科研产出
基于SRAP标记的甘薯遗传多样性与起源演化分析
《植物遗传资源学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以包含甘薯近缘野生种、地方品种和育成品种的129份种质为供试材料,采用SRAP分子标记对其进行遗传多样性分析,同时用MEGA软件结合DPS软件绘制甘薯及其近缘种进化树。结果表明:(1)基于SRAP标记的124份甘薯栽培种平均遗传距离为0.1848,5份野生种平均遗传距离为0.4822,野生种与栽培种之间的遗传距离平均为0.4135。(2)当遗传距离为0.31时,可以把近缘野生种和栽培品种完全区分开。124份栽培种可以在遗传距离为0.21处划分为8个类别。(3)在基于SRAP标记绘制的进化树上,129份甘薯及其近缘种种质按演化顺序分为3部分,分别为处于进化树最底端的由5个近缘野生种组成的第Ⅰ部分、处于进化树中部的由6个育成品种和1个地方品种组成的第Ⅱ部分,以及进化树上部由117份地方品种和育成品种组成的第Ⅲ部分。(4)从进化时间来看,近缘野生种平均进化时间最长,地方品种次之,育成品种最短,与理论预期一致,同时菲律宾引入的品种与我国福建地方品种进化时间一致,验证了甘薯经由菲律宾引入我国福建地区这一传播途径。SRAP标记可以有效的运用于甘薯遗传多样性及其起源与演化分析。
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福建省烟粉虱种群消长动态及影响因素分析
《应用昆虫学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了探究福建省烟粉虱Bemisiatabaci(Gennadius)种群消长动态及其影响因素,提高监测与防控水平。【方法】选择代表福建南北两地的漳州和建瓯蔬菜生产地开展露地和温室大棚烟粉虱种群数量的系统调查,并在室内测定了不同温度对烟粉虱生长发育及繁殖的影响。【结果】漳州露地烟粉虱周年发生,种群季节性消长呈现两个高峰,即6月中下旬-7月上中旬的夏季高峰和11月上中旬的秋季高峰;建瓯大棚内烟粉虱亦周年发生,且与漳州露地种群消长动态基本同步;建瓯露地烟粉虱始见期为3月下旬,种群夏季高峰在7月中下旬,秋季高峰期在10月中下旬。烟粉虱卵、1龄若虫、2龄若虫、3龄若虫和4龄若虫+拟蛹的发育起点温度分别为13.77、14.98、9.60、7.97、12.56℃,有效积温分别为77.25、29.13、49.62、65.03和65.13日·度,结合2015-2017年气象资料,推算出烟粉虱在建瓯和漳州年发生代数分别为11-12代和13-14代。【结论】气温是影响烟粉虱种群消长的关键因子,21-27℃是B型烟粉虱发育的适宜温度,低于20℃和高于30℃均不利于烟粉的生长发育和繁殖。当旬平均气温稳定在20℃以上时种群数量快速上升,当旬平均气温持续保持在30℃以上时种群数量呈回落态势。
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青枯雷尔氏菌胞外多糖合成缺失突变株构建及其生物学特性
《微生物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的植物青枯病是一种毁灭性土传病害。胞外多糖(extracellular polysaccharides,EPS)是青枯雷尔氏菌关键的致病因子之一。通过构建胞外多糖缺失突变株,研究胞外多糖在青枯病致病中的作用。【方法】从青枯雷尔氏菌FJAT-91的基因组中克隆出胞外多糖合成结构基因epsD同源臂,克隆至自杀性质粒p K18mobsacB,再将庆大霉素抗性基因(Gm)插入同源臂中间,获得重组质粒p K18-epsD。将重组质粒转化至青枯雷尔氏菌FJAT-91感受态细胞中,通过同源重组敲除epsD基因,获得EPS合成缺失的突变株FJAT-91Δeps 。研究突变株与野生菌株在菌落形态、胞外多糖合成、运动能力、定殖能力的差异性。【结果】突变菌株FJAT-91ΔepsD与出发菌株FJAT-91相比:胞外多糖产量显著减少,生长较慢;泳动能力(swimming motility)和群集运动能力(swarming motility)显著降低;在番茄苗根部和茎部的定殖能力显著降低;弱化指数(AI)为0.905,鉴定为无致病力菌株。【结论】胞外多糖在青枯雷尔氏菌的致病中起着关键的作用,本课题研究成果为开发植物疫苗提供了优良的材料与研究基础。
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鸭肠炎病毒疫苗株EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立
《畜牧兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染,该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大,复制非必需区多,可容纳多个外源基因的插入,被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前,尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点,明确DEV疫苗株在UL2基因上存在528bp连续核苷酸缺失,设计针对该差异的实时荧光定量PCR引物,建立了EvaGreen实时荧光定量PCR检测DEV疫苗株的方法。结果表明,建立的检测DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,当UL2基因含量为5.25×101~5.25×106拷贝·μL~(-1)时有良好的线性扩增,其标准曲线方程Y轴截距为34.95,斜率为-3.218,扩增相关系数为0.999,扩增效率为100%;敏感性强,最低检测限为52.5拷贝·μL~(-1);特异性好,对DEV疫苗株扩增产物的熔解曲线分析,仅出现1个单特异峰值[Tm=(90.62±0.28)℃],无引物二聚体,对其他鸭源传染病病原(如鸭肠炎病毒强毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、番鸭源鹅细小病毒、新型基因重组型鸭细小病毒、鸭腺病毒A型、鸭源鹅多瘤病毒、鸭源大肠杆菌、鸭疫里默菌和鸭源禽多杀性巴氏杆菌)检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.55%~1.72%和0.92%~2.49%。本研究建立了DEV疫苗株实时荧光定量检测方法,为评价DEV活载体基因工程疫苗免疫防控机制提供参考。
关键词： 鸭肠炎病毒 疫苗株 UL2基因 EvaGreen 实时荧光定量PCR方法
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外源水杨酸对低温胁迫下马铃薯幼苗生理指标的影响
《分子植物育种 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以马铃薯郑薯5号(耐寒品种)幼苗为试验材料,采用0.5 mmol/L水杨酸(SA)叶面喷施处理,通过低温胁迫(4℃14 h,2℃10 h)后,测定马铃薯叶片丙二醛(MDA)、可溶性糖(SS)、可溶性蛋白(SP)、脯氨酸(Pro)和叶绿素总含量,过氧化物歧化酶酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,研究外源SA对马铃薯叶片渗透调节能力和抗氧化能力的影响。结果表明:低温胁迫下喷施SA后的马铃薯叶片MDA、SS、SP、Pro和叶绿素总含量显著提高,POD和SOD活性显著提高。因此叶面喷施外源SA能通过调控马铃薯的渗透调节和抗氧化能力来减轻细胞膜的损伤,抵制低温伤害,提高其耐寒性。
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嗜热芽孢杆菌CHB1环糊精酶基因优化及其在毕赤酵母中的表达
《食品与生物技术学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为实现新型CGTase在毕赤酵母中的高效表达,提取嗜热芽孢杆菌CHB1基因组DNA为模块,PCR扩增野生型基因CGT1,编码680个氨基酸。将该基因进行密码子优化CGT2,与野生型基因CGT1分别插入分泌型载体pPICZαA转化毕赤酵母GS115,获得两株酵母工程菌GS115/pPICZαA-CGT1和GS115/pPICZαA-CGT2;经甲醇诱导表达120 h后,CGT2活力达0.62U/mL,是优化前CGT1(0.37 U/mL)活性的1.7倍;进一步对GS115/pPICZαA-CGT2进行摇瓶发酵条件优化,确定其最优发酵条件为:pH 6.5、28℃、200 r/min、每24小时补加体积分数1.5%的甲醇诱导,120 h后其胞外酶活力达到1.26 U/mL,是优化前的两倍。
关键词： 嗜热芽孢杆菌CHB1 环糊精酶 密码子优化 毕赤酵母
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伪狂犬病病毒FJ-2015株主要免疫原基因的遗传进化分析
《中国预防兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为了解伪狂犬病病毒(PRV)变异株主要免疫原相关基因的序列遗传特征,本研究对PRV FJ-2015株g B、g C和g D基因进行克隆和测序分析。结果显示,FJ-2015株3个主要免疫原基因推导氨基酸序列与2012年以来国内新分离PRV变异株同源性较高,分别为99.7%~100%、99.6%~100%和98.5%~99.8%;而与国外分离株氨基酸同源性较低,分别为96.9%~97.5%、93.1%~93.3%和97.3%~98.8%,其中与疫苗株Bartha-K61同源性最低,为96.9%、93.1%和97.3%;氨基酸比对显示,与经典病毒株相比,该病毒株发生多个位点的一致性替换、插入或缺失,并处于重要的抗原表位区;遗传进化关系表明,该病毒株g B基因遗传演化与分离时间和分离国家相关,g C基因显示遗传多样性,而g D基因具有一定的福建区域性遗传演化关系。以上结果表明,PRV FJ-2015属于PRV变异株,与其它分离株存在一定的遗传差异。本研究丰富了猪PRV流行的分子特征。
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秀珍菇退化菌株生物学特征比较及dsRNA病毒检测
《南方农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】比较秀珍菇退化菌株与正常菌株的生物学特征并进行双链RNA(dsRNA)病毒检测,为秀珍菇栽培过程中选择优质菌种提供参考依据。【方法】开展秀珍菇退化菌株菌丝拮抗、菌丝生长速度及出菇试验,与正常菌株进行生物学特征比较,通过ITS扩增,利用RAPD、ISSR和SRAP分子标记分别进行差异性比较,并开展dsRNA病毒检测,分析秀珍菇菌株的退化原因。【结果】秀珍菇退化菌株X9和X13与正常菌株X5、X6及对照菌株X15间存在拮抗反应,当培养基的pH低于5.0时,退化菌株的菌丝生长速度显著降低(P<0.05,下同)。退化菌株X13菌丝的生长速度(4.95mm/d)、常温出菇单袋产量(73.34 g/袋)及低温刺激出菇单袋产量(107.69 g/袋)均显著低于正常菌株和对照菌株。分子标记分析未发现供试菌株间存在遗传差异,dsRNA病毒检测发现供试菌株均存在dsRNA片段,其中退化菌株X13存在特异的dsRNA片段。【结论】秀珍菇退化菌株可能受dsRNA病毒感染,适应环境能力变弱,产量降低,生产上应注意菌株来源,避免使用退化菌株。
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基于宏基因组的茉莉花内生细菌多样性分析
《热带亚热带植物学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为了解茉莉花(Jasminum sambac)的内生菌多样性,利用16S rDNA高通量测序技术对其内生细菌组成进行测定.结果表明,茉莉花的内生细菌有38门78纲150目257科434属,其中变形菌门、放线菌门、壁厚菌门、拟杆菌门和绿弯菌门的物种丰度较高.变形菌门在6-10月的丰度均最高(70.3%~85.7%).7月份植株的细菌Shannon指数最高(3.14)、Simpson指数最小(0.13),表明细菌群落多样性最高,且高温有利于提高植株内生细菌多样性.聚类和主成分分析表明,7和8月、9和10月的植株内生细菌群落构成相似度高,6月与其他月份的差异大.冗余分析和热图分析表明,土壤营养成分影响植株内生群落组成,以全氮、全磷和有机质含量为主要.这为挖掘利用茉莉花有益的内生菌资源奠定基础.
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