星、氨苄西林次敏感,而对卡那霉素、庆大霉素、链霉素、林可霉素、阿莫西林表现出耐药性.毒力基因PCR鉴定结果表明,分离菌株的基因型为eno+napr+cfb-lmb+bca-bac-scpB+cyl+.小鼠致病性试验结果表明,分离菌株导致小鼠内脏病变和死亡,具有显著的致病性.[结论]首次报道了华南地区有关致病性猪源停乳链球菌病例,研究结果为临床猪源停乳链球菌病的防治提供参考.
关键词： 停乳链球菌类马亚种 分离鉴定 药敏试验 致病性 华南地区
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