科研产出
对虾肝胰腺细小病毒滚环扩增检测方法的建立
《渔业科学进展 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：根据对虾肝胰腺细小病毒(HPV)保守基因序列,设计特异性的锁式探针及其扩增引物,优化反应条件,建立了肝胰腺细小病毒超分支滚环扩增检测方法。实验中采用一步法连接,探针在Taq DNA连接酶作用下,58℃连接40 min、62℃扩增30 min便可以扩增出明显条带。反应特异性验证实验表明,该体系能够特异性地检测出HPV,而不与供试的其他对虾病原发生交叉反应;灵敏度分析结果显示该方法的检测极限为105 copies/μl,与PCR检测方法相比,一步法连接的滚环扩增的灵敏度低两个数量级。该方法反应过程中温度变化次数少,基本都在等温条件下进行,不需要PCR仪,可发展成为在简便实验条件下使用的简易检测方法。
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嗜水气单胞菌诱导的中华鳖SMART cDNA文库构建及相关基因的鉴定
《基因组学与应用生物学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)人工感染的中华鳖(Trionyx sinensis)心、肝、脾、肾为材料,应用SMART技术(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)构建了嗜水气单胞菌感染组织的cDNA文库。将获得的cDNA片段连接到PGEM-T载体,然后电转化进入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,PCR阳性检测结果显示插入片段在0.5~2 kb之间。该库含有4.3×105个重组子,重组效率为92%,本实验分析鉴定了164个≥1000bp的片段,39个序列在中华鳖中首次发现,鉴定的基因包括免疫基因11个;信号转导基因6个:催化类基因15个;转运相关基因3个;结构基因7个;未知基因9个。本实验文库的成功构建,不仅鉴定了中华鳖机体与细菌感染相关的免疫基因,同时为深入展开免疫学、系统发育和病原与机体的互作研究奠定了良好基础。
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柱后衍生高效液相色谱法测定虾中14种磺胺类药物残留量
《色谱 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：建立了虾中14种磺胺类药物残留量的柱后衍生高效液相色谱检测方法。样品在加入内标物磺胺吡啶后用乙酸乙酯提取,提取液浓缩后用4 mL乙酸乙酯溶解残余物,用盐酸溶液反萃取,正己烷去脂,盐酸溶液经滤膜过滤后,加入乙腈、甲醇和3.5 mol/L乙酸钠溶液(体积比为5∶5∶20)的混合溶液混匀后,经高效液相色谱分离,用荧光胺衍生试剂进行柱后衍生,荧光检测器检测。采用基质标样添加法绘制标准曲线,内标法定量。对柱后衍生系统参数进行了优化,确定了荧光胺溶液的浓度、流速和反应温度分别为0.2 g/L、0.15 mL/min和50℃。14种磺胺类药物在5~200μg/L范围内具有良好的线性。磺胺类药物的定量限(LOQ,S/N=10)为1.0~5.0μg/kg。在1.0~100.0μg/kg添加水平内,磺胺类药物的平均回收率为77.8%~103.6%,相对标准偏差(RSD)为2.9%~9.1%(n=6)。实验结果表明该方法灵敏、准确,重复性好,适用于虾中磺胺类药物的残留检测。
关键词： 高效液相色谱 柱后衍生 荧光检测 磺胺类药物 虾 荧光胺 残留
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基于细菌展示技术的高通量抗原表位筛选方法的建立
《中国免疫学杂志 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的:本研究旨在利用细菌表面展示技术结合流式细胞术建立一种快速直观的抗原表位的新方法。方法:本研究以传染性法氏囊病毒结构蛋白VP2作为目标蛋白,对该方法的可行性进行检测。将VP2基因分为连续不重叠的5个基因片段(V1~V5)。将各段基因分别克隆至细菌展示载体pAPEx中,转化大肠杆菌DH5α,利用IPTG诱导使蛋白片段锚定表达于大肠杆菌细胞间质侧的内膜上,利用溶菌酶破除细菌外膜(原生质球制备),使蛋白片段暴露于原生质球表面。将该原生质球先后与传染性法氏囊病毒多克隆抗体和FITC标记的兔抗鸡抗体进行孵育,利用流式细胞仪(Flow cytometer,FC)检测原生质球的荧光信号强度。结果:FC结果显示,除V2片段外其余片段均有很强的荧光信号,其荧光强度为V3最强,V1、V4、V5其次。该结果说明V1、V3、V4、V5段存在抗原表位,V2段中无表位。为验证FC结果,本研究利用传统方法对各基因片段进行表达、纯化及Western blot鉴定,结果显示V3与多抗的结合能力最强,V2段无阳性反应,与FC结果相符。此外,本研究利用抗原表位分析软件对各蛋白片段潜在抗原表位进行预测,其结果与FC结果相一致。结论:本研究利用FC对抗原表位筛选过程进行实时监测,通过荧光信号强弱即可判断抗原表位是否存在及强弱,与传统抗原表位筛选方法相比,节省了时间提高了效率。利用该方法可以快速地筛选出优势表位,对于流行病病原的基础研究及疫苗的研制具有重要意义。
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由东海、黄海沉积物中有机碳含量及稳定同位素组成重建200a以来初级生产力历史记录
《海洋学报(中文版) 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：从20世纪80年代以来古生产力的重建研究一直是国内外海洋生态学研究的热点,但已有的大多数研究是在深海区;而陆架区的特点是来自陆源物质的影响往往比较明显,因此,研究难度远较深海区大。利用现代沉积物中的有机碳稳定同位素组成来估算海源碳的含量,在此基础上,结合调查区域表层沉积物中的几个初级生产力的代表性指标(浮游植物总量、叶绿素a浓度以及硅藻含量)的调查资料,寻求岩心中海源碳与古生产力指标的相关关系,再由南黄海冷涡沉积区3个典型柱状沉积物中海源碳重建了200a以来高分辨率的古生产力记录,这对陆架海生态环境演变规律的研究有重要意义。对重建所得到的南黄海近代初级生产演化因素的初步探讨表明,近200a来初级生产力波动升高与海水表层温度的升高趋势是一致的,但其最主要的控制因素还是营养盐的供应,其中陆源营养物质和污染物质的影响起到了重要的作用。
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影响宰后鱼肉能量代谢和质构的酶及其活性测定方法研究进展
《食品科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：宰后鱼肉在低温贮藏过程中会发生一系列物理、化学和微生物方面的变化。研究发现,宰后鱼肉能量代谢和质构变化与肌肉中的多种内源性水解酶相关。本文综述了4种肌肉酶,即与能量代谢相关的三磷酸腺苷酶(adenosine triphosphatase,ATPase)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和与质构相关的钙激活蛋白酶、溶酶体组织蛋白酶的结构特点及其分离纯化和活性测定,为建立宰后鱼肉能量代谢和品质分析的酶学方法提供参考。
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中国渔政管理指挥系统信息化绩效评价——基于AHP层次分析法和模糊综合评价法
《中国农学通报 》 2014 CSCD
摘要：以中国渔政管理指挥系统作为评价对象,将该系统的信息化建设的长远目标和近期目标、内在组织流程和外部影响因素等诸多方面结合在一起,基于AHP层次分析法和模糊综合评价法构建中国渔政管理指挥系统管理信息化绩效评价模型和多层次、多维度的评价指标体系,实现对中国渔政管理指挥系统管理信息化绩效的客观评价。通过对管理信息化绩效评价的研究,将为渔业管理部门提供系统实用的信息化评价方法和工具,帮助渔业管理部门明确在信息化需求和实施绩效方面的优势和薄弱环节,便于管理决策层及时掌握当前的信息化实施状态。
关键词： 中国渔政管理指挥系统 AHP层次分析法 模糊综合评价法 信息化绩效评价
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长江口口门区潮下带水域鱼类群落组成的季节变化
《长江流域资源与环境 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：根据2006~2007年对长江口口门区潮下带鱼类的监测数据,分析了该水域鱼类群落组成的季节变化特征。结果表明:本次调查采获鱼类42种,隶属21科。生态类群以海洋鱼类种类最多(27种),其次为河口定居种(10种),而淡水鱼类、溯河产卵洄游鱼类和降海产卵洄游鱼类种类数很低。S1站点和S2站点类似,均以棘头梅童鱼(Collichthys lucidus)、刀鲚(Coilia ectenes)、龙头鱼(Harpodon nehereus)为优势种。两站点鱼类群落在空间上无显著差异,而时间上均有明显的季节变化,冬季和初春的样品聚为一组(Ⅰ组),夏、秋季的样品聚为一组(Ⅱ组)。通过SIMPER分析可知,两组间的平均相异性较高,达73.03,共有17种鱼类对组间的贡献超过90%,如日本鳗鲡(Anguilla japonica)、棘头梅童鱼、矛尾虾虎鱼(Chaeturichthys stigmatias)、刀鲚、焦氏舌鳎(Cynoglossus joyneri)、龙头鱼等。
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三沙湾浮游动物群落对水团季节变化的响应
《应用与环境生物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：三沙湾口小腹大,为我国典型亚热带海湾,受湾内外不同水团影响,其浮游动物生态类群不同季节变化显著,对研究浮游动物群落适盐性受湾外水团和湾顶大陆径流影响具有重要意义.本文通过研究三沙湾海域2010年6月、8月、10月和2011年4月、5月共5个航次浮游动物生态类群种数和丰度的时空分布,重点分析了其适盐性分布特征,并初步探讨了湾内外不同水团交替变化对浮游动物生态类群结构的影响.共鉴定浮游动物71种,其中近海种36种,外海种34种,热带大洋种1种;4月和5月,近海种种数比例分别为94.12%和78.95%,近海种丰度比例分别为98.46%和97.57%;6月、8月和10月,近海种种数比例分别为51.11%、42.86%和42.42%,近海种丰度比例分别为82.88%、40.07%和53.24%.研究表明,4月和5月,因受湾外浙闽沿岸流和湾内大陆径流影响,浮游动物以近海种为主,空间分布差异较小;6月、8月和10月,主要受湾外台湾暖流影响,大量外海种在湾内水域出现,并且空间差异显著,呈现出由湾内至湾外浮游动物外海种种数和丰度比例逐渐增大的趋势.
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鲜海带加工中甘露醇、碘及主要金属元素含量变化
《海洋渔业 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以新鲜海带(Laminaria japonica)为原料,采用直接烘干、漂烫后烘干和漂烫盐渍水洗后烘干三种不同处理方法加工,通过测定海带中甘露醇、碘、钙、铁、锌、铅、镉等含量,研究了不同处理方法对新鲜海带中甘露醇、碘及主要金属元素含量的影响。结果表明:(1)与直接烘干处理的海带相比较,漂烫后的海带中甘露醇的含量下降了72.96%,漂烫、盐渍水洗后的海带中甘露醇的含量下降了99.73%。(2)与直接烘干处理的海带相比较,漂烫后的海带中碘含量下降了72.24%;漂烫、盐渍水洗后的海带中碘的含量下降了90.14%;经漂烫、盐渍水洗后的海带碘含量为0.16 mg·g-1(以干基计)。(3)金属元素中铁的含量下降最为明显,经漂烫、盐渍后水洗的海带中铁含量下降了71.50%。
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