科研产出
急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析
《水产学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：根据急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)ORF 024序列设计引物,以AVNV的DNA为模板进行扩增AVNV引物酶(primase)基因,同时构建表达质粒pET32a-prim,并转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达两条蛋白条带,其中分子量为60 ku的蛋白条带与预期表达蛋白条带大小一致,另一蛋白条带分子量约为55 ku,经Western-blotting及质谱分析鉴定分子量60 ku的蛋白条带为AVNV-引物酶,而表达出的55 ku蛋白条带存在部分引物酶多肽片段。RNA结合荧光染料Pico-Green在30 min内荧光强度比较稳定,从而确定30 min为进行AVNV引物酶活性分析的最佳终止反应时间,并在引物合成实验中观察到30 min内引物酶活性较高。当使用多聚胞嘧啶寡核苷酸poly(d C)为模板时,重组引物酶能特异性催化底物GTP。0.1 mmol/L Zn2+可显著增强引物酶活性,而1mmol/L Mn2+和EDTA能抑制引物酶活性。
关键词： 引物酶 原核表达 Pico-Green核酸染料 酶学活性 多聚胞嘧啶寡核苷酸
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养殖池塘脱氮硫杆菌(Thiobacillus denitrificans)的空间分布及与相关理化因子关系研究
《中国农学通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为了研究养殖池塘中脱氮硫杆菌的分布状况及在水体中与相关理化因子的关系,分别分层采集吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)精养池塘底泥样品和水样,采用最大可然数法(MPN)对底泥和水体中脱氮硫杆菌进行定量分析,同时测定分层水样理化指标值。结果表明:底泥和水体中,随着深度增加,脱氮硫杆菌数量均逐渐减少,底泥中变化为从每克干重105数量级降到102数量级,水体中为从每毫升103数量级降到102数量级;脱氮硫杆菌数量与几种理化因子间相关性分析结果表明:其与硝态氮呈正相关关系,与硫化物呈负相关关系,原因可能为硫化物和硝酸根的分布为池塘中溶氧分布必然结果,而硝酸根诱导了其细胞内同化型硝酸还原酶活性。
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雌雄洛氏鱥肌肉营养成分的比较分析
《食品科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：对雌雄洛氏鱥的肌肉营养成分进行比较分析。结果表明:雌雄洛氏鱥肌肉(鲜样)中粗蛋白含量分别为19.45%和18.95%,粗脂肪含量分别为3.69%和2.97%,水分含量分别为75.73%和76.93%,灰分含量分别为1.43%和1.37%,雌雄个体间差异不显著(P>0.05)。雌性个体氨基酸总量(TAA)、必需氨基酸总量(EAA)、鲜味氨基酸总量(DAA)均高于雄性,且都存在显著差异(P<0.05);18种氨基酸中除胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸和组氨酸的含量不存在显著性差异(P>0.05)外,其余14种均存在显著性差异(P<0.05);其必需氨基酸的构成比例基本符合FAO/WHO的标准,其中赖氨酸和亮氨酸含量较高,以氨基酸评分(AAS)来评价,第一限制性氨基酸均为色氨酸,第二限制性氨基酸为缬氨酸;以化学评分(CS)评价,第一限制性氨基酸均为色氨酸,第二限制性氨基酸为蛋氨酸+胱氨酸;雌雄性洛氏鱥必需氨基酸指数分别为61.97和54.51。通过雌雄对比,以及与其他经济鱼类对比分析,表明洛氏鱥可作为优良的蛋白质和必需氨基酸的来源,雌性个体营养价值要优于雄性。
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滩涂贝类养殖区底质硫化物的去除及修复
《农业环境科学学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以滩涂现场实验与室内模拟实验相结合的途径,运用物理修复方法(翻耕、压沙加翻耕)和投放双齿围沙蚕(Perinereis aibuhitensis)的生物修复方法开展滩涂文蛤(Meretrix meretrix)养殖底质中硫化物的去除修复实验。结果表明,现场和室内物理修复实验中,翻耕和压沙加翻耕处理去除硫化物效果均达到显著水平(P<0.05),其中压沙加翻耕修复效果优于翻耕,室内翻耕30cm修复效果优于翻耕20cm。室内生物修复实验中,各沙蚕处理组较对照组均表现出了较好的硫化物修复效果,且硫化物的去除效果随沙蚕投放密度的适量增加而增强,其中0.14kg·m-2和0.21kg·m-2沙蚕组的修复效果达到显著水平(P<0.05),而当增加沙蚕投放密度至0.28kg·m-2时,硫化物的去除效果反而减弱,表明最佳沙蚕修复效果有一个适宜的密度投放值。
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海藻热解生物油的成分分析
《农业工程学报 》 2013 EI 北大核心 CSCD
摘要：为了明确海藻热解生物油的主要成分及热解工况对成分的影响,对海藻生物质(条浒苔、马尾藻)不同工况下热解制得的生物油进行气相色谱质谱联用分析。海藻类生物油成分除了含氮化合物外,主要是一些烃类、酮类、醛类、醇类和酚类化合物,以及较大分子量的羧酸及其衍生物,并包含了少量呋喃、吡喃、吡啶等衍生物的杂环化合物。条浒苔油中羧酸及其衍生物(37.85%)和烃类物质(16.61%)较多,而马尾藻生物油中甾族(30.16%)和醇类化合物(24.81%)较多,也检测出油酸、棕榈酸酯和花生酸。不同工况下产生的生物油在组成成分上非常相似,只是相对含量有所不同。热解温度对海藻油组分分布起了重要作用,而载气流量对热解海藻油组分分布的影响不明显。试验结果还表明海藻油中含氮化合物的形成主要与蛋白质的分解有关。海藻生物油相对于陆上植物热解生物油优点为高含烃量,低含氧量。海藻热解制油工艺中温度应控制在500～600℃之间,能达到较佳产油率和油品。
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桑沟湾表层水pCO_2的季节变化及影响因素分析
《渔业科学进展 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：根据2011年4、8、10月和2012年1月在桑沟湾获得的表层海水总碱度(TA)和pH值,结合现场水文、化学、生物和养殖等参数,探讨了桑沟湾海域CO2体系各参数的空间分布特征、季节变化情况及其影响因素。调查结果显示,10月和翌年1月,CO2体系各参数主要受温度和盐度的影响;8月,pH和pCO2分别与初级生产力和溶解氧显著相关;4月与水文、化学生物因子无显著相关性。8月各参数的空间差异最大,其次是10月,1月最小。4个航次的平均表层pCO2都低于大气pCO2,为表观碳汇区;季节变化趋势是8月<4月<1月<10月。pCO2总体的空间分布趋势都是湾内向湾外递增,即贝类养殖区<贝藻混养区<藻类养殖区<非养殖区。8月,桑沟湾较低的pCO2可能与赤潮有关,而4月可能是物理、生物及大规模贝藻养殖的综合结果。桑沟湾较低的pCO2是由于受沿岸区高初级生产力的影响,还是受大规模的贝藻养殖的影响,尚需进一步的研究。
关键词： 海水总碱度 pH值 表层水二氧化碳分压 海水养殖 桑沟湾
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抗人IL-1β单链抗体的构建及其中和活性的检测
《中国免疫学杂志 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：目的:原核表达抗人IL-1β(hIL-1β)的scFv,并对纯化后抗体的特异性、亲和力以及中和活性进行检测,为研制治疗类风湿关节炎的小分子抗体药物奠定基础。方法:使用PCR方法从含有抗hIL-1β抗体基因的质粒中获得抗hIL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达载体pET-27b-A-hIL-1β-scFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta后诱导表达,经包涵体变性、复性得到可溶的抗hIL-1βscFv蛋白。利用高效液相色谱仪对其纯度进行分析后使用Western blot和ELISA方法测定scFv抗体对抗原特异性结合能力和亲和力,使用MTT的方法检测scFv抗体中和人IL-1β蛋白的能力。结果:成功地对抗hIL-1β单链抗体进行构建、诱导、表达和纯化。得到纯度为72.05%、相对分子质量约为28 ku的目的蛋白。ELISA和Western blot结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。MTT实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断hIL-1β刺激L929细胞的增殖。结论:通过原核表达系统得到的抗hIL-1β单链抗体,纯化后,鉴定其与hIL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和hIL-1β的活性,为进一步研究治疗RA的小分子抗体奠定了基础。
关键词： hIL-1β 单链抗体 包涵体复性 中和活性 MTT
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大型海藻对重金属镉、铜的富集动力学研究
《中国环境科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以人工培育的龙须菜(Gracilaria lemaneiformis)活体为实验材料,在低浓度Cu2+、Cd2+污染水体中,进行龙须菜对Cu、Cd富集的模拟实验,探索龙须菜对Cu、Cd的污染水体的修复,以及龙须菜食品的安全性.应用两箱动力学模型,对实验结果进行了曲线拟合,对拟合优度进行检验.结果表明,在本实验条件下,龙须菜对重金属Cu、Cd的生物累积符合两箱动力学模型,并获得龙须菜富集Cu、Cd的吸收速率常数(Ku)和排出速率常数(Kc).当Cu2+的浓度50 g/L、Cd2+的浓度20 g/L时,经过28 d的暴露,随Cu2+、Cd2+的暴露浓度以及暴露时间增大,龙须菜中Cu、Cd的含量升高.龙须菜对Cu、Cd的吸收速率常数分别为15.4 51.1和13.9 55.7,基本随实验水体中元素的暴露浓度升高而降低;排出速率常数分别为0.023 0.070和0.030 0.050,与暴露浓度无明显相关性.理论平衡状态下龙须菜中Cu、Cd含量(质量分数)随水体中暴露浓度升高而增加.龙须菜对Cu、Cd的生物富集因子分别为663 1008和463 1113,Cu、Cd的生物半衰期分别为23.1 d和20.1d.
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卵形鲳鲹不同月龄选育群体主要形态性状与体质量的相关性分析
《水产学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为探讨卵形鲳鲹不同月龄选育群体主要形态性状对体质量的影响,跟踪测量了1月龄,4月龄,7月龄,10月龄和13月龄个体的全长(x1),体长(x2),体高(x3)和体质量(y),共测量2 635尾。运用相关分析、多元回归分析和通径分析的方法,计算了以体质量为因变量,其他形态性状为自变量的相关系数、通径系数和决定系数,剖分各性状对体质量的影响,建立最优多元回归方程。结果显示,在不同生长阶段,4个性状间的相关系数在0.017～0.960之间,除4月龄个体体高与其他性状间相关性不显著外,其他月龄群体各性状两两之间的相关性均达到了极显著水平;1月龄和4月龄个体全长对体质量的直接作用最大,7月龄、10月龄和13月龄个体则是体高对体质量的影响最大;各性状对体质量决定程度分析与通径分析变化趋势一致,各月龄群体全长、体长、体高估算体质量的多元线性回归方程的拟合度良好(86.9%～90.6%)。研究表明,影响体质量的主要形态因素已找出,选育时期不同,所选择的形态性状也应有所差异,为卵形鲳鲹选择育种提供了必要的技术参数。
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黄颡鱼神经肽Y基因(NPY)cDNA全序列的克隆及其表达特征分析
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆黄颡鱼神经肽Y基因(NPY),研究其在不同组织及在饥饿情况下脑组织中的表达情况,探讨其在黄颡鱼摄食活动中的作用。【方法】利用RT-PCR和RACE技术,克隆黄颡鱼NPY基因的cDNA序列全长,对其编码氨基酸进行生物信息学分析;利用半定量PCR和实时荧光定量PCR技术,对NPY基因在黄颡鱼成体不同组织(脑、心脏、肝脏、肾脏、脾脏、胃、肌肉、鳃、性腺)中的表达情况进行研究,并检测饥饿不同时间(0,24,48,72,96,120,144和168h)以及饥饿168h重新投饵1,3和5h后黄颡鱼脑组织中NPY表达水平的变化。【结果】黄颡鱼NPY基因cDNA序列全长772bp,开放阅读框282bp,编码93个氨基酸,其与瓦氏黄颡鱼同源性最高(97%),与斑点叉尾鮰、建鲤、胭脂鱼、中华倒刺鲃的同源性分别为87%,72%,72%和70%。NPY基因在黄颡鱼成体组织脑、脾脏、肝脏、鳃、性腺中都有表达,而在心脏、肌肉、胃、肾脏中不表达,在脑中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01);在饥饿处理24～144h时,随饥饿时间的增加,黄颡鱼脑组织中NPY表达量升高,但在饥饿168h重新投饵3h后,NPY表达量即可下降到正常水平。【结论】NPY基因在黄颡鱼脑中大量表达,随着饥饿时间的增加脑组织中NPYmRNA表达量上升,重新投饵后其表达量很快下降到正常水平,表明NPY基因在黄颡鱼摄食活动中发挥着重要作用。
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