科研产出
弓形虫GRA1蛋白表达及间接ELISA检测方法的建立
《中国畜牧兽医 》 2025 北大核心
摘要：【目的】通过原核系统表达弓形虫GRA1蛋白，并建立其抗体间接ELISA（iELISA）检测方法，为猪弓形虫抗体检测提供材料。【方法】构建重组质粒pET-28a-GRA1,利用大肠杆菌表达系统表达GRA1蛋白，并用His镍柱进行GRA1蛋白纯化，经Western blotting鉴定其免疫原性。以纯化的GRA1蛋白作为抗原包被于固相载体，并用棋盘法确定抗原最佳包被浓度和待测血清稀释度。在此基础上，优化抗原包被条件、封闭条件、待测血清稀释度和酶标二抗稀释度。通过测定阴性血清D450 nm值确定所建立方法的临界值，并进行特异性、敏感性和重复性试验，同时测定该方法与改良凝集试验（MAT）对实际样品检测的符合率。【结果】SDS-PAGE结果显示，GRA1蛋白以可溶性形式表达，蛋白分子质量约为25 ku。Western blotting显示GRA1蛋白与猪弓形虫阳性血清发生特异性反应。优化后的ELISA反应条件为：抗原最佳包被浓度为5μg/mL,血清稀释度为1∶100,抗原最佳包被条件为37℃包被2 h,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉37℃作用2 h,待检血清作用时间为60 min,酶标二抗稀释度为1∶20 000,TMB作用时间为15 min。该检测方法的临界值为0.277。该方法敏感性良好，血清按1∶6 400稀释后仍可检测到阳性；批内和批间重复性变异系数均<10%,重复性好；与猪带绦虫、旋毛虫、猪伪狂犬病病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性血清均无交叉反应，具有良好的特异性。利用该方法和MAT方法对100份临床猪血清进行检测，总符合率为94.0%。【结论】本研究建立了一种快速有效的检测猪弓形虫抗体的间接ELISA方法，有助于猪感染弓形虫病的诊断和预防。
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茎腐病胁迫下甘薯CC-NBS-LRR基因家族鉴定及转录组分析
《植物保护 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：由达旦提狄克氏菌Dickeya dadantii引起的细菌性病害是甘薯的主要病害之一，是我国南方甘薯主产区发病面积最大，危害最为严重的病害。本研究对参与响应茎腐病胁迫的甘薯CC-NBS-LRR基因家族进行鉴定，并对其蛋白质理化性质、基因结构、保守基序、进化关系、染色体定位、顺式作用元件、表达部位等进行分析，进一步通过转录组测序和荧光定量PCR分析CC-NBS-LRR基因在抗病品种‘广薯87’和感病品种‘心香’受茎腐病菌侵染后的表达差异。结果表明，甘薯中有17个CC-NBS-LRR基因参与了茎腐病胁迫响应，其编码蛋白长度为787～1 241 aa,等电点为6.46～9.14,主要分布在3号染色体上。它们与甘薯野生种Ipomoea trifida和I.triloba的CC-NBS-LRR基因聚类为一簇，与拟南芥Arabidopsis thaliana的4个CC-NBS-LRR基因亲缘关系较近，多数基因的启动子为响应光反应的顺式作用元件，其中IbCNL11和IbCNL13基因在甘薯根、茎和叶中表达量较高，IbCNL1、IbCNL2和IbCNL11与茎腐病抗性密切相关。综上，本研究明确了参与响应茎腐病胁迫的CC-NBS-LRR基因家族的特征、进化和表达模式，筛选出3个抗病候选基因，为解析甘薯抗茎腐病机制奠定了基础。
关键词： 甘薯 CC-NBS-LRR基因家族 生物信息学 茎腐病
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过表达VIM基因的LMH细胞系构建及对GAstV增殖效率的影响
2025
摘要：【目的】构建稳定过表达波形蛋白(Vimentin，VIM)基因的鸡肝癌(Leghorn male hepatoma，LMH)细胞系以提高鹅星状病毒(Goose astrovirus，GAstV)增殖效率。【方法】从鹅源细胞中通过PCR扩增VIM基因，结合同源重组的方法将其连接至慢病毒基因过表达系统载体pLV-sfGFP (2A) Puro，获得重组慢病毒质粒pLV-sfGFP (2A) Puro-VIM-Flag(pLV-VIM)；利用293T细胞包装重组慢病毒颗粒，随后感染LMH细胞，并利用嘌呤霉素进行筛选以获得目标细胞；通过Western blot、RT-qPCR、间接免疫荧光试验和TCID50测定等方法评估VIM对GAstV增殖效率的影响；最后通过抗体阻断试验分析细胞表面VIM对GAstV侵入的影响。【结果】经测序和酶切鉴定，成功构建了重组慢病毒载体pLV-VIM；经筛选后获得了过表达VIM基因的LMH细胞系(LMH-VIM)及其对照组细胞系(LMH-NC)。Western blot结果显示，LMH-VIM细胞中波形蛋白的表达水平显著高于LMH-NC。接种病毒后发现，过表达VIM显著上调LMH-VIM细胞中GAstV的mRNA和蛋白表达水平，以及细胞上清液中的病毒滴度。抗体阻断试验表明，细胞表面VIM可促进GAstV侵入细胞。【结论】本研究为提高GAstV在体外细胞培养的增殖滴度提供了新的见解和思路，对GAstV感染引起的雏鹅痛风疾病的疫苗研发、生产和该疾病的防控具有重要意义。
关键词： 波形蛋白基因 鸡肝癌细胞系 基因过表达 鹅星状病毒 增殖效率
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有机无机配施改良剂对滨海盐渍土及冰菜生长的影响
《中国农学通报 》 2025 CSCD
摘要：咸酸复合胁迫是南方滨海盐渍土农业生产开发利用的关键障碍因子。探究有机无机配施改良剂对滨海盐渍土理化性质及冰菜(Mesembryanthemum crystallinum L.)生长的协同改良效应，以期为滨海盐渍土高效改良与耐咸酸作物栽培提供理论依据。以滨海盐渍土和冰菜为供试对象，设置对照、0.1%土壤调理剂、0.05%钙镁磷肥+0.05%有机肥等3组处理，通过盆栽试验研究不同改良剂对土壤盐渍化、酸化及冰菜生长、抗逆性的影响。结果表明：单一土壤调理剂处理下，土壤p H提升2.68个单位，但土壤电导率、全盐量、钠离子含量、冰菜生物量及抗逆性无显著变化。钙镁磷肥与有机肥配施处理下，土壤pH提升2.15个单位，土壤交换性铝、交换性氢、交换性酸总量以及水解性酸含量分别降低了85.3%、87.9%、86.0%和59.5%，电导率、全盐量和钠离子含量则分别显著降低21.0%、20.9%和31.0%，土壤有效磷含量增加116%；此外，钙镁磷肥与有机肥配施处理下，冰菜地上部鲜重较对照增加174%，叶片丙二醛含量降低37.0%，根系根尖数增加42.8%。冗余分析表明，土壤有效磷含量提升与速效钾、钠离子含量降低是冰菜在滨海盐渍土上生长的关键驱动因子。单一土壤调理剂虽可缓解酸化，但对盐渍化土壤的改良效果有限。钙镁磷肥与有机肥配施通过改善土壤理化性质（提升p H、降低盐分及钠毒害，提高有效磷含量）和优化根系形态，显著增强冰菜抗逆性及产量，其综合改良效果优于单一调理剂，钙镁磷肥与有机肥配施可协同抑制土壤酸化和盐渍化，为滨海盐渍土可持续利用提供了有效技术路径。
关键词： 有机改良剂 无机改良剂 冰菜 盐渍土修复 滨海盐渍土 广东省
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基于黄酮类成分的陈皮质量评价和鉴别
《现代食品科技 》 2025 北大核心
摘要：陈皮是重要的药食同源产品，其质量与产地、采收期等密切相关。为探究不同省份、采收期陈皮间的关键特征黄酮成分及含量随采收期的变化规律，进行陈皮质量评价与鉴别，该研究采集了重庆、四川、广东、福建4个省份和新会3个采收期的陈皮样品共278个，采用高效液相色谱法测定并结合化学计量学方法比较陈皮中芸香柚皮苷、橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3′4′-七甲氧基黄酮和橘皮素5种黄酮成分的含量差异。结果表明：广东陈皮中芸香柚皮苷、橙皮苷含量最低，分别为0.33、27.20 mg/g；四川陈皮中川陈皮素、橘皮素含量最低，分别为3.50、1.14 mg/g；福建陈皮中3,5,6,7,8,3′4′-七甲氧基黄酮含量最低，为0.14 mg/g。产地判别模型对4个省份陈皮分类准确率最高可达94.64%；广陈皮与陈皮分类准确率达98.20%以上，橙皮苷、川陈皮素、芸香柚皮苷是区分不同省份陈皮的关键差异性成分。5种黄酮类成分含量随着采收期推迟相对减少，但不适用于区分采收期。该结果为陈皮质量评价与产地鉴别提供了理论依据，为陈皮开发利用提供参考。
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马鼻疽和马鼻肺炎双重荧光定量PCR检测方法的建立
《中国兽医科学 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为快速检测进出境马匹样品中马鼻疽和马鼻肺炎病原的核酸，选取两种病原保守基因片段，分别设计了适合的荧光定量PCR引物和探针，筛选和优化了试验最佳反应浓度和反应条件，建立了针对马鼻疽和马鼻肺炎病原核酸检测的双重荧光定量PCR（FQ-PCR）方法。结果显示，所建立的方法和体系能很好地区分马鼻疽、马鼻肺炎和其他马属动物疫病的病原核酸，检测马鼻疽和马鼻肺炎双重定量PCR标准曲线的相关系数分别为R2=0.996 7和R2=0.996 5,DNA含量最低检测限度分别为44.7 copies/μL和32.6 copies/μL。结果表明，本研究建立的方法具有较高的特异性、敏感性和可重复性。该方法可用于马匹疫病检测实验室快速检测，并能同时检测马鼻疽和马鼻肺炎两种病原核酸，具有重要的实际应用价值。
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不同烹饪方式对金鲳鱼片品质的影响
《食品工业科技 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为探究不同烹饪方式条件下金鲳鱼片品质特性变化的差异，对比研究蒸制、水煮、烤制3种常用的烹饪方式对金鲳鱼片的热加工损失率、色差、pH、基本营养成分、质构特性、脂肪酸、游离氨基酸、挥发性风味成分的影响。结果表明，3种方式烹饪的金鲳鱼片热加工损失率均随加热时间延长呈上升趋势。与生鱼肉对比，水煮和蒸制鱼片的颜色变亮白，烤制8 min的鱼片色泽最焦黄。经烹饪后鱼片的pH均有显著增加（P<0.05）。水煮组的水分含量最高，烤制组的水分含量最低而灰分和粗蛋白含量最高，蒸制8 min的粗脂肪含量最低为4.93 g/100 g。相比于蒸制和水煮，烤制鱼片的硬度和咀嚼性最大为297.50 g、136.18 mJ，口感较为丰富。蒸制鱼肉中饱和脂肪酸（SFA）、单不饱和脂肪酸（MUFA）含量最高分别为33.83%、37.80%，烤制鱼肉的膳食脂肪酸比例为1.08:1.21:1.04更符合FAO/WHO推荐的健康要求。金鲳鱼肉游离氨基酸总量经加热后有所降低，而烤制氨基酸总量达203.78 mg/100 g，说明烤制处理对鱼片游离氨基酸含量的保持表现更好。新鲜、蒸制、水煮、烤制的鱼肉样品中分别鉴定出35、36、40、32种挥发性物质，这表明加热处理能产生更多的挥发性风味物质种类，在一定程度上赋予了金鲳鱼片新的风味。本研究为金鲳鱼的食品加工业提供参考。
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凝结芽孢杆菌BC30冻干保护剂的筛选及其对菌粉消化耐受性的影响
《食品工业科技 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为了提升凝结芽孢杆菌BC30（Bacillus coagulans BC30）冻干粉的活菌数和消化耐受性，通过单因素实验和响应面试验优化了凝结芽孢杆菌BC30复合冻干保护剂配比，探究了最佳复合冻干保护剂对凝结芽孢杆菌BC30的保护作用，并通过模拟体外消化揭示了最佳复合冻干保护剂对菌粉消化耐受性的影响规律。研究结果表明，当保护剂中脱脂乳粉、低聚果糖和谷氨酸钠分别为9.6%、10.9%和5.1%时，获得的凝结芽孢杆菌BC30冻干粉存活率和活菌数最高，分别为91.43%和1.60×1011 CFU/g，较优化前分别提高了51.43%和1.29倍。扫描电镜结果表明，添加最佳复合冻干保护剂的凝结芽孢杆菌BC30菌粉表面光滑，被保护剂完全覆盖。添加最佳复合冻干保护剂菌粉的乳酸脱氢酶（LDH）、胞外半乳糖苷酶（β-GAL）和Na+-K+-ATP酶活性与添加单一冻干保护剂菌粉存在显著差异，但其与未冻干菌体的酶活性类似，说明添加最佳复合冻干保护剂的凝结芽孢杆菌BC30细胞膜结构和功能维持较好，这一点在细胞的敏感性测试和细胞膜流动性分析中也得到证实。体外模拟消化后，添加最佳复合冻干保护剂的凝结芽孢杆菌BC30的存活率为95.41%，是未添加组的1.34倍。以上结果表明最佳复合冻干保护剂通过对细胞膜的保护作用来减少冷冻干燥对凝结芽孢杆菌BC30一些关键酶的损伤，进而提高了凝结芽孢杆菌BC30的冻干存活率和消化耐受性，为高活性高耐受性凝结芽孢杆菌BC30菌粉的制备提供了理论依据。
关键词： 凝结芽孢杆菌BC30 冷冻干燥保护剂 保护作用 体外消化 存活率
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壳聚糖复合膜的改性及其在肉类保鲜中的应用研究进展
《包装工程 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：目的 对壳聚糖的性质、成膜方法、壳聚糖膜的改性方法及其肉类食品保鲜的应用进行综述,为开发可降解性、力学性能及抗菌性能均较优的壳聚糖保鲜膜提供指导.方法 总结壳聚糖膜常用的成膜方法(流延、喷涂、浸涂、逐层自组装和挤出成型等)及改性物质(如多酚、蛋白质、多糖、脂类、无机材料、低共熔溶剂等),比较不同改性方法对壳聚糖膜力学性能与阻隔性能等特性的影响;同时探讨了国内外壳聚糖复合膜在肉类食品保鲜中的研究现状,以期为壳聚糖膜的推广应用提供参考.结果 采用蛋白质、多酚、多糖、脂类、无机材料以及低共熔溶剂等改性壳聚糖膜,显著提高了壳聚糖基复合膜的力学强度、阻隔特性、抗氧化性及抗菌性.结论 壳聚糖复合膜具有很好的抗氧化和抑菌性能,能够减缓肉及肉制品的劣变,延长其保质期,在肉类保鲜中得到了广泛应用.
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罗伊氏菌素的大肠杆菌抗菌活性及其分子机制研究
《海洋渔业 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为探究罗伊氏菌素对大肠杆菌抗菌活性的分子机制，通过产罗伊氏菌素罗伊氏乳杆菌ATCC 55730的摇瓶发酵及甘油诱导制备获得罗伊氏菌素，比较了其在不同温度条件下的稳定性，并分析了其对8种标准病原菌的抗菌效果。利用大肠杆菌K-12全基因敲除Keio文库，对其抗菌活性功能基因进行了筛选，并探讨了其抗菌活性的分子机制。结果表明，菌株ATCC 55730经甘油诱导及发酵制备所得罗伊氏菌素的浓度为26.13 mmol·L-1,其在不同温度条件下（-20°C、25°C、37°C）均表现出良好的产物稳定性。罗伊氏菌素对5种亚型产气荚膜梭菌、沙门氏菌LT2、白色念珠菌、产肠毒素大肠杆菌K-88的最小抑菌浓度（MIC）分别为0.52～1.83、1.12、1.67、0.79 mmol·L-1。从Keio文库中筛选获得了60个罗伊氏菌素抗性基因及69个敏感基因，其中两个关联核心基因cyaA及yheS分别与细胞膜通道蛋白及药物外排泵形成有关。由此推测，上述两个通路可能是罗伊氏菌素抗菌活性的关键分子作用靶点。研究结果可为揭示罗伊氏菌素的抗菌机制并推动其实际应用提供科学参考。
关键词： 罗伊氏菌素 大肠杆菌K-12 抗菌活性 Keio文库 系统生物学 遗传互作
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